南蛇藤素对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响

目的 探讨南蛇藤素(Cel)对微小RNA(miR)-223-3p/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法 分别给予不同浓度的Cel(1、2、4μmol/L)培养经1μg/ml LPS诱导的hPDLSCs,以未处理的hPDLSCs作为对照组。采用MTT法检测细胞存活率,选取合适的Cel浓度用于后续实验研究。将对数生长期hPDLSCs分为对照组、LPS组、Cel组(2μmol/L),采用LipofectamineTM2000转染试剂盒在Cel组的基础上转染细胞miR-223-3p inhibitor及阴性对照(inhibitor NC),并命名为Cel+inhibitor NC组、Cel+miR-223-3p inhibitor组。分别检测以上各组细胞凋亡、增殖以及炎症因水平;q RT-PCR检测各组细胞中miR-223-3p表达水平,Western blot检测细胞中NLRP3蛋白及凋亡蛋白-天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)表达;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-223-3p、NLRP3靶向关系。结果 2μmol/L Cel作用细胞后其活力最高。与对照组相比,LPS组细胞存活率、mi R-223-3p表达显著下降,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,Cel组细胞存活率、miR-223-3p表达显著升高,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著降低(P<0.05);与Cel+inhibitor NC组相比,Cel+miR-223-3p inhibitor组LPS组细胞存活率、miR-223-3p表达显著下降,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P<0.05)。结论 Cel可以促进LPS诱导的hPDLSCs增殖,抑制细胞凋亡及炎症反应,可能与上调miR-223-3p、抑制NLRP3表达有关。

利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和炎症反应的影响

目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、低糖给药组(L+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)和高糖给药组(H+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)。采用CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞迁移能力,应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western blot法测定牙周膜成纤维细胞中Bax、Bcl-2表达水平,采用酶联免疫吸附法检测牙周膜成纤维细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、C反应蛋白(CRP)的表达水平。结果与L组相比,H组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移数量、胞内Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平升高(P<0.05)。H+G组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移细胞数量、胞内Bcl-2蛋白水平显著高于H组(P<0.05);而细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平则低于H组(P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的牙周膜成纤维细胞凋亡,通过调控Bax/Bcl-2表达和降低炎症反应,从而促进牙周组织愈合修复。

炎症与正常牙周膜来源牙周膜干细胞的成骨分化能力和自噬水平

背景:炎症影响牙周膜干细胞的成骨分化,同时牙周膜干细胞的成骨能力与自噬水平密切相关,但是炎症是否影响牙周膜干细胞成骨分化不同阶段的成骨能力与自噬水平尚未见相关报道。目的:探讨牙周膜干细胞在牙周炎和正常状态下的碱性磷酸酶表达和自噬水平。方法:分离培养健康人群与牙周炎患者的牙周膜干细胞,进行Vimentin、pan-CK和Stro-1荧光染色。正常和炎症牙周膜干细胞成骨分化3,7,14d时,Westernblot检测碱性磷酸酶、LC3B、Beclin1、ATG5的蛋白表达,real-time PCR检测碱性磷酸酶、骨唾液蛋白、骨钙素、Runx2、LC3B、Beclin1、ATG5的mRNA表达。结果与结论:(1)牙周膜干细胞内Stro-1阳性表达,Vimentin阳性表达,pan-CK阴性表达;(2)成骨分化3,7,14 d,与正常牙周膜干细胞相比,炎症牙周膜干细胞所形成的矿化结节明显减少(P<0.01),碱性磷酸酶的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05),骨唾液蛋白、骨钙素、Runx2的mRNA表达明显降低(P<0.05);(3)成骨分化7,14 d,与正常牙周膜干细胞相比,炎症牙周膜干细胞的ATG5、LC3B与Beclin1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。结果表明,炎症可减少牙周膜干细胞的矿化结节形成和碱性磷酸酶的表达,削弱牙周膜干细胞成骨分化7,14 d的自噬潜能。

成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体促进炎症微环境下人牙周膜干细胞成骨分化

背景:成骨诱导间充质干细胞来源外泌体具有较强的成骨分化能力,但是在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响尚不明确。目的:探究成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体在炎症微环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:收集离体牙并分离培养人牙周膜干细胞,成骨诱导3 d后提取外泌体。将人牙周膜干细胞分为4组:对照组加入成骨诱导培养基,外泌体组加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基,炎症模型和炎症模型+外泌体组以1μg/mL脂多糖处理24 h构建细胞炎症微环境,炎症模型组在脂多糖处理后加入成骨诱导培养基,炎症模型+外泌体组在脂多糖处理后加入含5μg/mL外泌体的成骨诱导培养基。通过茜素红以及碱性磷酸酶染色法检测各组人牙周膜干细胞的成骨分化能力;实时荧光定量PCR与免疫印迹法检测各组人牙周膜干细胞中Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)和wnt通路相关蛋白β-catenin的表达。结果与结论:(1)与对照组相比,炎症模型组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达量显著降低(P <0.05);(2)与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组碱性磷酸酶染色相对面积、矿化结节染色相对面积以及Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、OSX的表达显著升高(P <0.05);(3)与对照组相比,炎症模型组wnt通路相关蛋白β-catenin表达量显著增加(P <0.05);与炎症模型组相比,炎症模型+外泌体组β-catenin表达量显著降低(P <0.05)。结果表明,成骨诱导人牙周膜干细胞来源外泌体可促进炎症微环境下人牙周膜干细胞的成骨分化,其作用机制可能与wnt/β-catenin信号通路有关。

氧化铈纳米颗粒对炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化的影响

探究炎症微环境下氧化铈纳米颗粒 ( CeO2 NPs ) 对于牙周膜干细胞 ( PDLSCs ) 增殖及成骨分化影响。方法 通过牙龈卟啉单胞菌脂多糖( Pg-LPS )刺激模拟炎症微环境,评估CeO2 NPs 对Pg-LPS刺激的PDLSCs的影响,使用CCK-8法检测PDLSCs增殖,利用碱性磷酸酶染色、茜素红染色及成骨分化相关基因骨钙素(OCN )、碱性磷酸酶( ALP )、Ⅰ型胶原蛋白 ( Col-1 )的表达水平来检测 PDLSCs成骨分化能力。结果 在炎性微环境下, CeO2 NPs 增加OCN、ALP、Col-1 表达水平。染色结果表明炎症微环境下CeO2 NPs可以促进 PDLSCs 的成骨特性。结论 CeO2 NPs 可以促进炎症微环境中PDLSCs的成骨分化。

EPA对P.gingivalis LPS诱导人牙周膜成纤维细胞炎症反应的影响

目的:分析二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid,EPA)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)分泌炎症因子的作用。方法:利用组织块法培养hPDLCs,MTT法检测不同浓度EPA对hPDLCs细胞活性的影响。根据MTT结果选择合适的EPA浓度,分别采用实时定量PCR和ELISA法检测EPA对P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、IL-8和IL-1β能力的影响,采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:25~100μmol/L EPA对hPDLCs细胞活性无影响,但可呈剂量依赖性下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌IL-6、IL-8和IL-1β的能力。结论:EPA有望在不影响细胞活性的情况下,抑制P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌炎症因子的能力,EPA可能成为牙周炎抗炎治疗的潜在靶点。

铁死亡在炎症微环境中抑制牙周膜干细胞增殖及成骨分化的作用

目的:研究铁死亡在炎症微环境中抑制牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及成骨分化的作用。方法:培养PDLSCs,将不含药物培养基处理的细胞作为对照组,炎症组用含有10μg/L TNF-α的培养基处理,铁死亡激动剂组用含有10μg/L TNF-α及10μmol/L Erastin的培养基处理,铁死亡抑制剂组用含有10μg/L TNF-α及1μmol/L Ferrostatin-1的培养基处理。检测各组细胞增殖活力、转铁蛋白受体1 (Transferr in receptor 1,TfR1)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx4)的表达水平及成骨诱导分化后的钙结节数量、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活力、成骨标志基因Runt相关转录因子2 (Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的表达水平。结果:炎症组TfR1表达水平高于对照组、GPx4表达水平低于对照组(P<0.05)。炎症组处理第3、5、7d时的增殖活力,成骨诱导第21 d时的钙结节OD540水平,成骨诱导第7d时的Runx2、OCN、OPN表达水平均低于对照组(P<0.05);铁死亡激动剂组的上述指标低于炎症组、铁死亡抑制剂组的上述指标高于炎症组(P<0.05)。结论:炎症微环境下铁死亡的激活抑制PDLSCs的增殖及成骨分化。

乌梅丸通过调控NLRP3炎症小体改善溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡

目的:研究乌梅丸通过调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体改善溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡的作用及机制。方法:选择雄性SD大鼠进行动物实验,采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠的方式建立UC模型,造模后给予不同剂量乌梅丸灌胃,阴性对照(NC)-慢病毒(LV)或NLRP3-LV尾静脉注射。评价各组大鼠疾病活动指数(DAI),测量结肠长度,检测病理改变及组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达。结果:UC组大鼠结肠黏膜出现典型UC病理改变,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达高于对照组,结肠长度短于对照组(P<0.05);不同浓度乌梅丸组大鼠结肠黏膜UC病理改变改善,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达低于UC组,结肠长度长于UC组(P<0.05);高剂量乌梅丸灌胃同时注射LV,NLRP3-LV+UC+高剂量乌梅丸组大鼠结肠黏膜UC病理改变加重,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达高于NC-LV+UC+高剂量乌梅丸组,结肠长度短于NC-LV+UC+高剂量乌梅丸组(P<0.05)。结论:乌梅丸通过抑制NLRP3炎症小体改善UC大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡。

西藏门巴族人群胰岛细胞功能、脂质代谢、炎症反应与中医体质的相关性研究

目的探讨西藏门巴族人群胰岛细胞功能、脂质代谢和炎症反应与中医体质的相关性。方法选取2023年1月—2023年6月墨脱村、亚东村、朗杰岗村、巴日村、德吉村、玛迪村6个门巴族乡的门巴族人群进行调查,共计237例。分析人群中医体质分布情况,同时比较前三位中医体质人群的胰岛细胞功能、脂质代谢和炎症因子水平。结果中医体质类型中以痰湿质、湿热质和气虚质为主,分别占32.07%、26.16%和18.57%。痰湿质组、湿热质组和气虚质组性别、年龄、体质量指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。湿热质组空腹血糖和胰岛素抵抗指数分别为(4.98±0.83)mmol/L和(1.75±0.32),均低于痰湿质组和气虚质组(P<0.05),湿热质组胰岛β细胞功能指数为(94.45±9.11),均高于痰湿质和气虚质组(P<0.05);湿热质组总胆固醇和甘油三酯分别为(3.98±0.99)mmol/L和(1.02±0.29)mmol/L,均低于痰湿质组和气虚质组(P<0.05),湿热质组高密度脂蛋白胆固醇为(1.26±0.20)mmol/L,均高于痰湿质组和气虚质组(P<0.05)。痰湿质、湿热质和气虚质组血清白细胞介素-6、超敏c反应蛋白、肿瘤坏死因子-α比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论西藏门巴族人群中医体质以痰湿质、湿热质和气虚质为主,其中湿热质人群胰岛细胞功能、脂质代谢优于痰湿质和气虚质人群,炎症因子比较无差异。

细胞焦亡在急性胰腺炎炎症反应中的作用及中医药干预进展

急性胰腺炎(AP)是与炎症反应密切相关的急危重症,若进展为重症急性胰腺炎(SAP)病死率极高。细胞焦亡会导致剧烈的炎症反应发生。本文就近年细胞焦亡在AP中的作用、中医药治疗AP及中医药干预细胞焦亡等方面的概况进行综述,认为中医药可以从影响胰腺腺泡细胞焦亡的角度干预AP的炎症反应,起到治疗作用。但目前此方面的研究成果报道较少,需要进一步深入探索,以期为AP的基础研究和临床治疗提供新的思路。

丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞损伤的影响。方法该研究于2021年3月至2022年3月进行。体外培养人肾小球系膜细胞,采用30 mol/L葡萄糖诱导建立人肾小球系膜细胞细胞损伤模型,用丙泊酚浓度10、20、40μmol/L处理细胞,细胞分为对照组、高糖组、高糖+低、中、高剂量丙泊酚组。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛、活性氧、白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)IL-1β表达;蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达。结果高糖组的丙二醛[(16.7±1.7)mmol/L比(3.8±0.4)mmol/L]、活性氧[(9.6±0.9)μg/L比(3.5±0.3)μg/L]、IL-10[(65.3±6.9)ng/L比(26.9±3.2)ng/L]、TNF-α[(105.6±10.9)ng/L比(42.8±4.8)ng/L]和IL-1β[(79.7±8.2)ng/L比(31.2±3.6)ng/L]明显高于对照组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显高于对照组;SOD、GSH-Px明显低于对照组,均P<0.05。高糖+低剂量丙泊酚组、高糖+中剂量丙泊酚组、高糖+高剂量丙泊酚组的丙二醛、活性氧、IL-10、TNF-α和IL-1β明显低于高糖组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显低于高糖组,均P<0.05;SOD、GSH-Px明显高于高糖组,均P<0.05。结论丙泊酚能减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应,发挥保护肾脏的作用。

吴茱萸碱对H_(2)O_(2)诱导ARPE-19细胞的炎症反应、细胞凋亡和SIRT1表达的影响

目的 探究吴茱萸碱对H_(2)O_(2)刺激下人视网膜色素上皮细胞ARPE-19的炎症反应和细胞凋亡的影响,阐明去乙酰化酶1(SIRT1)在其中的作用和相关机制。方法 分别采用不同浓度的H_(2)O_(2)(0,25,50,100,200,400μmol/L)和不同浓度的吴茱萸碱(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0μmol/L)处理ARPE-19细胞,CCK-8法筛选H_(2)O_(2)和吴茱萸碱的最佳作用浓度。使用H_(2)O_(2)(200μmol/L)与不同浓度的吴茱萸碱(2.5,5,10,20μmol/L)联合处理ARPE-19细胞,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达情况。按处理方式的不同将ARPE-19细胞分为二甲基亚砜处理的对照组、200μmol/L H_(2)O_(2)处理组(H_(2)O_(2)组)、200μmol/L H_(2)O_(2)与不同浓度吴茱萸碱处理组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组)及100μmol/L的SIRT1抑制剂Sirtinol拮抗组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组),处理24 h后,ELISA法检测各组ARPE-19细胞上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平,Annexin V-FITC/PI染色检测各组ARPE-19细胞的凋亡率,Western blot法检测各组ARPE-19细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)、环氧化酶-2(COX-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果 200μmol/L的H_(2)O_(2)对ARPE-19细胞的生长抑制相对稳定。0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L的吴茱萸碱对ARPE-19细胞活力无明显影响(P均>0.05),40μmol/L吴茱萸碱可明显降低ARPE-19细胞活力(P均<0.05)。H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱各组ARPE-19细胞中SIRT1蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱5μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中SIRT1蛋白相对表达量均明显高于H_(2)O_(2)组(P均<0.05),且H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组升高更明显。与对照组比较,H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显升高(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显降低(P均<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显高于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量明显低于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P<0.05),各指标与H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 吴茱萸碱可在体外通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB通路、线粒体介导的凋亡通路和PI3K/Akt通路,从而减轻H_(2)O_(2)刺激下ARPE-19细胞的炎症反应,减少细胞凋亡。

肝细胞癌预后相关的炎症反应关键基因的筛选及其预后价值

目的:筛选与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后密切相关的炎症反应关键基因,构建预后风险评分模型,并评估该模型在HCC中的预后价值。方法:从TCGA数据库获取HCC患者肝肿瘤组织及正常肝组织的mRNA表达数据作为训练集,从GEO数据库中获取HCC患者的mRNA表达数据作为验证集。筛选出与HCC预后相关的炎症反应相关基因,运用LASSO回归和随机生存森林(RSF)方法筛选与HCC预后相关的炎症反应关键基因。基于这些关键基因构建预后风险评分模型并验证,应用Cox比例风险回归评估该模型对患者预后的影响。构建列线图并进行一致性分析。结果:共筛选出15个与HCC预后相关的炎症反应基因,经LASSO回归和RSF分析,确定11个炎症反应关键基因,即IL18RAP、MEP1A、RIPK2、CYBB、SLC7A1、ADM、IL7R、P2RX4、ACVR2A、SERPINE1、SLC7A2。构建的预后风险评分模型在训练集和验证集上预测1、3、5年生存率,AUC值均超过0.60;Kaplan-Meier分析显示高风险组总生存期(OS)显著低于低风险组(P<0.01);PCA和t-SNE分析显示该模型能有效区分高、低风险患者。Cox回归分析提示预后风险评分是独立的预后因素,且与OS显著相关(P<0.01)。列线图模型C-index为0.672,具有较高的预测精度,1年和3年校准曲线与标准曲线吻合度好,5年吻合度稍弱。结论:本研究成功构建并验证了一个基于炎症反应相关基因的风险评分模型,筛选出的11个炎症反应关键基因(IL18RAP、MEP1A、RIPK2、CYBB、SLC7A1、ADM、IL7R、P2RX4、ACVR2A、SERPINE1、SLC7A2)与HCC进展密切相关,且在模型中显示出较强的预后预测能力。

血浆纤维蛋白原、全身炎症反应指数对非转移性肾透明细胞癌患者的预后判断价值

目的 探讨血浆纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)、全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index, SIRI)对非转移性肾透明细胞癌(Non-metastatic renal cell carcinoma, nmRCC)患者的预后判断价值。方法 选择2018年1月-2022年12月苏州大学附属第二医院收治的146例nmRCC患者为研究对象,采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic,ROC)曲线确定FIB、SIRI诊断高Fuhrman分级(Ⅲ~Ⅳ级)的最佳截断值,并根据最佳截断值将患者分为高、低FIB组和高、低SIRI组。比较不同FIB、SIRI水平患者临床病理参数与生存预后的差异。用多因素Cox风险模型分析影响患者总体生存时间(Overall survival, OS)、肿瘤特异生存时间(Cancer specific survival, CSS)、无复发生存时间(Disease free survival, DFS)的独立危险因素。ROC曲线分析FIB、SIRI单独及联合检测对患者预后不良的预测效能。结果 患者FIB、SIRI水平越高,肿瘤直径越大,TNM分期及Fuhrman分级越高(P<0.05)。与低FIB组相比,高FIB组患者的总体生存率显著较低(χ^(2)=8.385,P=0.003);与低SIRI组相比,高SIRI组患者的总体生存率显著较低(χ^(2)=10.029,P<0.001)。Cox多因素分析显示,FIB水平、SIRI水平、肿瘤直径、Fuhrman分级、TNM分期均是影响患者OS、CSS、DFS的独立性危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,FIB、SIRI预测肾透明细胞癌患者预后不良的曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为0.735、0.799,敏感性分别为62.6%、67.4%,特异性分别为659%、72.3%,二者联合检测的AUC为0.852,敏感性为71.2%,特异性为76.6%。结论 高FIB与高SIRI是nmRCC患者不良生存预后的危险因素,二者联合检测对患者预后不良的预测效能更高。

慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性

目的研究慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性。方法选择300例慢性牙周炎患者,按照牙龈卟啉单胞菌感染情况分为阳性组和阴性组。比较两组牙周健康指标、牙周组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1 mRNA和GSDMD-N蛋白表达水平,以及龈沟液白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用Pearson检验进行相关性分析。结果阳性组菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)、牙周袋深度(PD)、牙周组织NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA、GSDMD-N蛋白,以及龈沟液IL-1β、IL-18、TNF-α水平均高于阴性组(P<0.05)。NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平与PLI、GI、AL、PD、GSDMD-N蛋白、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均呈正相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌感染加重病情、炎症反应及细胞焦亡,其作用可能与激活NLRP3炎症小体有关。

炎症微环境下过表达Wnt5a对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

背景慢性炎症环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)生物学功能受损是牙周炎患者组织再生治疗困难的关键原因。作为非经典Wnt/Ca2+信号通路的分泌型配体,Wnt5a在干细胞生长发育及炎症性疾病中发挥着关键作用,但炎症微环境下Wnt5a对hPDLSCs增殖和成骨分化的影响尚不明确。目的探讨炎症微环境下过表达Wnt5a对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化能力的影响。方法收集健康离体牙,参照酶消化法分离培养原代hPDLSCs。使用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激hPDLSCs,构建体外炎症微环境。按照阴性对照组、过表达组、TNF-α+阴性对照组、TNF-α+过表达组进行实验分组。成骨诱导条件下实时定量PCR检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、TNF-α、成骨关键基因Runt相关转录因子2(recombinant runt related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(collagen-1,COL-1)和Wnt5a信号分子的m RNA表达变化;利用慢病毒转染技术获取过表达Wnt5a的hPDLSCs;CCK-8法测定Wnt5a对hPDLSCs增殖的影响;成骨诱导培养后,ALP染色、茜素红S(alizarin red S,ARS)染色用于评价过表达Wnt5a对hPDLSCs成骨分化能力的影响,实时定量PCR和Western blot法检测过表达Wnt5a后hPDLSCs中成骨标志物RUNX2和COL-1的mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组相比,炎症组中IL-1β、IL-6、TNF-α及Wnt5a的mRNA表达增加(P均<0.01),而成骨相关基因RUNX2(P=0.031)、ALP(P<0.01)、COL-1(P=0.014)的m RNA表达下降;慢病毒感染48 h后在荧光显微镜下观察到细胞呈GFP绿色荧光,与阴性对照组相比,过表达组中Wnt5a的mRNA及蛋白表达量显著增加(P均<0.01);CCK-8结果表明过表达组细胞活力较阴性对照组增强(P<0.01),但TNF-α+过表达组与TNF-α+阴性对照组相比,细胞增殖活力下降(P<0.01);成骨诱导条件下,过表达组中成骨早期标志物COL-1、RUNX2的mRNA(P均<0.01)和蛋白(P均<0.01)表达水平及钙结节形成量降低;但在炎症微环境下,与TNF-α+阴性对照组相比,TNF-α+过表达组中COL-1和RUNX2的mRNA(P=0.022;P=0.016)和蛋白(P均<0.01)表达水平升高,ARS染色显示其着色深度及钙结节形成量增加,ALP染色显示细胞体外矿化能力增强。结论炎症微环境下hPDLSCs中Wnt5a表达上调。正常培养条件下过表达Wnt5a后,hPDLSCs增殖能力增强、骨向分化能力降低。但在TNF-α刺激的炎症微环境下,过表达Wnt5a抑制hPDLSCs增殖、促进hPDLSCs成骨分化。慢性牙周炎过程中,hPDLSCs可能通过Wnt5a非经典通路调节成骨和增殖过程。

IL38促进牙周膜干细胞的炎症反应

目的利用牙周膜干细胞研究细胞因子IL38是否参与牙周炎的炎症反应过程。方法利用20μg/mL牙龈卟啉单胞菌脂多糖Pg-LPS刺激牙周膜干细胞24 h建立牙周炎炎症体外模型;利用IL38 siRNA、IL38过表达质粒及相应对照进行牙周膜干细胞的转染,进而研究IL38对牙周膜干细胞炎症反应的影响;利用qPCR方法检测牙周膜干细胞中炎症细胞因子的释放,利用Western blot检测P50及P65蛋白质表达情况,利用CCK-8实验检测牙周膜干细胞的增殖情况。结果IL36亚家族中只有IL38在Pg-LPS刺激牙周膜干细胞中显著上升;在正常及炎症状态下,IL38沉默降低了细胞因子IL17A、TNFA及IL1B的mRNA表达水平,但IL38过表达逆转了上述结果;Western blot结果表明,IL38过表达促进P50及P65蛋白质表达水平;IL38过表达也增加了牙周膜干细胞的增殖,而IL38沉默抑制了其增殖能力。结论在体外实验中,IL38具有刺激牙周膜干细胞炎症细胞因子表达及增殖的能力。

糖肾宁通过调控巨噬细胞源外泌体减轻小鼠肾小球足细胞炎症反应的机制研究

目的以巨噬细胞源外泌体为切入点,观察糖肾宁对体外高糖诱导的小鼠肾小球足细胞炎症反应的影响,探讨其保护足细胞的可能机制。方法采用糖肾宁干预高糖条件培养的巨噬细胞,分为正常组、高糖组、糖肾宁组,干预48小时后,提取各组细胞上清液中外泌体,将各组外泌体分别干预高糖和非高糖条件培养的小鼠肾小球足细胞,分为正常外泌体—高糖组、高糖外泌体—高糖组、糖肾宁外泌体—高糖组、正常外泌体—非高糖组、高糖外泌体—非高糖组、糖肾宁外泌体—非高糖组、无外泌体—高糖组和无外泌体—非高糖组等8个组。48小时后,收集各组细胞并进行相关检测。CCK-8法检测各组细胞活力,酶联免疫法检测各组细胞上清液中炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的蛋白表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞炎症因子(MCP-1、TNF-α、IL-6)的表达情况。结果在高糖或非高糖环境下的足细胞中,与正常外泌体干预的足细胞相比较,高糖外泌体干预的足细胞细胞活力下降(P<0.05),炎症因子(MCP-1、TNF-α、IL-6)的基因和蛋白表达均增加(P<0.05);而与高糖外泌体干预的足细胞相比,糖肾宁外泌体干预的足细胞细胞活力有所升高(P<0.05),各炎症因子的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05)。结论糖肾宁能通过调控巨噬细胞源外泌体减轻小鼠肾小球足细胞炎症反应。

老化黑碳颗粒诱导人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y炎症反应及机制

以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为研究对象,分析被臭氧氧化的黑碳(oxidized black carbon,OBC)颗粒引起的炎症反应以及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylin-ositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路的作用.结果显示:随着OBC颗粒染毒质量浓度的增加(5、10、20、40µg/mL),细胞内线粒体跨膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平逐渐下降,DNA损伤程度逐渐升高,呈现质量浓度和时间依赖性;细胞外泌白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平升高和细胞内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因高表达,说明OBC颗粒会促进SH-SY5Y细胞发生炎症反应;细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因表达量升高,且HO-1蛋白水平升高,说明细胞发生氧化应激;胞内NF-κB和PI3K/Akt通路相关蛋白显著变化,表明OBC颗粒激活了NF-κB和PI3K/Akt信号通路.综上,OBC颗粒可诱导SH-SY5Y细胞发生氧化应激造成DNA损伤,促进炎症反应,且对NF-κB和PI3K/Akt信号通路有重要调控作用.

卡格列净减轻心肌梗死后细胞凋亡及炎症反应改善预后

目的探究在心肌梗死(MI)后使用卡格列净(CANA)对心脏炎症反应及细胞凋亡的作用。方法选用15只8~10周龄C57/BL6小鼠(SPF级),用抽签法随机抽取5只小鼠为Sham组(假手术+生理盐水灌胃),剩余10只小鼠通过结扎左冠状动脉前降支的方法制作MI模型,制作成功后的10只MI小鼠随机分为2组:MI组(生理盐水灌胃)、CANA+MI组(CANA灌胃),每组5只。CANA+MI组小鼠以20 mg/(kg·d^(-1))卡格列净灌胃4周,Sham组及MI组则使用同等体积生理盐水灌胃4周。4周后,使用小鼠超声机测量左室收缩末期内径及左室射血分数。苏木精染色、Tunel染色用于明确心脏结构及MI后细胞凋亡状况。IF免疫荧光染色用于检测MI后心脏炎症反应程度。Western blotting用于检测炎症及凋亡相关蛋白表达水平。结果与MI组相比,CANA+MI组左室射血分数升高、梗死面积减小。Tunel染色显示,CANA+MI组小鼠MI边缘区凋亡细胞数量较MI组显著减少,相应促凋亡蛋白Bax表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高。CANA+MI组小鼠CD3^(+)T细胞、F480^(+)巨噬细胞和LY6G^(+)中性粒细胞数量较MI组明显减少,相关蛋白p-P65、p-IκBα表达量明显降低。结论CANA抑制了MI后心脏炎症反应,减轻了细胞凋亡。