脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质成骨效果的对比研究

目的比较骨缺损区植入脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质的成骨效果。方法制备脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质。将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为脱矿组(A组)、脱细胞组(B组)、Bio-Oss骨粉组(C组)、空白组(D组),每组6只大鼠,在麻醉条件下制备双侧股骨骨缺损。A、B、C组大鼠分别在骨缺损区植入脱矿牙本质基质、脱细胞牙本质基质、Bio-Oss骨粉,D组大鼠不植入任何材料。术后4周和8周,每组各随机处死3只大鼠。大体观察骨缺损区愈合情况,血清学检测成骨指标骨形态发生蛋白(BMP)-2及碱性磷酸酶(ALP)浓度,影像学观察骨缺损区高密度灰色区(代表骨愈合)分布情况,组织形态学观察新骨形成情况,计算新骨形成率。结果术后4周和8周,大体观察见A组成骨能力较其他组活跃,血清学检测A组BMP-2及ALP浓度均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。8周时,影像学观察可见A组骨缺损区高密度灰色区分布均匀,组织形态学观察见A组排列规则的骨基质。A组4、8周时的新骨形成率分别为28.51%±0.55%、32.57%±2.28%,均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脱矿牙本质基质比脱细胞牙本质基质具有更好的成骨潜能。

甲基丙烯酸酐改性明胶/经处理牙本质基质生物活性支架的制备及性能

背景:牙髓-牙本质再生一直是近几年研究的热点及难点,构建复合生物支架材料为牙髓-牙本质再生提供了新的思路与方法。目的:观察甲基丙烯酸酐改性明胶/经处理牙本质基质支架对人牙髓干细胞增殖、迁移与成骨分化的影响。方法:将不同质量的经处理牙本质基质分散至甲基丙烯酸酐改性明胶溶液中,使甲基丙烯酸酐改性明胶与经处理牙本质基质的质量比分别为2∶1、1∶1、1∶2,采用冷冻干燥法制备甲基丙烯酸酐改性明胶/经处理牙本质基质支架,检测支架的微观形貌、吸水率及机械性能。采用不同质量比的支架浸提液、DMEM培养基(对照组)分别培养人牙髓干细胞,检测细胞增殖与迁移情况。采用不同质量比的支架浸提液+成骨诱导液、DMEM培养基+成骨诱导液(对照组)分别培养人牙髓干细胞,碱性磷酸酶染色分析成骨能力。结果与结论:①扫描电镜下可见3组支架均具有多孔结构,随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,支架的孔隙率升高,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,支架的吸水率升高,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,支架的抗压强度、剪切强度增大。②CCK-8检测显示培养3,5,7 d,2∶1、1∶1、1∶2支架组细胞增殖吸光度值均高于对照组(P<0.05),并且随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,细胞增殖吸光度值升高(P<0.05);细胞划痕实验显示2∶1、1∶1、1∶2支架组细胞迁移率均大于对照组(P<0.05),并且随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,细胞迁移率增大(P<0.05)。③碱性磷酸酶染色显示,2∶1、1∶1、1∶2支架组细胞成骨分化能力均强于对照组,并且随着支架中经处理牙本质基质质量的增加,细胞成骨能力增强。④结果表明,甲基丙烯酸酐改性明胶与经处理牙本质基质质量比为1∶2的支架最适合牙髓干细胞的增殖与分化。

处理牙本质基质浸提液对牙髓干细胞成牙分化的影响

目的:观察处理牙本质基质(TDM)浸提液对牙髓干细胞(DPSC)成牙分化的诱导作用及可能机制。方法:取健康离体牙,采用梯度脱矿法制备TDM并收集TDM浸提液。将分离培养的DPSC分为2组,分别用正常培养基(正常对照组)和TDM浸提液(TDM组)培养7 d。采用Western blot法检测2组细胞中成牙相关蛋白(DSPP、DMP-1、Runx2、ALP),GSK3β,磷酸化GSK3β(Ser9)及活化的β-catenin蛋白的表达,采用免疫荧光染色定位活化的β-catenin。结果:与正常对照组比较,TDM组成牙相关蛋白表达均升高,GSK3β磷酸化水平与活化的β-catenin蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示活化的β-catenin定位在细胞核中,且TDM组活化的β-catenin荧光强度强于正常对照组。结论:TDM浸提液可以促进DPSC成牙分化,其机制可能与抑制GSK3β、激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

脱矿牙本质基质作为牙源性干细胞支架材料的研究进展

组织工程利用细胞、生物活性材料和细胞外基质的相互协作来实现组织再生。脱矿牙本质基质作为组织工程中的支架材料,能够模拟细胞外基质微环境,促进干细胞的牙源性分化,用于牙髓、牙本质和牙周组织的再生。牙组织工程中将脱矿牙本质基质搭载牙源性干细胞用于修复牙髓暴露及牙根再生,能够在机体内重现牙体组织的解剖结构并行使功能,有望在未来替代传统盖髓剂修复受损患牙,替代传统种植牙修复并实现牙再生。

牙本质基质颗粒大小及脱矿条件对其性能的影响

目的观察牙本质基质制备粒度与脱矿程度对其性能的影响。方法选取成年家兔的上颌门牙随机分为2组,A组:采用稀盐酸(HCL)溶液(浓度1 mol/L)脱矿45 min,干燥后制备成3种不同粒径(400μm以下、400-800μm、800-1200μm)的脱矿牙本质基质材料(Demineralized dentin matrix,DDM),进行扫描电镜及静态接触角检测;B组:采用3种不同浓度(1 mol/L、0.5 mol/L和0.25 mol/L)的HCL溶液脱矿45 min,干燥后制备成粒径400μm以下的牙本质基质材料,分别进行红外光谱检测及电子能谱仪钙元素测定。结果扫描电镜显示粒径400μm以下的DDM材料呈片状,随机观察牙本质小管充分暴露。A组3种DDM材料的静态接触角由粒径从小到大分别为6.0°、67.0°和96.7°。B组红外光谱检测显示:随着HCL溶液浓度增大,DDM材料中以羟基磷灰石为代表的无机物含量随之降低(P<0.05),但胶原的含量受影响较小;钙元素测定显示:在一定范围内随着脱矿程度增加,样品钙含量呈现梯度式降低(P<0.05)。结论粒径较小的DDM材料牙本质小管暴露更充分,且具有更优的亲水性,脱矿程度的增加会降低DDM材料中无机物的含量,但对胶原含量影响较小。

2种脱矿处理牙本质基质表面结构及促hPDLCs成骨性能研究

目的比较不完全脱矿牙本质基质——经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)和完全脱矿牙本质基质——脱矿牙本质基质(demineralized dentin matrix,DDM)的材料制备、表面特性及对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)增殖与成骨分化的影响,为研究牙齿来源的骨替代材料治疗牙周骨缺损提供实验依据。方法以人离体牙分别采用乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)溶液梯度脱矿的方法制备TDM和通过盐酸浸泡完全脱矿的方法制备DDM,通过扫描电镜观察其表面结构;通过培养液浸泡法制备TDM和DDM的浸提液。将h PDLCs分为3组:TDM组(加入TDM浸提液)、DDM组(加入DDM浸提液)、对照组(加入含10%血清的培养液),分别诱导培养hPDLCs。通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测hPDLCs增殖情况,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达和矿化结节形成情况。结果 TDM表面疏松多孔、结构完整,三维结构性能优于DDM。TDM组和DDM组hPDLCs增殖能力均强于对照组,TDM组细胞增殖能力强于DDM组(F=36.480,P <0.05);TDM组细胞ALP活性高于DDM组;成骨诱导14 d后TDM组和DDM组均可见茜素红标记的矿化结节,TDM组多于DDM组。结论 TDM表面结构、促进hPDLCs增殖和成骨分化的能力均优于DDM,其有望作为牙周骨缺损的新型骨替代材料。

脱钙牙本质基质在肌肉中诱导成骨现象的观察

采用自制的脱钙牙本质基质（decalcifieddentinmatrix，DDM）植入家兔股部肌肉陷窝内，观察DDM是否具有异位诱导成骨活性。用生物活性玻璃陶瓷（bioactiveglassceramics，BGC）植入和空白作为对照。结果发现，DDM植入区术后2周有骨样组织形成，3周可见骨小梁形成，4周形成板状骨。BGC植入区或空白对照区无骨形成。说明DDM具有异位诱导成骨活性。

牙本质基质非胶原性蛋白

牙本质基质非胶原性蛋白赵大为综述史俊南审校西安第四军医大学口腔医学院（７１００３２）细胞外基质是在个体发育过程中，由细胞合成并分泌到细胞外的生物大分子所构成的网络状物质，在牙本质基质中，胶原约占９０％，其余蛋白被称为非胶原性蛋白（Ｎｏｎｃｏｌｌａｇｅ...

脱钙牙本质基质填充颌骨囊肿术后残留骨腔的临床应用

目的观察脱钙牙本质基质植入治疗颌骨囊肿刮治术后骨腔的疗效。方法对32例颌骨囊肿刮治术后骨腔范围为2～5cm的病例采用脱钙牙本质基质进行填充。结果所有切口均愈合良好,无1例出现术后感染和排异反应。患者X线片显示术后1个月后囊腔内已有骨小梁影像,3个月后新生骨小梁与周围骨质无明显区别。结论脱钙牙本质基质用于充填颌骨囊肿刮治术后残留骨腔有较好疗效。

脱钙牙本质基质充填颌骨囊腔的疗效观察

目的观察脱钙牙本质基质植入治疗颌骨囊肿刮治术后骨腔的疗效。方法对32例颌骨囊肿刮治术后骨腔范围为2～5cm的病例采用脱钙牙本质基质进行填充。结果所有切口均愈合良好,无一例出现术后感染和排异反应。患者X线片显示术后1个月后囊腔内已有骨小梁影像,3个月时新生骨小梁与周围骨质无明显区别。结论脱钙牙本质基质用于充填颌骨囊肿刮治术后残留骨腔有较好疗效。

牙本质基质在组织再生中的应用

组织器官病变严重影响到人们的生活质量,组织器官缺损可能威胁人们的生命,组织、器官缺损的修复和功能重建是现代医学面临的挑战。组织工程为再生组织器官带来希望。组织工程支架为细胞的生长、增殖和分化提供了微环境,而且影响着形成组织的大小和形态。牙本质基质作为一种天然的生物活性支架,具有良好的生物相容性,在组织工程中得到广泛的应用,成为研究热点。学者们以牙本质基质为支架,开展了包括牙根、牙周、牙髓、骨等软硬组织缺损修复的研究,取得了一系列重要进展。本文对牙本质生物学特性、牙本质基质在组织再生中的应用等进行综述,为临床应用牙本质基质进行组织再生提供参考。

脱钙牙本质基质-丝素蛋白支架对人牙周膜干细胞的成骨分化影响

为研究脱钙牙本质基质(decalcified dentin matrix,DDM)与丝素蛋白(silk fibroin,SF)复合多孔三维复合支架(DDM-SF)对体外培养的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSC)成骨分化的影响。在-20℃冻干条件下,将6%SF、1%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)以体积比7:3(30%v/v)与DDM构建复合支架,红外光谱仪检测DDM-SF支架的特性波长,分别测定SF和DDM-SF的孔径和压缩强度,XRD测定DDM-SF的空间结构,BET检测复合材料的孔隙率。培养HPDLSC接种到支架上,CCK-8法检测细胞在支架上的增殖,扫描电镜观察细胞与支架的结合。采用研磨法提取支架细胞蛋白,行Westernblot检测。SF、DDM-SF分别埋入大鼠头部皮下后分期取出进行组织切片HE染色。DDMSF红外光谱特征吸收峰在3442 cm^-1、1033 cm^-1、3500 cm^-1谱峰;30%DDM-SF(v/v)孔径(106.6370±25.4454)μm、压缩强度(87.3333±13.6504)MPa。经检测DDM-SF的结构呈三维空间结晶结构,材料孔隙率98%。检测结果证实DDM-SF复合支架在促进成骨、细胞增殖、材料吸收速度方面均优于对照组。因此,经冷冻干燥条件下制作的多孔DDM-SF复合支架可促进HPDLSC的成骨分化和增殖。

牙本质基质在口腔组织缺损修复中的研究进展

牙本质基质是以自体牙本质为基础,去除釉质、牙骨质和牙髓后,将剩余的牙本质通过完全脱矿或梯度脱矿、冲洗、冻干和磨碎等工序[1],产生的脱细胞基质材料[2]。其矿物质主要包括四种具有较高溶解度的低结晶磷灰石磷酸钙,分别是羟基磷灰石、β-磷酸三钙、无定形磷酸钙和磷酸八钙。由于钙、磷的含量和结合方式与自体皮质骨非常相似,因此其在颌面骨缺损修复及骨移植材料选择中占据优势[3]。牙本质基质依赖丰富的有机成分,在口腔组织工程中也发挥了促进作用。

富血小板血浆复合脱钙牙本质基质修复颌骨缺损的实验研究

目的:观察大鼠富血小板血浆与人脱钙牙本质基质复合物修复大鼠下颌骨缺损的疗效,探讨其作为组织工程骨的有效性。方法:分别参照Urist法和Landersberg法制备脱钙牙本质基及富血小板血浆,在扫描电镜下观察两者复合物的三维空间结构。建立36只雄性SD大鼠下颌角部4 mm圆形全厚骨缺损模型,随机分为P组在骨缺损处填入富血小板血浆;D组在骨缺损处填入脱钙牙本质基质;PD组在骨缺损处填入富血小板血浆-脱钙牙本质基质复合物;空白组,不加任何材料。术后2周,6周,10周每组处死3只大鼠,摘取下颌骨,通过组织学及X线观察下颌骨组织修复情况。应用Image Pro Plus 6.0软件计算每个时间点各组标本X线片新生骨面积,计算新生骨面积占骨缺损总面积百分比。结果:术后各组标本骨缺损区均有新骨形成,成骨量随时间延长而增加。经影像学和组织学评估,各组的成骨能力依次为:PD组>D组>P组>空白组,P组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中PD组成骨能力最强。结论:脱钙牙本质基质与富血小板血浆的复合物能促进和加速骨缺损的修复,有望成为一种新型组织工程骨。

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。

光交联复合水凝胶支架中人牙髓干细胞的成骨/成牙分化能力

背景:甲基丙烯酸酐改性明胶(gelatin-methacryloyl,Gel-MA)与经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)在一定比例下经过紫外线交联后形成的复合水凝胶支架具有良好的孔隙率、机械性能、溶胀性能及生物降解率,这为临床上年轻恒牙的牙髓再生提供了新的思路和方法。目的:探究1∶2质量比Gel-MA/TDM复合光交联水凝胶支架对人牙髓干细胞增殖能力及成骨/成牙本质分化能力的影响。方法:将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中,采用CCK-8实验检测人牙髓干细胞在复合水凝胶支架中的增殖能力。将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中并进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色及茜素红染色观察矿化结节的形成情况,采用RT-PCR检测成牙相关因子(牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白)和成骨相关因子(骨钙素、Runt相关转录因子2)的基因表达。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,前7 d的牙髓干细胞增殖能力明显升高,第10天时速度减缓;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性及矿化结节生成强于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05);③RT-PCR结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞中牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的基因表达量明显高于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05),且14 d基因表达量明显高于7 d(P<0.05)。结果表明,培养在1∶2 Gel-MA/TDM复合水凝胶支架上的牙髓干细胞表现出较好的增殖能力,能够强化牙髓干细胞的成骨、成牙本质分化能力。

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞骨钙素分泌的影响

目的 :探讨甲状旁腺激素 ( parathyroidhormone ,PTH)对人牙乳头间充质细胞矿化能力的影响。 方法 :细胞在对照组 (含 φ =15 %FCS、10mmol/Lβ 磷酸甘油和 5 0 μg/ml抗坏血酸的DMEM培养液 )和实验组 (含33.3nmol/LPTH的对照组培养液 )连续培养 35d ,每 3～ 4d换液一次。放射免疫检测骨钙素含量。结果 :人牙乳头间充质细胞的对照组和PTH组骨钙素的水平均较低 ,2 1d后 2组骨钙素水平升高 ,实验组高于对照组P <0 .0 5。结论 :PTH可促进人牙乳头间充质细胞的分化和矿化 。

牙髓中血管内皮生长因子的研究进展

血管内皮生长因子是一种重要的血管生成因子,主要由血管内皮细胞产生。目前研究发现牙髓及牙本质基质中也存在少量的血管内皮生长因子,在细菌脂多糖或脂磷壁酸的诱导下出现反应性增加,可能参与一些生理、病理的调控。本文就V E G F在牙髓中的生物学活性和功能及其研究进展作一综述。

牙髓损伤机理进展及五倍子对牙髓细胞损伤调节作用

牙髓组织主体细胞是牙髓成纤维细胞。它不仅能产生明胶状基质和胶原纤维，而且可被诱导分化为成牙本质细胞，由于牙髓组织自身解剖的特点，在其受到损伤、细菌及其他理化因素刺激时会发生一系列病理生理反应，牙髓损伤或感染时其储备的未分化问充质干细胞迁移至损伤处增殖、分化为成牙本质样细胞，分泌牙本质基质，