牙本质非胶原蛋白诱导牙髓-牙本质复合体反应的动物实验观察

目的:观察提取的猪牙本质非胶原蛋白对修复性牙本质形成的诱导活性。方法:用提取的猪EDTA可溶性牙本质非胶原蛋白作盖髓剂,对Wistar大鼠的健康第一磨牙进行直接盖髓实验,采用氢氧化钙(Dycal)和空白组为对照,通过组织学实验观察牙髓-牙本质复合体的反应。结果:盖髓术后7 d,各组之间软、硬组织反应的差异无统计学意义。术后14 d,NCPs组和Dycal组的修复反应均明显优于空白对照组(P<0.01),且NCPs组对牙髓的刺激小于Dycal组(P<0.05)。结论:NCPs对牙髓刺激性小,可以诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞样细胞,形成修复性牙本质,其诱导活性至少与常规盖髓剂相当。

牙本质非胶原蛋白对大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性和矿化能力的影响

目的:探讨EDTA提取的牙本质非胶原蛋白(DNCP)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞生物学性能的影响。方法:通过MTT法、碱性磷酸酶活性检测、茜素红染色和氯代十六烷基吡啶定量检测法观察EDTA提取的DNCP对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖活性和矿化能力的影响。结果:经DNCP诱导1、3、5、7、9d,各浓度组大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性与对照组无差别(P>0.05);诱导后5d和7d时,10μg/mL组和1μg/mL组均可上调大鼠骨髓间充质干细胞ALP活性,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);诱导3周后,茜素红染色显示10μg/mL组出现较大的红色结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组(P<0.05)。结论:DNCP对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖活性影响不明显;高浓度DNCP可促进大鼠骨髓间充质干细胞的ALP活性和矿化形成能力。

牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响

目的:明确牙本质非胶原蛋白(dentin non-collagenous proteins,dNCPs)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及矿化能力的影响。方法:通过细胞活性噻唑蓝(MTT)比色法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10μg/mL dNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响。结果:dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异(P>0.05);诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异(P<0.01);诱导2周后,茜素红染色显示10μg/mL dNCPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组(P<0.001)。结论:10μg/mL dNCPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。

牙本质非胶原蛋白对人根尖牙乳头干细胞增殖及分化能力的影响

目的:探讨牙本质非胶原蛋白(DNCPs)对人根尖牙乳头干细胞(h SCAPs)增殖及分化能力的影响。方法:h SCAPs经DNCPs诱导后,用MTT法检测细胞增殖能力;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定ALP;RT-PCR检测ALP、骨钙素(OCN)及I型胶原(Col I)的m RNA表达变化;茜素红矿化结节染色及定量检测DNCPs对h SCAPs分化能力的影响。结果:DNCPs诱导1、3、5、7 d时,h SCAPs的增殖活性与对照组相比无显著差异(P>0.05);诱导7、14 d时,h SCAPs的ALP、Col I和OCN m RNA表达水平均显著上调(P<0.05);诱导3、5、7 d时,h SCAPs的ALP活性明显上调(P<0.05);诱导3周后,茜素红染色显示DNCPs诱导组的钙化结节形成能力明显高于对照组(P<0.05)。结论:DNCPs可明显促进h SCAPs矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。

牙本质非胶原蛋白与羟基磷灰石矿化作用的研究

目的 探讨牙本质非胶原蛋白与羟基磷灰石矿化作用 方法 在体外矿化系统中利用人牙本质非胶原蛋白与羟基磷灰石结合进行诱导矿化实验，通过扫描电镜观察生成物的形貌变化，X线衍射及等离子发射光谱分析生成物的组分和结构。结果 结合有人牙本质非胶原蛋白的羟基磷灰石表面有矿化物形成，该矿化物钙磷比约为1.33，其X线衍射结果与钙磷灰石更为相似。结论 人牙本质非胶原蛋白与一定的支持物紧密结合后具有诱导矿化的作用。

DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的浓度优化

目的探讨牙本质非胶原蛋白(DNCP)诱导大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的最适浓度。方法取妊娠12.5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,DNCP诱导浓度分别为10、50、100、200、500、1 000μg/mL,观察细胞形态变化,诱导6d后采用定量RT-PCR检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达。结果6d后除10μg/mL组和1000μg/mL组外,其他诱导组细胞出现极性改变,部分细胞出现平行排列趋势;细胞表达DSPP和DMP1,以200μg/mL组最强,500μg/mL组和200μg/mL组表达量相当,而1 000μg/mL组细胞死亡。结论在DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中过低浓度不利于成牙本质细胞的分化,而过高浓度则引起细胞死亡。200μg/mL是较为合适的有效诱导浓度。

2种不同成牙本质诱导液对大鼠脂肪干细胞增殖凋亡的影响

目的探索2种不同的成牙本质诱导液——牙胚条件培养液(TGC-CM)和牙本质非胶原蛋白(DNCPM)对大鼠脂肪干细胞增殖和凋亡的影响。方法 (1)取出生4d的SD乳鼠4只,分别取腹股沟脂肪组织,用酶消化法进行脂肪干细胞分离和培养,免疫细胞化学法对细胞进行鉴定。(2)2种诱导液作用细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖情况,Annexin/PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 (1)细胞培养至第2代时表型分子CD44和CD105表达呈阳性。(2)经TGC-CM及DNCPM培养3d后形态上发生极性改变。培养6d后,TGC-CM培养的细胞数量未见明显改变,而DNCPM培养的细胞密度明显降低。(3)MTT结果显示DNCPM组OD值低于对照组及TGC-CM组(P<0.05),流式细胞凋亡检测仪检测DNCPM组细胞凋亡率高于TGC-CM组和对照组(P<0.05)。结论作为大鼠脂肪干细胞向成牙本质样细胞方向分化的诱导液,TGC-CM可能更具优势。

牙本质生物矿化机制的研究

牙本质是牙齿中主要的矿化胞外基质 ,其晶体基本结构为羟磷灰石 (HA) ,晶体中存在一种纳米粒子 ,参与牙本质初始晶体的形成。牙本质非胶原蛋白在HA成核及生长中起着重要作用。钙的转运在牙本质矿化过程中以跨细胞转运为主。

dNCPs、TGF-β1及联合应用对人牙髓成纤维细胞增殖、ALP及矿化的影响

目的 :观察牙本质非胶原蛋白 (dentinnon collageproteins ;dNCPs)、转化生长因子 (transforminggrowthfactor ;TGF β1)及联合应用对人牙髓成纤维细胞生物学特性的影响。 方法 :利用混合酶消化法成功培养了人牙髓成纤维细胞 ,角蛋白及波形丝蛋白鉴定其来源。在细胞中分别加入牙本质粉、dNCPs、TGF β1及其复合物 ,通过MTT、ALPase和Von Kossa染色检测其作用。 结果 :dNCPs和TGF β1可显著增加细胞的增殖及ALPase分泌 ,细胞可聚集成团形成矿化结节。 结论 :dNCPs和TGF β1可改变人牙髓成纤维细胞的生物学活性 ,但两者间无相互促进作用。

TGF-β1、dNCPs及TGF-β1/dNCPs复合物对组织工程牙髓形成促进作用的研究

目的 研究转化生长因子 (TGF- β1)、牙本质非胶原蛋白 (d NCPs)及 TGF- β1/ d NCPs复合物对组织工程牙髓形成的促进作用。 方法 使用 型胶原及牙本质粉构建牙髓细胞的三维培养模型 ,按不同分组分别在组织工程牙髓中加入 TGF- β1、d NCPs及 TGF- β1/ d NCPs复合物 ;对照组中不加入以上物质。培养 3、6和 14天 ,在不同时间点行 HE染色 ,观察细胞的形态变化。牙本质涎蛋白 (DSP)免疫组织化学观察牙髓细胞向成牙本质细胞的诱导。 结果 胶原可形成凝胶网状结构 ,牙髓细胞的生长状况与体内牙髓细胞相似。加入 TGF- β1和 d NCPs后 ,培养第 6天部分牙髓细胞开始出现成牙本质样细胞的一些特性 ,出现单侧细胞突起 ;培养第 14天 ,牙本质粉区域附近细胞呈高柱状平行排列 ,形成类似体内的牙本质牙髓复合物。免疫组织化学染色可见部分细胞出现 DSP的表达 ,其中 TGF- β1组阳性细胞最多 ,复合物组次之 ,d NCPs组最少 ;而对照组未发现 DSP的表达。 结论 TGF- β1和 d NCPs可不同程度地刺激牙髓细胞向成牙本质样细胞转化 ,促进组织工程牙髓的形成。