猪发育期牙胚釉原蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备

目的 制备猪釉质蛋白多克隆抗体 ,为釉原蛋白的检测提供条件。方法 选择 1月龄乳猪 ,分离埋于上下颌骨内的牙胚 ,刮取牙胚表面干酪样尚未完全矿化的釉质基质 ,通过盐酸胍抽提及SephadexG_2 0 0柱层析分离纯化猪发育期牙胚釉原蛋白 ,联合免疫家兔 ,抗血清经DE_5 2纤维素纯化 ,并经ELISA测定抗体效价。结果 SDS_PAGE电泳结果发现采用SephadexG_2 0 0葡聚糖凝胶过滤能达到较为理想的釉原蛋白分离纯化效果 ,用所提纯的猪釉原蛋白免疫家兔 ,成功地制得兔抗猪釉原蛋白抗血清 ,抗血清稀释达 1∶32 0 0 0时 ,采用ELISA法仍有明显的抗原抗体反应。结论 本实验成功制备得到抗釉原蛋白多克隆抗体 ,为釉原蛋白的检测提供了条件。