灯盏花素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞损伤的影响

目的探讨灯盏花素(breviscapine,BVP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(porphyromonas gingivalis,Pg-LPS,简称LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)损伤的影响。方法体外培养HGFs细胞,分为对照组、LPS组、LPS+BVP低、中、高剂量组。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)及凋亡相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;TBA比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;二氢荧光素二乙酸酯(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组比较,LPS组HGFs细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+BVP低、中、高剂量组细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著降低(P<0.05)。结论BVP可通过抗炎、抗氧化作用减轻LPS诱导的HGFs细胞损伤。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对活性中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)对活性中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的影响及可能的调控机制。方法:采用25 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和0.3μg/mL P.gingivalis LPS刺激人中性粒细胞35 min,免疫荧光显微镜下观察活性NETs的形成,酶标法对胞外DNA定量,PCR法检测构成NETs的DNA来源。检测产生活性NETs的中性粒细胞感染P.gingivalis后胞内外的细菌数量,以明确NETs的杀菌效果;流式细胞术检测细胞产生的活性氧(ROS)水平;Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Raf)、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化水平。结果:GM-CSF+P.gingivalis LPS可促进线粒体DNA来源的活性NETs形成和胞外DNA数量的增加(P<0.05),增强中性粒细胞对P.gingivalis的杀菌活性(P<0.05)。与阴性对照组相比,GM-CSF+P.gingivalis LPS刺激的中性粒细胞ROS和Raf、MEK、ERK磷酸化水平均明显增高(P<0.05)。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂DPI处理后,GM-CSF+P.gingivalis LPS组胞外DNA数量降低,ROS水平降低(P<0.01)。结论:GM-CSF+P.gingivalis LPS可能通过Raf、MEK、ERK磷酸化调控ROS生成,促进人中性粒细胞形成活性NETs,进而促进P.gingivalis的清除,调控牙周免疫炎症反应。

生长停滞特异性蛋白6在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞黏附因子及趋化因子表达中的作用

目的:探讨维生素K依赖的生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6,一种维生素K依赖性蛋白,参与细胞增殖、存活、黏附和迁移,也在炎症反应中起重要作用)在牙龈卟琳单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达黏附因子和趋化因子过程中的作用。方法:在血管内皮细胞中过表达和敲低Gas6基因后,用1 mg/L P.g-LPS刺激血管内皮细胞3 h和24 h,利用实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和E选择素(E-selectin),以及趋化因子白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的表达。过表达或敲低Gas6基因后,细胞划痕实验检验内皮细胞迁移的生物学功能表型的变化。结果:P.g-LPS刺激3 h后,敲低Gas6组的黏附因子及趋化因子的表达情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),过表达Gas6组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降81%±0%、47%±3%、76%±3%和26%±6%,P<0.01);P.g-LPS刺激24 h后,敲低组的黏附因子及趋化因子表达情况与对照组相比显著升高(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1上调的倍数分别是2.06±0.07、1.99±0.11、3.14±0.15和1.84±0.03),过表达组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降29%±1%、62%±3%、69%±1%和41%±2%),实验组与对照组黏附分子及趋化分子表达差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞划痕实验结果显示,敲低Gas6组细胞迁移能力与对照组相比增强,过表达组细胞迁移能力较对照组弱,与realtime PCR检测结果趋势一致。结论:下调Gas6基因后,P.g-LPS促进ICAM-1、E-selectin、IL-8和MCP-1表达作用增强,上调Gas6基因后,P.g-LPS促进ICAM-1、E-selectin、IL-8和MCP-1表达作用减弱,各细胞因子表达量与Gas6表达趋势相反,提示Gas6在内皮细胞炎症状态下的黏附过程中可能发挥抑制作用。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF48h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖促进牙龈成纤维细胞的自噬

目的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙龈成纤维细胞(HGF)自噬功能的影响。方法以10μg/mL Pg-LPS刺激HGF 12 h或24 h,采用雷帕霉素作为阳性对照,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,间接免疫荧光技术检测自噬体的分布;同时使用MitoSOX Red荧光探针标记线粒体活性氧(mtROS)、间接免疫荧光法检测自噬体,观察Pg-LPS处理后HGF mtROS与线粒体自噬水平;分别以叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)以及辅酶Q10(CoQ10)阻断ROS,Western blot法检测Pg-LPS刺激后LC3B的表达量。结果 Pg-LPS处理后LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值与自噬体数量均显著升高,并且24 h处理组高于12 h处理组,同时mtROS生成量与线粒体自噬均明显增加。此外CoQ10可有效降低Pg-LPS诱导的HGF自噬。结论 Pg-LPS在HGF中通过触发mtROS活化自噬,并且自噬参与受损线粒体的降解以维持细胞内环境稳态。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalisLPS作用6 h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coliLPS作用2 h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均能在蛋白水平上调ICAM-1的表达,这种上调作用呈浓度和时间依赖,且P.gingivalisLPS的作用较之E.coliLPS要缓和。结论:P.gingivalisLPS能够在转录和翻译水平上调HAECs表达ICAM-1,提示P.gingivalisLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥了重要作用。E.coliLPS可能与急性炎症性疾病有关而与AS无关。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对树突状细胞成熟及功能影响的体外研究

目的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis-LPS)的刺激对大鼠树突状细胞(DCs)成熟及功能的影响,为探索DCs在牙周炎的发生发展中的作用机制提供实验依据。方法采用流式细胞学方法检测P.gingivalis-LPS和大肠杆菌脂多糖(E.coli-LPS)刺激下,CD11c^+MHCⅡ^+、CD11c^+CD80^+、CD11c^+CD86^+和CD11c^+CD40^+DCs的比率;采用ELISA法检测DCs分泌白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)和白介素-13(IL-13)的量。采用CCK8法检测与上述DCs共培养的CD4+T细胞的增殖;采用ELISA法检测T细胞分泌IL-2、IFN-γ、IL-10和IL-13的量。在上述的培养系统中加入Toll样受体4(TLR4)抑制剂(polymyxin B,PmB)或TLR2/TLR4抑制剂(oxidation of 1-palmitoyl-2-arachidonyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine,OxPAPC),观察TLR抑制剂对上述DCs成熟及功能的影响。结果 P.gingivalis-LPS与E.coli-LPS均能刺激DCs成熟。TLR4抑制剂明显抑制E.coli-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能,对P.gingivalis-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能没有显著抑制。TLR2/TLR4抑制剂对P.gingivalis-LPS组DCs成熟和抗原提呈功能显著抑制。P.gingivalis-LPS组DCs分泌IL-12和IFN-γ的量低于E.coli-LPS组(P<0.05);P.gingivalis-LPS组DCs分泌IL-10和IL-13的量高于E.coli-LPS组(P<0.05)。与P.gingivalis-LPS和E.coli-LPS共培养的DCs均能促进CD4+T细胞增殖。与P.gingivalis-LPS组DCs共培养的T细胞分泌IL-2和IFN-γ的量低于E.coli-LPS组(P<0.05);其分泌IL-10的量高于E.coli-LPS组(P<0.05)。结论 P.gingivalis-LPS能促进DCs的成熟和抗原提呈功能。P.gingivalis-LPS刺激下的DCs促进Th2型免疫应答;E.coli-LPS刺激下的DCs促进Th1型免疫应答。P.gingivalis-LPS通过TLR2通路刺激DCs成熟;E.coli-LPS通过TLR4通路刺激DCs成熟。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙龈成纤维细胞炎症刺激作用的研究

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)刺激人牙龈成纤维细胞(HGFs)分泌炎症细胞因子的作用及其机制。方法组织块法培养HGFs,用不同浓度(1mg/L、10mg/L)的P.gLPS刺激HGFs后6h和12h,采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),定量real-timePCR检测Toll样受体(TLR)2和TLR4在HGFs中的表达。结果与非P.gLPS刺激组相比较,P.gLPS刺激HGFs6h和12h后,TLR2的表达和炎症细胞因子TNF-α、IL-1β分泌显著升高,呈浓度依赖性(P<0.05),而且随时间的延长TNF-α、IL-1β分泌明显增加(P<0.05)。TLR4在P.gLPS刺激HGFs6h后的表达明显升高(P<0.05),随着P.gLPS浓度增加其表达量升高更明显,但LPS刺激细胞12h后,TLR4的表达与对照组无明显差别(P>0.05)。结论 P.gLPS能刺激HGFs分泌炎症细胞因子,可能是早期主要通过其表面的TLR2、TLR4来介导炎症细胞因子的分泌,随后主要通过其表面的TLR2来介导炎症反应。

比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β能力及相关信号通路受体的差异

目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS)诱导人单核巨噬细胞株THP-1和人粒细胞白血病细胞株HL-60分泌白介素-1β(interleukin,IL-1β)能力差异,并了解其相关Toll样受体。方法采用酚水法提取牙龈卟啉单胞菌ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS)。采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β水平。采用TLR2或TLR4抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合不同靶细胞上Toll样受体的类型。实验中采用大肠杆菌脂多糖(E-LPS)作为Pg-LPS对照。结果1μg/mlPg-LPS作用6h或1μg/mlE-LPS作用24h,THP-1细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),但Pg-LPS和E-LPS诱生的细胞因子最高浓度相近(P>0.05)。而1μg/mlPg-LPS作用24h或1μg/mlE-LPS分别作用48h,HL-60细胞分泌的IL-1β水平明显升高(P<0.01),且Pg-LPS诱生的最高浓度明显高于E-LPS(P<0.05),但HL-60细胞分泌的上述胞因子最高浓度均明显低于THP-1细胞(P<0.01);TLR2和TLR4抗体均可有效阻断Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05),但仅发现TLR2抗体可阻断Pg-LPS诱导HL-60细胞分泌IL-1β的活性(P<0.05)。E-LPS诱导THP-1细胞或HL-60细胞分泌IL-1β的活性仅可被TLR4抗体所阻断(P<0.05)。结论Pg-LPS诱导THP-1和HL-60细胞分泌IL-1β高于E-LPS。TLR2和/或TLR4作为Pg-LPS受体取决于细胞种类。

牙龈卟啉单胞菌—脂多糖对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌-脂多糖(P.g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响。方法:在体外将P.g-LPS与HUVEC共培养,根据P.g-LPS浓度分为空白对照组、50 pg/ml组、100 pg/ml组、1ng/ml组及10 ng/ml组。培养36 h后采用甲基噻唑基四唑(MTT)法及流式细胞仪分别测定细胞增殖活力及凋亡情况,并通过免疫印迹标记法(Western blot)检测caspase-3激活情况。结果:经P.g-LPS处理后,HUVEC增殖活力较空白对照组明显下降(P<0.01),且随着P.g-LPS浓度增加,HUVEC增殖活力也逐渐下降(P<0.01),而细胞发生凋亡及caspase-3激活情况却随之增加。结论:P.g-LPS可抑制内皮细胞增殖活力,caspase-3激活从而诱导内皮细胞产生凋亡。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖在高糖条件下对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)在高糖条件下对血管内皮细胞表达内皮细胞黏附因子-1(ICAM-1)的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为正常糖组(NG组)、正常糖+P.gingivalis-LPS组(NGL组)、高糖组(HG组)和高糖+P.gingivalis-LPS组(HGL组),分别给予含正常糖(5.5mmol/L)或高糖(33mmol/l)的培养基在有或无P.gingivalis-LPS(5μg/ml)作用的条件下培养4小时、12小时和24小时,采用实时定量PCR技术(Real-time PCR)和蛋白质印迹技术(Western Blotting)检测血管内皮细胞ICAM-1 mRNA和蛋白表达的情况。结果:与正常糖组比,单纯高糖组和单纯P.gingivalis-LPS组可增加ICAM-1 mRNA的表达,其峰值分别发生在实验因素作用4小时和12小时。与其他三组比较,高糖和P.gingivalis-LPS共同作用24小时可显著增加ICAM-1 mRNA的表达(P<0.05),同时其蛋白表达水平也明显提高。结论:高糖和P.gingivalis-LPS共同作用24小时可在基因和蛋白水平增加HUVEC表达ICAM-1。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对多形核白细胞凋亡的影响

目的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人的外周血中多形核白细胞的凋亡作用。方法通过流式细胞仪对10名健康人外周血中多形核白细胞培养组(对照组)与不同浓度的牙龈卟啉单胞菌脂多糖和多形核白细胞共同培养组(实验组)进行比较研究,观察多形核白细胞的凋亡情况。结果实验组和对照组相比,多形核白细胞凋亡数明显减少(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖以浓度依赖的形式延缓多形核白细胞的凋亡,细菌延缓细胞凋亡在牙周可疑致病菌的致病机制中可能具有重要的作用。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达小凹蛋白-1的影响

目的:初步研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)表达的影响,并探讨P.g-LPS与动脉粥样硬化(atherolerosis,AS)之间的关系。方法:体外培养HUVECs,选择不同浓度的P.g-LPS(0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L)诱导刺激6、18、24、36 h,采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测P.g-LPS对HUVECs增殖的影响,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HUVECs表达Cav-1的量,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Cav-1 mRNA的表达。结果:P.g-LPS与HUVECs共培养后,增殖活力较对照组下降,并随着P.g-LPS浓度增加,HUVECs增殖活力明显下降(P<0.05)。与对照组比较,P.g-LPS诱导HUVECs Cav-1蛋白表达在18 h可升高,24、36 h持续高表达,36 h表达水平最高(P<0.05);P.g-LPS诱导HUVECs Cav-1 mRNA表达在18 h可升高,24、36 h随着浓度的增加,Cav-1 mRNA表达量增加(P<0.001)。结论:P.g-LPS能够明显抑制HUVECs的增殖活性,上调细胞Cav-1的蛋白以及分子水平表达。提示P.g-LPS感染可能引起内皮细胞功能障碍,从而加速AS的发生与发展。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖促进人牙周膜干细胞组蛋白甲基化转移酶PRDM9的表达研究

目的研究牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)对牙周膜间充质干细胞(PDLSCs)组蛋白甲基化转移酶PRDM9的作用及调控机制。方法选择不同浓度的Pg. LPS处理PDLSCs;利用实时定量RT-PCR的方法检测多种组蛋白甲基化转移酶在mRNA水平的表达变化;此外在Pg. LPS处理细胞的同时加入0.5μg/ml TLR4中和抗体,比较阻断及未阻断情况下筛选出的差异基因在mRNA水平的表达变化。结果实时定量RT-PCR结果显示PDLSCs在10μg/ml Pg. LPS刺激24 h和48 h后,组蛋白甲基化转移酶PRDM9基因表达量显著升高,具有时间相关性。选用1、5和10μg/ml的Pg. LPS处理PDLSCs,48h后检测到PRDM9表达量升高与Pg. LPS呈剂量相关性;与对照组相比阻断TLR4信号通路使得PRDM9的表达量明显下调。结论 Pg. LPS能够激活TLR4信号通路进而促进组蛋白甲基化转移酶PRDM9基因的表达。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜细胞成骨分化能力的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)对人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化的影响,探索其作用机制。方法:I型胶原酶+组织块法获得HPDLCs后,分3组培养细胞:α-MEM培养(A组)、成骨诱导液培养(B组)和1μg/m L P.g LPS+成骨诱导培养(C组)。MTT法检测3组HPDLCs的增殖能力;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及其OD值分析,观察HPDLCs的成骨分化能力;采用实时定量PCR检测第3天、第7天以及第14天成骨相关基因的表达。结果:B组与C组细胞增殖无明显差异(P>0.05);B组和C组ALP染色及茜素红染色均为阳性,两者茜素红OD值与A组相比明显增高(P<0.05),但C组OD值明显低于B组(P<0.05);B组与C组中成骨相关基因的表达均较A组升高,但与B组相比,C组成骨相关基因水平下降(P<0.05)。结论:P.g LPS通过抑制成骨相关基因的表达,干扰HPDLCs的成骨分化能力,从而影响牙周组织在成骨方面的自我修复。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖及荚膜多糖诱导THP-1细胞分泌IL-8的分析

目的·分离牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)及荚膜多糖(CPS),分析两者体外诱导人单核细胞系THP-1细胞分泌IL-8的能力。方法·采用凝胶过滤色谱法分离已获得的Pg ATCC33277及SJD4多糖混合物,并作用于THP-1细胞。采用ELISA法检测THP-1细胞在不同菌株LPS和CPS的不同浓度及不同作用时间下,其上清液中IL-8的含量。结果·成功分离获得ATCC33277及SJD4的LPS及CPS,其相对分子质量分别为20 000~50 000及150 000~500 000;分离所得LPS及CPS均具有体外诱导THP-1细胞分泌IL-8的能力,且存在时间-剂量效应;在0.1μg/m L浓度下,模式菌株ATCC33277的LPS诱导能力均显著高于其CPS(均P<0.05),而临床菌株SJD4在作用24 h时其CPS的诱导能力显著高于LPS(P<0.05)。结论·CPS作为Pg多糖提取物的组成成分,可单独体外诱导THP-1细胞分泌IL-8,且存在时间-剂量效应。

IL-12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用

目的观察白细胞介素-12(IL-12)预刺激在牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalisLPS)促泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响。方法用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)将人THP-1单核细胞来源的巨噬细胞诱导48 h形成泡沫细胞。在巨噬细胞和泡沫细胞培养液中分别加入IL-12作用2 h后,巨噬细胞培养液中加入oxLDL和P.gingivalisLPS,泡沫细胞培养液中加入P.gingivalisLPS。使用ELISA法检测培养液上清中IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,实时定量PCR检测细胞内IL-1β、IL-10、IL-12和IL-18 mRNA的转录水平。结果在泡沫细胞形成过程中,IL-12预刺激可以降低培养液上清内TNF-α水平,降低细胞内IL-10和IL-12 mRNA转录水平;泡沫细胞受P.gingivalisLPS刺激过程中,IL-12预刺激可以增加培养液上清IL-1β水平,减少细胞内IL-18 mRNA的转录水平,增加IL-10 mRNA的转录水平。结论IL-12预刺激影响P.gingivalisLPS促泡沫细胞形成过程中炎症细胞因子的转录和分泌。

Notch通路对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导人牙周膜细胞表达RANKL/OPG的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)后Notch信号通路的表达及其对RANKL/OPG表达的影响。方法:酶消化法结合组织块法原代培养hPDLCs,取第三代至第五代细胞给予0.1、1、10μg/ml Pg-LPS刺激72h,Real-time PCR检测RANKL/OPG mRNA的表达,并选择最佳诱导浓度1μg/ml组,采用Real-time PCR检测Notch通路Notch1-2、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL-1以及Hey-1表达受体配体及目的基因表达。随后,以γ-分泌酶抑制剂DAPT预处理hPDLCs 1h,予1μg/ml Pg-LPS刺激72h后,Real-time PCR、Western-Bloting检测Notch通路目的基因Hey-1及RANKL/OPG m RNA、蛋白水平的表达。结果:1μg/ml Pg-LPS可显著上调hPDLCs RANKL、Notch通路受体Notch4、配体DLL-1、Jagged-1及目的基因Hey-1的表达(P<0.05);而对OPG、Nocth1-2、Jagged-2 m RNA水平表达无明显影响(P>0.05)。此外,γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制Pg-LPS诱导RANKL及Hey-1 m RNA及蛋白的表达上调,而仅对OPG m RNA表达有影响(P<0.05)。结论:Notch信号通路参与调控Pg-LPS诱导的hPDLCs RANKL/OPG表达。

低浓度牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激骨唾液酸蛋白的基因表达和转录

目的研究低浓度牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞系(ROS17/2.8)中骨唾液酸蛋白(Bonesialoprotein,BSP)基因表达和转录的调节作用,以及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)转导途径阻断剂(U0126)对此调节作用的影响。方法0.01mg/LP.g·LPS作用ROS17/2.8细胞0h、3h、6h和12h后,用Northern杂交观察BSP和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)mRNA的表达;再将ROS17/2.8细胞随机分为四组:空白对照组、LPS(0.01mg/LP.g·LPS)组、U0126(5μmol/L)组、U0126+LPS组(U0126预刺激细胞30min后,U0126与P.g·LPS共同作用),各组持续作用12h后,用瞬时转染法分析BSP基因启动子的转录活性。结果0.01mg/LP.g·LPS作用ROS17/2.8细胞12小时后BSP和OPN的mRNA杂交条带增强;0.01mg/LP.g·LPS使BSP基因启动子(pLUC3)转录活性值与空白载体活性值的比值升高1.582(F=5.734,P<0.05),U0126使其降低2.693(F=11.500,P<0.01),U0126使LPS对比值的升高变化降低2.242(F=6.204,P<0.05)。结论低浓度(0.01mg/L)P.g·LPS增强ROS17/2.8细胞BSP基因表达和转录,而且其对BSP基因转录活性的上调作用是经由ERK1/2信号转导路径介导的。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖引起牙周炎症的机制和特点

革兰阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌和牙周炎密切相关,脂多糖是革兰阴性菌外膜中的主要结构成分,具有广泛的生物学活性,被认为是革兰阴性菌的主要毒力因子之一。本文就牙龈卟啉单胞菌脂多糖的化学组成和结构,所启动炎症信号通路及其起始受体,引起牙周炎症的机制和特点作一综述。