用牛αS1-酪蛋白基因构建乳腺生物反应器表达载体的研究

牛αS1-酪蛋白基因是制备乳腺生物反应器常用的表达载体,可以指导外源基因在动物乳腺中高水平表达。对牛αS1-酪蛋白基因的结构、表达载体的各种调控元件及其研究应用进展等方面作一综述。

牛αS1-酪蛋白基因5’-调节区的分子克隆

用牛αSl-酪蛋白cDNA作探针,从牛基因组文库中筛选出一段αSl-酪蛋白基因序列。由限制内切酶图谱和Southern印迹分析可以确定其中含有完整的αSl-酪蛋白基因的5’调节区。

乳腺特异性人α-乳白蛋白真核表达载体的构建

从正常人血液中提取人基因组DNA。以其为模板,扩增人α-乳白蛋白(α-LA)2.36kb的总DNA序列,经测序鉴定后,将其连接到PSV载体SV40启动子后,构建真核表达载体LA-DNA-psv.扩增牛XS1-酪蛋白5'调控序列约1.2kb的片段,测序鉴定。切去LA-DNA-psv载体原来的SV40启动子,连接牛αS1-酪蛋白5'调控序列约1.2kb的片段为启动子,构建真核表达载体αS1-LA-DNA-psv。为在动物乳腺中特异高效表达人α-乳白蛋白做准备研究。