牛Ⅰ型胶原的性能表征及标准样品研制

以牛Ⅰ型胶原作为研究对象,胶原标准样品研制为目标,对其红外光谱特征、三螺旋结构、热稳定性、氨基酸覆盖率、端肽残留、分子质量等主要性能指标进行分析,将羟脯氨酸含量作为判定依据对产品的均匀性进行分析;利用SDS-PAGE法对其稳定性进行分析;以8家实验室测定的羟脯氨酸含量进行定值和不确定度分析。结果表明,该产品的各项性能指标符合胶原蛋白的质量要求。该牛Ⅰ型胶原产品在95%置信区间内均匀性良好;在4℃放置2周、4周,25℃放置1周、2周,反复冻融1次、3次和5次及在-20℃放置6个月,产品稳定性良好;羟脯氨酸含量的定值结果为11.17%,置信度为95%时扩展不确定度为0.03(k=2)。因此,该牛Ⅰ型胶原可作为国家标准样品用于胶原产品的质量评价。

高效液相色谱-质谱法测定牛Ⅰ型胶原含量

建立了一种基于高效液相色谱-质谱联用技术并通过特征多肽进行牛Ⅰ型胶原含量检测的方法。胶原海绵样品经酶解处理后进行色谱分离,在电喷雾离子源正离子扫描及保留时间依赖的单离子监测模式(SIM)下测定,外标法定量。采用胰蛋白酶特异性酶解得到牛Ⅰ型胶原的1个特征多肽为GFSGLDGAK。该多肽在0.645~21.5μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r^2=0.9994);方法的定量下限为6.45×10^-4μg/mL;在3.10、2.48、1.55μg/mL 3个加标水平下,平均回收率为98.2%~102%;峰面积的相对标准偏差(n=6)为0.80%。胶原海绵样品经均匀性、稳定性和定值检测,确保了方法有效性,验证了该产品质量,且测得牛Ⅰ型胶原含量为(0.926±0.014)mg/mg。该方法简便快速,重现性好、稳定性高,可有效地对牛Ⅰ型胶原进行定量。

Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜对鸡趾屈肌腱损伤术后生物力学的影响

目的:从生物力学角度探讨Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜预防肌腱粘连作用。方法:三黄鸡,3月龄,60只,雌雄各半,体重1.5～2.0 kg,以右足第3趾屈趾深肌腱断裂1/2吻合模型,随机分为假手术组、对照组和Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜组,再根据取材时间分为2周组、4周组、6周组、8周组4个亚组,术后2、4、6、8周对吻合端周围粘连程度观察和对包括患侧及健侧第3趾关节屈曲角度、肌腱滑动距离、肌腱最大抗断裂负荷的生物力学检测。结果:Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜在术后2、4、6、8周,与假手术组及对照组比较,粘连程度评分明显优于假手术组及对照组(P<0.05);生物力学指标测定显示,关节屈曲角度、肌腱滑动距离、肌腱最大抗断裂负荷各项指标,实验组均优于对照组(P<0.05)。结论:Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜可以减少粘连,提高肌腱生物力学指标,具有一定的预防粘连的作用,是一种有效的预防肌腱粘连的新型生物性材料。

用毛细管电泳法表征牛胶原——一种替代凝胶电泳法的方法

在胶原的制备过程中，毛细管电泳法已经被用来分析胶原组分的谱图。在毛细管电泳实验中我们用Bio—Rad CE—SDS蛋白质进行胶原组分的动态过滤离析（DSCE）。最佳条件是用尺寸为24cm（or36cm）×50μm的未涂层的毛细管，在10kV×10s条件下进行电泳，操作电压为15kV，毛细管温度为20℃，紫外检测仪的波长定为220nm。这只是初步确定步骤。在胶原浓度为0．125～1．25mg／mL范围内本实验具有很好的重复性（每个峰的RSDs值为1％～5％），试验溶液的响应也呈线性。用DSCE法对牛皮胶原进行电泳所得到的组分图形不论是从数量上还是相对丰度上都与在相同条件下被考马斯蓝染色的SDS—PAGE凝胶扫描图相似。

Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜预防屈指肌腱损伤术后粘连的临床研究

目的:探讨Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜预防屈指肌腱损伤术后粘连的疗效。方法:选取符合诊断标准的屈指肌腱损伤患者72例,随机分为对照组和治疗组各36例。两组均采用改良的Kessler肌腱缝合法修复肌腱,治疗组用Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜包绕吻合肌腱断端,对照组采用同一方法修复但未使用Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜,充分止血后关闭伤口。术后第4周、8周分别对两组伤指的总主动活动度(TAM)测定,比较其差异性并行统计学分析。结果:所有病例均获得随访,术后两组伤指均有不同程度的肿胀、疼痛,所有病例伤口均一期愈合,无1例感染。①术后第4、8周,治疗组与对照组比较,肌腱总主动活动度测定结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。②术后第8周末伤指总主动活动度测定,治疗组优良率为83.34%,对照组优良率为50%,治疗组优良率明显高于对照组。结论:Ⅰ型牛胶原蛋白生物膜应用于临床预防肌腱粘连疗效确切,显著促进手功能的恢复,且其操作方法简单、安全性较高,为防止组织粘连特别是肌腱领域开辟了新途径。