奶牛乳头瘤病毒病防控方案

一、病因牛乳头瘤病毒(BPV)可引起乳头瘤(BPV-6)或纤维乳头瘤(BPV-1和BPV-5)。奶牛最常见的病变是扁平“米粒样”纤维乳头瘤。乳头或乳房上的复叶状疣表现有较多的上皮性突起。当后者发生在乳头末端时,可以造成乳房炎高发,体细胞升高等问题,乳头瘤病毒具有传染性,主要通过带有病毒的挤奶机和挤奶工的手臂感染创伤乳头引起。

牛乳头瘤病毒基因2型流行株全基因组的克隆及序列分析

为了解牛乳头瘤病毒(Bovine Papillomavirus,BPV)新疆流行株基因型及其基因组遗传变异情况,用乳头瘤病毒L1基因简并引物FAP59/FAP64对新疆沙湾县奶牛皮肤肿瘤组织样品进行PCR扩增,测序后确定,BPV基因型;设计6对BPV基因型特异性引物,经扩增、测序、拼接后获得BPV流行株全长基因组序列。L1基因序列分析表明,BPV2-SW01流行株为BPV-2基因型;该毒株基因组全长7 944bp,包括E6、E7、E1、E8、E2、E4、E3、E5、L2和L1 10个开放阅读框(ORF)。遗传进化树分析显示,BPV2-SW01归于Delta乳头瘤病毒属,与BPV-1和BPV-13进化关系最近。

博宁霉素霜剂对牛乳头瘤病毒所致奶牛乳头瘤的疗效观察

目的 观察博宁霉素霜剂对牛乳头瘤病毒所致奶牛乳头瘤的疗效。方法 将临床患病牛随机分为 2组每次将药物和基质分别涂于试验牛及对照牛乳头皮肤的肿瘤上 ,每日 3次 ,连续进行 10 d。结果 试验组 2例指状乳头状瘤分别于第 6天和第 9天完全脱落 ;4例扁平瘤虽未脱落 ,但瘤体表面均发生明显的剥蚀 ;对照组均未发生此类现象。结论 博宁霉素霜剂对奶牛乳头的皮肤无损害作用 ,但可选择性地使指状乳头瘤脱落 ,扁平瘤剥蚀、脱皮 ,呈现良好的治疗作用。

牛乳头瘤病毒基因1型贵州GZLZ流行株全基因组序列测定及分析

为了解牛乳头瘤病毒(BPV)GZLZ流行株全基因组序列、结构特征及遗传变异情况,本研究首先提取贵州六枝患病牛皮肤肿瘤样品DNA,以BPV L1基因的简并引物对其进行PCR扩增,测序并构建BPVL1基因进化树确定其为BPV1基因型。根据GenBank中BPV1参考株设计7对特异性引物,经扩增、测序、拼接后获得BPV流行株全基因组序列。序列分析显示,贵州六枝GZLZ流行株基因组全长为7 946 bp,具有BPV1基因型的结构特征。本研究为贵州地区的牛乳头状瘤的病原鉴定、流行规律以及科学的防控提供依据。

牛乳头瘤病毒2型L1基因的克隆及原核表达

为表达牛乳头瘤病毒2型(BPV2)衣壳蛋白L1基因,本研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料样品中扩增BPV2沙湾分离株L1基因,克隆至pMD18-T载体中,测序后进行分析。将BPV2沙湾株L1基因亚克隆于原核表达质粒pGEX4T-1中,经IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和western blot分析。SDS-PAGE分析显示,诱导后能够表达分子量80 ku的重组蛋白;western blot显示该蛋白可以与抗BPV2多克隆抗体发生反应。小鼠免疫试验表明,BPV2 L1重组蛋白可以诱导小鼠产生抗BPV2 L1特异性抗体;琼脂扩散试验显示,重组L1蛋白具有良好的免疫原性。本研究原核表达BPV2 L1蛋白,并证明其具有良好的反应原性及免疫原性,为牛乳头瘤病的疫苗和诊断试剂研发奠定了基础。

智利进口种牛乳头瘤病毒的检测与分析

通过临床观察、采样、PCR检测、克隆和测序,对智利进口种牛进行了牛乳头瘤病毒(BPV)检测和基因分型。结果表明,智利进口牛的BPV总体感染率为0.4%,病毒亚型有BPV2和BPV13,其中以BPV2为主,BPV13的感染率仅为0.09%。L基因进化分析表明,BPV智利株和我国BPV的感染情况显著不同,呈现明显的地域特征,两国的BPV2 L1基因具有较高的同源性。BPV阳性牛的治疗结果显示,75%左右的阳性牛经外科剪切、抗生素治疗后愈合良好,但仍有部分牛出现新的小疣。调查结果提示:BPV感染并非全为一过性感染;BPV13亚型仍为我国外来亚型,仍需进出口检验检疫部门加强对BPV的检疫。

牛乳头瘤病毒2型L1基因真核表达载体的构建及真核表达

为在真核细胞中表达牛乳头瘤病毒2型(BPV2)衣壳蛋白L1基因。采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2沙湾分离株L1基因,克隆入pMD18-T载体中,测序后进行序列分析。以pcDNA 3.1(+)为真核表达载体构建重组表达质粒,转染入BHK-21细胞,通过间接荧光免疫试验检测BPV2-L1蛋白的表达。本研究成功构建pcDNA3.1(+)-BPV2-L1重组真核表达质粒,证实能表达出BPV2-L1蛋白,为BPV2DNA疫苗的研发提供了前期基础。

新疆南疆地区牛乳头瘤病毒1型L1基因克隆及原核表达

本研究以构建牛乳头瘤病毒1型L1基因原核表达系统pET32a-L1及表达牛乳头瘤病毒1型L1蛋白为目的,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。从牛体表赘生瘤组织中提取DNA,PCR扩增L1基因片段,克隆至pGM-T载体。测序成功后将目的片段和表达载体经双酶切连接于表达载体pET32a中,并构建重组质粒pET32a-L1。重组质粒经双酶切、测序鉴定后转入表达宿主BL21中,IPTG诱导后表达融合蛋白L1,通过SDS-PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果显示,pET32a-BPV-1-L1重组质粒构建成功。经SDS-PAGE鉴定,诱导后表达的重组蛋白L1相对分子量约为75 kD,与预期结果大小一致;经Western blot检测牛乳头瘤病毒1型L1蛋白能与Anti-HPVantibody[BPV-1/1H8+CAMVIR]单克隆抗体产生反应。pET32a-BPV-1-L1原核表达系统得以成功构建并能表达牛乳头瘤病毒1型L1蛋白。

牛乳头瘤病毒基因1型广西GX01流行株全基因组克隆及序列分析

为了解牛乳头瘤病毒1型(bovine papillomavirus genotype 1,BPV-1)广西GX01株全基因组序列、结构特征及遗传变异情况,同时了解该毒株引起宿主产生的病理组织学变化情况,本研究选取广西贺州市患病牛皮肤肿瘤样物制作石蜡切片后镜检观察,提取病料DNA,以乳头瘤病毒L1基因的简并引物FAP59/FAP64进行PCR扩增以确定此病毒的基因型,根据GenBank中BPV参考株设计嵌套引物,对GX01株进行全基因组扩增、克隆测序及序列分析。病理组织学检查结果显示,可在病变部位发现表皮细胞增生、肿胀,角质过度及挖空细胞等乳头瘤病毒感染的特征性病变。序列分析结果表明,GX01株为BPV-1,其全基因组长为7 945bp,包含E1、E2、E4、E5、E6、E7、L1、L2 8个开放阅读框,符合BPV-1型基因组的结构特征;GX01与BPV-1参考株全基因组核苷酸序列同源性为98.6%~99.6%,与BPV-2型参考株(M20219.1)、BPV-13型参考株(JQ798171.1)同源性分别为86.9%和87.2%。GX01株为广西地区首次经检测确认并测定全基因组序列的牛乳头瘤病毒。本研究为广西地区乃至全国的牛乳头状瘤的病原鉴定、流行规律、遗传变异、疫源追溯及科学防控提供了基础数据。

牛乳头瘤病毒2型L1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

试验旨在表达牛乳头瘤病毒(BPV)的L1衣壳蛋白,并制备其多克隆抗体。对疑似牛乳头状瘤的病料进行病理组织学检查,采用L1基因简并引物FAP59/FAP64进行扩增,然后设计特异性引物,将衣壳蛋白L1基因亚克隆至pET-30a(+)表达载体中,构建重组原核表达载体pET30a-BPV2-L1,在E.coli RosettaTM(DE3) pLysS宿主菌中表达重组蛋白rBPV2-L1,并以纯化的rBPV2-L1蛋白为免疫原制备兔抗BPV2-L1蛋白多克隆抗体,随后间接ELISA检测其效价,并进行间接免疫荧光试验分析。病理组织切片观察结果显示,病变部分表皮细胞增生、角质过度并出现细胞挖空等BPV感染的组织病变情况;序列分析确定BPV分离株的基因型为2型,L1基因编码区长1 494 bp,可编码一个含有497个氨基酸的衣壳蛋白,蛋白分子质量为55.5 ku;与各型BPV的L1氨基酸序列系统进化树分析结果显示,其与BPV2-SW01(GenBank登录号:KC878306.1)、BPV2(GenBank登录号:KX113620.1)处于同一遗传进化分支,且属于Delta属成员;诱导表达的rBPV2-L1蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;间接ELISA法检测多克隆抗体效价高达1∶163 840,间接免疫荧光分析表明,兔抗BPV2-L1多克隆抗体能与瞬时表达的BPV2-L1蛋白发生特异性反应。以上结果证实,本研究成功克隆、表达了BPV2 L1基因,且重组蛋白rBPV2-L1具有较好的免疫原性,所制备的BPV2-L1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,为进一步研究BPV2亚单位疫苗奠定基础。

牛乳头瘤病毒基因2型新疆南疆Aks-01流行株全基因组序列测定及其特征分析

为从分子水平了解牛乳头瘤病毒(Bovine papillomavirus,BPV)新疆南疆Aks-01株全基因组序列、结构特征及遗传变异情况。本研究选取新疆南疆患病牛皮肤肿瘤样物,以乳头瘤病毒L1基因的简并引物FAP59/FAP64进行PCR法基因分型鉴定并确定其基因型,根据GenBank中BPV参考株设计扩增引物和测序引物,对Aks-01株进行全基因组扩增、测序及序列分析。序列分析表明,新疆南疆Aks-01株为BPV-2基因型,其全基因组长为7944bp,具有BPV-2基因型的结构特征,与GenBank收录的BPV-2基因型参考株核苷酸比较,同源性高达98%。与BPV-1、BPV-13的基因型参考株进化关系最近,同属Delta属。该Aks-01株为新疆南疆地区首次检测确认并测定全基因组序列的牛乳头瘤病毒。

牛乳头瘤病毒基因2型贵州GZ01流行株全基因组序列测定及其特征分析

为从分子水平了解牛乳头瘤病毒(bovine papillomavirus,BPV)贵州镇宁GZ01流行株全基因组序列、结构特征及遗传变异情况,本研究选取贵州镇宁患病牛皮肤肿瘤样物,以乳头瘤病毒L1基因的简并引物MY11/MY09进行PCR扩增,测序后并确定其基因型。根据Gen Bank中BPV参考株设计6对特异性引物,经扩增、测序和拼接后获得BPV流行株全基因组序列。结果序列分析表明,GZ01流行株全基因组长为7 944 bp,具有BPV2基因型的结构特征,与Gen Bank收录的牛乳头状瘤病毒2型基因型参考株BPV2、BPV2-SW01和BPV2-AKS01的核苷酸同源性高达98.8%、99.7%和99.4%,同时与BPV13、BPV1和BPV14的基因型参考株进化关系也比较最近,同属Dalte属。因此,贵州镇宁GZ01株为BPV2基因型,GZ01株为贵州地区首次检测确认并测定了全基因组序列的牛乳头瘤病毒。本研究为贵州地区的牛乳头状瘤的病原鉴定、流行规律、遗传变异以及科学的防控提供了理论依据。

牛乳头状瘤病的防治

牛乳头状瘤病是由牛乳头瘤病毒引起牛的一种良性肿瘤,是慢性的皮肤增生性疾病。与其他家畜相比,乳头瘤在牛群中较为常见。不同日龄的牛均会感染,一岁内牛发生频率较高。牛乳头瘤病毒有10种可以鉴别的病毒型,另外还有一些类型已经被建议加入其中。牛乳头瘤病毒1型和2型属于δ乳头瘤病毒属,具有较宽的宿主范围和组织嗜性,在牛中可引起纤维乳头状瘤,在马中可引起结节病。牛乳头瘤病毒3、4、6、9和10型属于ξ乳头瘤病毒属,仅可感染牛,并且只感染牛上皮细胞,诱导产生确实的乳头瘤。牛乳头瘤病毒5型和8型是e乳头瘤病毒属成员,可引起纤维乳头状瘤和确实的乳头瘤。目前,牛乳头瘤病毒还没有分类,许多牛乳头瘤病毒的生物学性质,有待进一步补充确定。

新疆南疆牛乳头状瘤病毒鉴定与基因分型

为探究新疆南疆某奶牛场疑似感染牛乳头状瘤病及病毒基因型,本试验采取牛皮肤病变肿瘤样组织,进行组织病理学检查,并提取病料DNA,以乳头状瘤病毒(bovine papillomavirus,BPV)L1基因简并引物和通用引物(FAP59/FAP64和MY11/MY09)进行PCR扩增、测序、序列分析及遗传进化树构建。测序结果表明:新疆南疆Aks-01株与Gen Bank收录的BPV-2基因型参考株核苷酸序列比较,核苷酸同源性可达95%,为BPV-2基因型;与BPV-1、BPV-13基因型参考株遗传进化关系最近,同属Delta属。结合临床症状、组织病理学检查,确定该奶牛场牛乳头瘤由BPV-2基因型感染引起。

人IL-4真核细胞表达载体的构建与分析

本研究应用牛乳头瘤病毒质粒(BPV-1)构建了一个表达载体pdBHhIL—4。该载体应用SV40启动子,可以有效地启动外源基因的表达,保留了BPV-1的氨基苄青霉素抗性(Amp^R)基因作为筛选标志,经限制性内切酶和Southern杂交分折提示构建是成功的,新的载体不仅促进了IL—4转化和表达,也为其它真核基因在真核细胞的表达提供了工具。

用BPV转化灶做选择标记表达HBsAg的研究

作者构建了pBMTHBR2质粒,此质粒含有鼠MT启动子、完整的HBsAg基因(preS和S基因)、SV_(40)的拼接信号和完整的BPV基因组。用磷酸钙沉淀技术把此质粒导入鼠C_(127)细胞内,用BPV转化灶做标记,获得了转化细胞克隆。实验表明,57%的克隆细胞系均能分泌HBsAg。

疫苗

893893 使用牛乳头瘤病毒载体在小鼠纤维母细胞中表达 EB 病毒膜抗原 gp340/220[英]/Conway,M.…//J.Gen.Virol.-1989,70(pt.3).-729～734[译自 DBA,1989,8(9),89-05068]将编码 EB 病毒膜抗原 gp340/220的单个基因置入牛乳头状瘤病毒载体。