牛乳铁蛋白功能片段在大肠埃希菌中的表达及其抑菌活性验证

以pET-30a和pEGX为出发载体,构建牛乳铁蛋白功能片段(BlfFf)基因工程表达的非融合性表达质粒(pET-BlfFf)和融合性表达质粒(pEGX-BlfFf),并在大肠埃希菌BL21中诱导了蛋白表达。SDS-PAGE分析结果表明,pET-BlfFf表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,而pEGX-BlfFf表达的目标蛋白则可大量溶于细胞破碎上清液中,说明后者更适合表达可溶性目标蛋白。pEGX-BlfFf诱导表达产物经GST标签填料柱亲和层析纯化后,可制备出可溶性融合蛋白GST-BlfFf,其产量约为60 mg/L。该蛋白经凝血酶去除GST标签,获得纯化的目标肽。BlfFf的生物活性试验结果表明,经过胃蛋白酶水解后的多肽对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抗菌活性。