牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植

对第 7d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养 ,分离筛选类ES细胞 ,并对其进行了传代培养。接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞 ,在传代的 2 4h内增殖形成小集落 ,2～ 3d有雀巢状的集落出现 ,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养 ,4～ 5代后 ,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落。将传 4～ 5代的细胞集落接种到无饲养层的 4孔培养皿中培养 ,2 4h出现多细胞单层集落 ,4～ 7d长满皿底 ,并形成上皮样细胞 ,呈网状 ,将其作为核供体细胞进行核移植实验。结果有 80 % (40 5 0 )核 质融合的移核重构胚发生卵裂 ,5 % (2 4 0 )发育至桑椹胚期 ,2 5 % (1 4 0 )发育至囊胚期 ,92 5 % (37 4 0 )停止在 2～ 4细胞期。结果表明 :采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植 。

体细胞克隆和牛超数排卵影响因素的研究

[目的]为研究FSH剂量和季节对体细胞克隆和牛超数排卵效果的影响,以期摸索出一套成熟、稳定的体细胞克隆和牛胚胎生产方案,最终为建立完善的体细胞克隆牛繁育体系奠定基础。[方法]试验利用CIDR+FSH+PG的超排方法。[结果]试验结果表明:使用320 mg、360 mg和400 mg的FSH对36～48月龄的体细胞克隆和牛进行超排,360 mg组的头均可用胚胎数和胚胎可用率显著高于320 mg组和400 mg组(P<0.05)。春、夏、秋、冬季节超排获得的胚胎总数、头均胚胎总数、头均可用胚数及胚胎可利用率从高到低依次是:秋季、春季、冬季、夏季,差异均不显著(P>0.05)。[结论]由此对36～48月龄的体细胞克隆和牛使用360 mg的FSH进行超数排卵试验最适,超排的季节优先选择春季和秋季。

不同来源供体细胞及含羞草素对水牛体细胞核移植的影响

本文主要探讨供体细胞类型及含羞草素对水牛体细胞克隆的影响。结果如下:与成纤维细胞相比,卵丘/颗粒细胞可以获得较高的融合率和分裂率,但两者的囊胚率差异不显著;克隆水牛的成纤维细胞能用于核移植,而且对核移植结果没有影响;性别对重构胚的早期发育影响不大;含羞草素处理可以替代血清饥饿处理。