牛儿庄采矿公司东风井恢复支护技术应用研究

牛儿庄采矿公司牛儿庄东风井恢复工程,工程量246.5m,井口标高+208m,井底标高-40m,井筒直径5m。东风井井筒受原东风井2#工作面采动影响,井壁发生破损、位移、地表水沿岩层裂隙涌入井筒等现象,对井筒开挖的进度和安全产生了非常大的影响。东风井恢复工程施工的进度的快慢直接影响牛儿庄矿工广煤柱的开采,对矿延续发展具有重要意义,因此必须对牛儿庄采矿公司东风井恢复支护技术应用认真进行研究。

牻牛儿苗科11种中药材红外光谱鉴定及聚类分析

结合傅里叶变换红外光谱技术与聚类分析法,建立牻牛儿苗科11种中药材的快速鉴别方法。采用傅里叶变换红外光谱法鉴别牻牛儿苗科11种中药材;在建立主成分分析模型的基础上,采用SIMCA聚类分析法对三种中药材进行了快速的分类研究。红外光谱结合聚类分析技术对牻牛儿苗科中药材聚类结果较理想,识别率和拒绝率达到98%以上,盲样的预测率达到91%。红外光谱与聚类分析法相结合可以快速、无损识别牻牛儿苗科中药材。

烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因NtGGPPS1的克隆和功能分析

为进一步明确烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因NtGGPPS1的功能,根据已公布的普通烟草(Nicotiana tabacum)GGPPS1基因编码区序列设计特异性引物,从普通烟草K326中克隆到NtGGPPS1基因。构建荧光表达载体PFF19-Nt GGPPS1-GFP,对NtGGPPS1基因进行亚细胞定位研究。通过荧光定量PCR分析了普通烟草K326在不同激素处理下NtGGPPS1基因的表达量变化。构建NtGGPPS1基因的RNAi载体pHellsgate2-Nt GGPPS1,通过农杆菌浸染烟草K326后获得NtGGPPS1基因显著下调的烟株,检测了烟株中质体色素含量的变化情况。结果表明:Nt GGPPS1融合蛋白基因的绿色荧光分布在烟草BY-2细胞的质体上,表明该基因定位于质体。用茉莉酸甲酯(MeJA)处理烟草后,NtGGPPS1基因的表达量显著升高,而用生长素(IAA)处理后,该基因的表达量下降。与对照相比,在NtGGPPS1基因下调的烟株中其质体色素含量均显著降低,预示NtGGPPS1参与了烟草β-胡萝卜素的生物合成。

烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及分析

采用RACE技术,从烟叶中克隆了一个新的编码GGPPS蛋白的基因,命名为Ntggpps3,并对其进行了生物信息学分析。Ntggpps3的cDNA序列为1251 bp,包含一个长度为1092 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。NtGGPPS3蛋白与其他植物GGPPSs高度保守。生物信息学预测结果表明,NtGGPPS3的分子量为39.5 kD,等电点为6.28,为亲水性蛋白,N端有叶绿体信号肽。二级结构主要由螺旋和无规则卷曲组成,三级结构含有两个富含天冬氨酸的区域,并通过同源建模构建了NtGGPPS3的3D模型。进化分析表明,植物的GGPPS分为大亚基和小亚基两个分支,而且NtGGPPS3属于大亚基。

烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因家族的全基因组鉴定

为了揭示烟草栊牛儿基[牛 ]牛儿基焦磷酸合成酶（Geranylgeranyl pyrophosphate synthase，GGPPS）基因家族的特征和功能，利用生物信息学方法对烟草GGPPS家族进行了全基因组查找、鉴定及相关分析。在普通烟草中共鉴定出9个成员（大亚基7个、小亚基2个），林烟草、绒毛状烟草中分别鉴定出5个成员（大亚基4个、小亚基1个）。GGPP5的开放阅读框长度为999～1119bp，编码332~372个氨基酸，蛋白质分子量为36．2～40．7kD，等电点为5．41～8．32。大亚基和小亚基基因分别含有1个和2个外显子；大亚基与小亚基均具有DD（XX）。D和CXXXC保守性基序，但存在一定的差异。在进化过程中，烟草GGPPS家族可能发生了串联重复复制和片断复制；普通烟草GGPPS家族可能发生了基因丢失，NtabGGPPS1-1和NtabGGPPS1—2较其他成员进化速率快，同时可能受到了净化选择。

牻牛儿苗化学成分研究

目的对牻牛儿苗的化学成分进行研究。方法利用溶剂提取和凝胶柱层析进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构。结果得到8个化合物,分别确定为:没食子酸(1),3-O-galloyl-(-)-shikimic acid(2),3,4-di-O-galloyl-(-)-shikimic acid(3),3,5-di-O-galloyl-(-)-shikimic acid(4),β-谷甾醇(5),山柰酚(6),槲皮素(7)和鞣花酸(8)。结论化合物2～8都是首次从该植物中分离得到。

正交设计法优选=牛儿苗总黄酮的提取工艺

目的:对老鹳草总黄酮的提取工艺进行优化。方法:采用正交设计,以老鹳草药材总黄酮的提取率为考察指标,考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取率的影响。结果:优化提取工艺条件为4倍量90%乙醇、提取3次、每次1h,验证性实验符合标准。结论:该工艺方法经实验验证稳定、可靠、操作可控,重现性好,对进一步的工艺开发有较好的参考价值。

广西莪术微波炮制品中牻牛儿酮含量的研究

目的研究微波炮制方法和传统炮制方法对广西莪术中牻牛儿酮含量的影响。方法采用HPLC法,色谱柱为大连依利特HypersilODS2柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温:35℃;流动相为乙腈-水(35:65);紫外检测波长为210nm。结果牻牛儿酮在0.095～0.95μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999;加样平均回收率101.86%,RSD为2.2%(n=6);含量测定结果为0.7356～1.166mg/g。结论不同的微波炮制热力学参数条件对广西莪术中牛儿酮含量有明显影响,选择适当的微波热力学参数的微波炮制品2号与传统炮制方法醋制品中牻牛儿酮含量基本相同,为筛选莪术微波炮制工艺提供了有一定价值的实验参考数据。

烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶类似基因的克隆及其功能研究

利用同源克隆法从普通烟草(Nicotiana tabacum)红花大金元的c DNA中克隆到一个新基因Nt GGPPSL(Geranylgeranyl pyrophosphate synthase-like),其编码区全长为813 bp。Blast结果显示该基因与林烟草(Nicotiana sylvestris)、绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis)和番茄(Solanum lycopersicum)的GGPPS小亚基基因的相似度分别达到了99%、91%和82%,但其编码的蛋白质序列缺失了GGPPS小亚基的关键功能域"DDXXXXD",这表明Nt GGPPSL基因的功能可能与GGPPS小亚基基因不同。为了深入研究Nt GGPPSL基因的功能,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析Nt GGPPSL基因在普通烟草不同时期和器官中的表达差异。利用TRV病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系抑制本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中Nt GGPPSL基因的表达,在成功沉默该基因之后,检测烟草中质体色素(新黄质、紫黄质、叶黄素、叶绿素a/b、β-胡萝卜素)含量的变化。结果显示,Nt GGPPSL基因在茎和根中的表达量明显高于其他器官。与对照组相比,在Nt GGPPSL基因沉默后,烟草叶片发生明显的褪绿现象,质体色素含量显著降低,表明该基因参与了叶绿素的合成,这为VIGS体系提供了一个可参考的指示基因,也为烟草的遗传改良和基因功能研究提供了理论依据。

基于转录组信息的艾纳香牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(BbGPPS)的克隆及序列分析

采用RT-PCR和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术,从艾纳香(Blumea balsamifera L.DC)的叶片中克隆到单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶(BbGPPS)基因。研究结果显示,BbGPPS基因的cDNA全长1 692 bp,包含开放阅读框(ORF)1 083 bp,编码361个氨基酸;亚细胞结构定位于叶绿体,既非膜蛋白也非分泌性蛋白。疏水性分析显示,BbGPPS是亲水性蛋白。同源性比对结果显示,BbGPPS蛋白与其他植物中GPPS蛋白具有高度的相似性,且具有异戊烯基结构域。系统发育分析表明,所有序列被聚为5大类,BbGPPS与其他菊科植物聚类一类,与万寿菊(Tagetes erecta)TeGPPS亲缘关系最近,其次是甜菊(Stevia rebaudiana)SrGPPS。

高产脂思茅松牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及表达

以高产脂思茅松为材料,基于转录组数据分析,采用RT-PCR方法获得思茅松牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPS)基因的c DNA序列,Gen Bank登录号为KM382173.1.序列分析显示,思茅松GGPS基因c DNA全长1 152 bp,编码383个氨基酸,属于GGPS家族.序列比对分析显示,思茅松GGPS拥有GGPS家族特有的两个功能保守结构域FARM(DDLPSMDND)、SARM(DDILD),其与马尾松GGPS的同源性为78.07%.系统进化树分析显示,思茅松GGPS与马尾松GGPS的亲缘关系最近.荧光定量PCR分析表明,在思茅松的树皮中,GGPS基因的表达明显受到割脂物理伤害的诱导,在高产脂思茅松个体幼枝中的表达量远远高于在低产脂思茅松个体的表达量.

HPLC法测定满山红油中牻牛儿酮含量

目的：建立满山红油中牻牛儿酮含量测定的高效液相色谱法。方法：使用Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为65%乙腈水溶液,流速为1.0m l.m in-1;检测波长为210nm。结果：牻牛儿酮在0.1010~1.010μg范围内与其色谱峰面积线性关系良好r=0.9996,平均回收率为100.1%,RSD为1.0%。结论：本法简便、准确、重复性好,可用于满山红油中牻牛儿酮含量的测定。

牻牛儿苗的化学成分研究

目的:研究牻牛儿苗(Erodium stephanianum Willd.)的化学成分。方法:采用硅胶、SephadexLH-20柱层析并结合重结晶等方法对牻牛儿苗的95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化,再依据理化性质和波谱数据(包括NMR和MS)对所分的化合物进行结构鉴定。结果:分离并鉴定了5个化合物,分别为:没食子酸(gallic acid,Ⅰ)、山奈酚(kaempferol,Ⅱ)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside,Ⅲ)、柯里拉京(corilagin,Ⅳ)、鞣花酸(ellagicacid,Ⅴ)。结论:化合物Ⅲ为首次从该植物中发现。实验结果可为牻牛儿苗的进一步研究开发提供依据。

发根农杆菌介导丹参牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶1基因RNA干扰载体的转化

目的:利用发根农杆菌ACCC10060介导丹参牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶1基因(SmGGPS1)RNA干扰(RNAi)载体转化丹参叶片,生成SmGGPS1的RNAi转基因毛状根。方法:根据已克隆到的SmGGPS1特异区域设计并合成2段RNAi序列,分别插入RNAi双元载体pK7GWIWG2D(Ⅱ)中,构建2个含卡那霉素(Kan)和绿色荧光蛋白(GFP)双筛选标记的植物表达载体pK7GWIWG2D(Ⅱ)-SmGGPS1-RNAi2和pK7GWIWG2D(Ⅱ)-SmGGPS1-RNAi3;利用带有上述2个RNAi载体的发根农杆菌ACCC10060侵染丹参叶片,诱导生成转基因毛状根;通过Kan抗性筛选和GFP绿色荧光观察统计转化率。结果:分别得到SmGGPS1-RNAi2和SmGGPS1-RNAi3转基因毛状根301根和399根,平均转化率为60.34%。结论:首次建立了发根农杆菌介导的外源基因转化丹参的体系。

反相高效液相色谱法测定莪术油注射液中莪术醇和牛儿酮的含量

目的利用反相高效液相色谱法同时测定莪术油注射液中莪术醇和牻牛儿酮含量。方法采用Agilent TC ODS色谱柱（4.6mm×15cm，5μm），流动相A：乙腈-甲醇-水-磷酸（550：225：225：1）；流动相B：甲醇，梯度洗脱，流速1．0mL／min，柱温：35℃，检测波长：210nm。结果在该条件下，莪术醇、牻牛儿酮浓度分别在0．9406～94．06μg／mL和1．333～133.2μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系；回收率分别为100．70％和100．37％，RSD分别为0．86％和0．92％。结论本法可用于同时测定莪术油注射液中莪术醇和牻牛儿酮的含量，方法简便、结果准确。

莪术油眼用凝胶中牻牛儿酮的含量测定方法研究

目的:建立莪术油眼用凝胶中牻牛儿酮的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil CN(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(35:65);流速为1.0mL/min;检测波长:210nm。结果:对牻牛儿酮在4.95μg～9.55μg范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.97%,RSD为1.26%。结论:该方法分离效果好、灵敏度高、重复性好,为莪术油眼用凝胶制剂应用临床提供了条件。

小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶基因的克隆及电子定位与表达分析

为更好地了解小麦维生素E的生物合成并将其应用于营养品质改良,以电子和实验克隆相结合的方法克隆分离了小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶(GGH)基因的cDNA序列,序列号为DQ139268。序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个完整的开放读码框,编码462个氨基酸,含有保守的ChlP结构域,氮端有信号肽序列,定位于叶绿体中。氨基酸序列比对和系统发育分析结果显示,不同物种之间GGH基因编码的氨基酸序列同源性都较高。用生物信息学工具将该基因定位于小麦第六部分同源群的长臂上。RT-PCR和电子组织表达分析结果显示该基因在光合器官中表达量丰富,这可能与其亚细胞定位有关。

体外沉默二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌癌细胞迁移和侵袭的影响

目的应用RNA干扰技术,体外沉默二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ(GGTase-Ⅰ),研究其在舌癌迁移、侵袭中的作用。方法登录Genebank确定人GGTase-Ⅰ基因序列,针对GGTase-Ⅰ的基因序列设计并构建3条si RNA,分别将RNA干扰组(GGTase-Ⅰsi RNA1、GGTase-Ⅰsi RNA2、GGTase-Ⅰsi RNA3)、阴性对照组(NC-si RNA)和空白对照组转染至舌癌细胞Cal-27,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞转染后GGTase-Ⅰ、Rho A基因的m RNA、蛋白表达;选取沉默效率最高的一组si RNA作为实验组,蛋白质印迹法检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达,GST-pull down实验检测GTP-Rho A蛋白的表达,划痕实验检测细胞迁移能力变化,Transwell小室检测细胞侵袭能力变化。结果干扰后细胞的GGTase-Ⅰm RNA、蛋白表达明显下降(P<0.05),Rho A m RNA和蛋白表达无明显改变,MMP-2、MMP-9、GTP-Rho A的表达下降,迁移、侵袭能力明显下降(P<0.05)。结论抑制GGTase-Ⅰ表达,可降低舌癌细胞的迁移、侵袭能力,对GGTase-Ⅰ的深入研究可能为舌癌的治疗提供新的有效分子靶点。

温莪术和温郁金中牻牛儿酮的含量测定

目的 建立温莪术和温郁金药材中牻牛儿酮的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为Hypersil CN(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-水(40:60)为流动相;流速为1.0 mL·min-1,检测波长为210nm.结果 牻牛儿酮的线性范围为1.9～22.8μg·mL-1(r=0.999 9),平均回收率为96.95%,RSD为1.12%.结论 该测定方法简便易行,结果准确,可作为温莪术、温郁金药材的质量控制方法.

牻牛儿苗科植物化学分类研究

汇总了牛儿苗科Erodium属16种、Monsonia属4种、Geranium属12种黄酮成分，其中黄酮甙元以槲皮素（quercetin）最为常见，其次是山奈酚（Kaempferol）、杨梅素（Myricetin）和木犀草素（luteolin）；并结合每个种所含成分异同，探讨了它们之间的化学分类关系。