丙酸对牛前脂肪细胞增殖及分化的影响

奶牛前脂肪细胞的增殖及分化对于正常脂肪组织发育极为重要。为在细胞水平上探讨丙酸对牛前脂肪细胞增殖及分化的影响,试验分为2组。试验组:牛前脂肪细胞用0.1~3 mmol·L^(-1)PA处理12~48 h,对照组不予处理。试验采用油红O染色技术检测牛前脂肪细胞脂质生成情况,通过EdU细胞增殖检测试剂盒检测脂肪细胞增殖情况,使用流式细胞术分析细胞周期进程,使用免疫蛋白印记法(Western Blot)检测脂肪细胞中几种增殖相关蛋白以及分化相关指标的蛋白表达情况,包括细胞周期蛋白(CCND1、CCND2、CCND3、CCNE1),细胞周期蛋白激酶(CDK2、CDK4、CDK6)和过氧化物酶体增殖活化受体(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)以及固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)。结果表明:与未处理组相比,0.1 mmol·L^(-1)PA处理48 h可以促进牛前脂肪细胞增殖,增加S期细胞比例,并升高细胞周期蛋白的蛋白质丰度。此外,PA还可以通过上调分化相关指标的蛋白质表达来促进牛前脂肪细胞的分化,说明0.1 mmol·L^(-1)PA处理48 h会促进牛前脂肪细胞增殖与分化,对正常脂肪组织发育具有潜在作用。

不同培养方法对牛前体脂肪细胞增殖分化的影响

为优化牛前体脂肪细胞培养方法,本试验通过观察显微镜下细胞形态、噻唑蓝(MTT)法、油红O染色法和RNA质量检测结果,比较组织块培养法、传统消化法和改良消化法培养的牛前体脂肪细胞增殖分化的差异。结果表明:3种方法均能培养出成熟脂肪细胞,细胞形态一致,其中改良消化法极大地缩短了试验样品处理的时间,且细胞形态最好,提取的RNA质量最好。改良消化法是一种快捷、有效的牛前体脂肪细胞培养方法。

全反式视黄酸在牛前脂肪细胞增殖及分化中的作用

奶牛前脂肪细胞的增殖与分化对于正常脂肪组织发育至关重要。本研究旨在细胞水平探讨全反式视黄酸(ATRA)对牛前脂肪细胞的增殖与分化。试验分为2组,分别是试验组(牛前脂肪细胞用20 nmol/L ATRA处理48 h)及对照组。用MTS及EdU及Ki67法检测ATRA对牛前脂肪细胞增殖的影响,免疫蛋白印记(Western blot)检测ATRA对牛前脂肪细胞中几种增殖相关蛋白表达的影响,包括细胞周期蛋白D1(CCND1)、2、3和CCNE1及细胞周期蛋白激酶(CDK2、4、6);使用流式细胞术检测细胞周期进程,并检测分化相关指标PPARγ和C/EBPα蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,20 nmol/L ATRA可抑制牛前脂肪细胞增殖,同时降低S期细胞比例并降低细胞周期蛋白(CCND1、CCND2、CCND3和CCNE1)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2、CDK4和CDK6)的蛋白丰度。此外,与对照组相比,ATRA的添加还通过下调PPARγ和C/EBPα的蛋白质表达来抑制牛前脂肪细胞的分化。结果表明,20 nmol/L ATRA处理48 h会抑制牛前脂肪细胞的增殖与分化,对正常脂肪组织发育具有潜在作用。

LAL对奶牛脂肪细胞脂合成及脂解的调节作用

检测健康奶牛及酮病奶牛脂肪组织中调节脂合成相关分子乙酰CoA羧化酶-1(ACC1)、磷酸化转录调节因子-α(CEBPα)、二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)和脂解相关分子脂滴包被蛋白-1(PLIN1)、甘油三酯脂酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、p-HSL的蛋白表达以及目的蛋白溶酶体酸性脂肪酶(lysosomal acid lipase,LAL)的表达;研究体外培养原代牛脂肪细胞过表达LAL,并添加异丙肾上腺素(ISO)构建脂肪细胞脂解模型,采用Western blot检测脂肪细胞中脂合成及脂解相关蛋白表达的情况。结果显示,与健康奶牛相比,酮病奶牛脂肪组织中的LAL表达量显著低于健康奶牛(P<0.01)。临床型酮病奶牛脂肪组织中脂合成相关蛋白ACC1、CEBPα、DGAT2、SREBP1、PPARγ的蛋白表达水平显著降低,而脂解相关蛋白PLIN1、ATGL、p-HSL的蛋白表达及磷酸化水平显著升高,结果表明酮病奶牛脂肪组织脂质合成作用被抑制,脂解作用增强。体外试验结果显示,ISO可下调脂合成相关分子的蛋白表达水平,也会上调脂解相关分子的蛋白表达及磷酸化水平。过表达LAL的奶牛脂肪细胞基础脂合成和ISO诱导下的脂合成蛋白的含量显著升高,而基础脂解和ISO诱导的脂解蛋白含量显著降低。体外试验结果表明,LAL在奶牛脂肪细胞中能抑制脂肪细胞的脂分解,并促进脂肪细胞的脂合成。

肌间脂肪沉积能力相关基因在前脂肪细胞分化前后的差异表达

研究表明,HBA、HBB、MB、HSPB1、MSRA、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1等基因在具有不同脂肪沉积程度的牛肉中存在差异表达,并对肌肉中脂肪的沉积情况具有潜在的影响。本研究以牛前体脂肪细胞为研究对象,诱导其分化为成熟脂肪细胞,通过实时荧光定量PCR检测上述基因在前体脂肪细胞分化前后的表达情况,通过油红O检测脂类沉积情况。结果表明,PSMA1、HBB、COX6B1、TCAP、MB、HBA、TXN、GSTM1、MSRA、HSPB1在前体脂肪细胞分化后表达量上升,而VDAC1表达量下降,前体脂肪细胞分化后脂质沉积明显加大,说明这些基因可能在调节前体脂肪细胞分化、脂质沉积中具有潜在作用。