牛源化脓隐秘杆菌PLO蛋白的原核截短表达及其溶血活性检测

为研究牛源的化脓隐秘杆菌溶血素(PLO)生物学功能,本研究应用PCR方法扩增牛源化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)PLO全基因序列,通过生物信息学方法分析其与猪源A.pyogenes的PLO蛋白差异,并构建了溶血功能区重组表达质粒pQE30-PLO585,在E.coli XL1Blue中用IPTG诱导表达。结果表明,扩增到PLO蛋白基因ORF为1 605 bp,编码535个氨基酸,与猪源PLO的核苷酸序列同源性为97.4%,氨基酸同源性为97.2%,在生物学活性功能区没有发生改变。表达的PLO蛋白溶血功能区重组蛋白能够被阳性血清识别,而且具有溶解绵羊红细胞的活性,产生β溶血现象。本研究获得了牛源A.pyogenes截短重组PLO蛋白,并证明PLO具有β溶血功能与较好的抗原性。

1株牛肺源化脓隐秘杆菌的生物学特性及其疫苗免疫保护性研究

化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,TP)是一种重要的畜禽病原,可致动物化脓性肺炎、关节炎、乳腺炎等多种疾病。重庆云阳某牛场新进犊牛发生呼吸道疾病并伴随死亡,剖检发现肺部出现化脓结节,组织触片染色观察,发现大量单一短小杆菌,分离培养及16S rRNA序列测定分析,确诊其感染病原为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),命名为TpCQ-yy1。TpCQ-yy1在兔血平板上可致双层溶血环,发酵葡萄糖、赖氨酸等,其耐药特性可随培养基质改变而发生部分变化;胸腔和腹腔途径感染,TpCQ-yy1可致小鼠肺部及腹部的化脓性病变并伴随死亡,皮下和肌肉途径感染仅注射部位有化脓灶,并与感染剂量有关,无致死性;TpCQ-yy1基因组大小为2.335 Mb,编码2107个蛋白,进化分析与牛源化脓隐秘杆菌TP1株相近,与其他动物源菌株差异较大;感染巨噬细胞可促进其细胞炎症因子分泌,制备TpCQ-yy1灭活菌苗及重组溶血素(rPLO)亚单位疫苗,分别通过皮下和肌肉途径免疫小鼠,均产生较高水平抗体,但对TpCQ-yy1腹腔途径攻毒的免疫保护率为33.3%~66.7%。该研究为深入了解化脓隐秘杆菌生物学特性、致病性及其防控提供了基础依据。