不同培养系统牛体外受精囊胚的质量评价

采用双重荧光分染方法 ,结合免疫外科手术 ,对来自TCM 199和SOF培养系统的牛体外受精囊胚质量进行了评价。结果显示 ,TCM 199培养系统的囊胚发育率为 31.9% (335 / 10 74 ) ,平均细胞总数为 73.1,内胚团细胞数为 16 .8,其中生存细胞占 99.5 % ;SOF培养系统的囊胚发育率为 2 0 .9% (2 4 8/ 1186 ) ,平均细胞总数为 5 6 .2 ,内胚团细胞数为 11.3,其中生存细胞占 96 .5 %。证实 ,使用TCM 199生产的囊胚质量和囊胚发育率优于SOF培养系统。

牛体内囊胚全转录组模式解析

旨在解析牛体内囊胚的全转录组模式。本研究选择3头15月龄以上、健康状况良好的泌乳奶牛,采用超排获得体内囊胚,采用单细胞全转录组测序技术检测囊胚mRNA、lncRNA、circRNA转录模式,并采用生物信息学工具对其进行分析。试验获得牛体内囊胚约19975个mRNAs、12715个novel lncRNAs及887个circRNAs。mRNA有12种可变剪切方法,以转录起始区域可变剪切(TSS)为主。采用基因本体(GO)和相关信号通路(KEGG)对其分析发现,生物功能主要富集在新陈代谢、细胞膜和蛋白结合、细胞通讯、细胞组织成分、生长发育等功能,Pathway主要富集在细胞周期、膜运输、染色体组织调控等通路;circRNA有6种类型,其中CLASSIC类型circRNA数量最多,这种剪切方式会形成成环的外显子circRNA(EcircRNA)。本研究阐明了牛体内囊胚的全转录组模式,为全面了解牛体内囊胚提供了新的思路。

基于单细胞转录组测序技术筛选牛体内囊胚性别特异性基因

【目的】探究牛体内雌性和雄性囊胚在mRNA水平上的特异性差异,挖掘雌性和雄性囊胚发育差异相关候选基因。【方法】参考GenBank中牛牙釉质基因(AMEL)序列(AMELX基因,登录号:NM_001014984.1;AMELY基因,登录号:NM_174240.2)设计引物,以胚胎内细胞DNA为模板,采用巢式PCR扩增技术鉴定单个牛体内囊胚的性别。选用确定性别的单个雌性和雄性囊胚为试验材料,采用Smart-Seq2扩增技术构建单个胚胎测序文库,应用Illumina HiSeq Xten高通量测序平台对单个胚胎进行单细胞转录组测序(scRNA-Seq),并进行了基因差异表达、GO功能和KEGG通路分析。【结果】通过巢式PCR扩增胚胎内细胞中的AMEL基因,确定了胚胎性别;基因表达分析筛选出两组之间差异表达基因(DEGs)6 160个,其中雌性特异性基因675个,雄性特异性基因305个;GO功能注释发现雌性特异性基因显著注释在核苷酸结合、信号转导调控、多细胞生物发育、细胞骨架等条目,雄性特异性基因显著注释在氧化磷酸化、线粒体、线粒体内膜、核糖体等条目;KEGG通路富集分析发现7条与雌性和雄性囊胚发育差异相关的通路,分别为代谢途径、糖酵解、磷酸戊糖途径、细胞衰老、氧化磷酸化、调节干细胞多能性的信号通路和Wnt信号通路;并利用GO和KEGG结果筛选出5个在牛体内囊胚期胚胎发育过程中具有直接或间接作用的基因:FBP1、GADD45G、FHL2、FOSB和WNT2B。【结论】牛体内雌性和雄性囊胚之间存在广泛的转录差异,性别特异性基因FBP1、GADD45G、FHL2、FOSB和WNT2B可能是直接或间接影响胚胎发育的关键基因。

冻存牛体外受精胚融解后生存率与染色体分析

体外受精后 7～ 9天的牛胚胎用 1 0 %甘油 (Glycerol)冷冻保存 ,融解 48h后 ,胚胎生存率表明 ,7～ 8天的囊胚的生存率明显高于 9天的囊胚生存率 (P <0 .0 5)。染色体分析表明 ,冷冻保存 7天的囊胚卵裂球数和平均分裂像明显低于相同天数的新鲜囊胚 (P <0 .0 5)。染色体异常发生率较高 ,但与新鲜囊胚之间无明显差异。