牛型布氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定

为制备牛型布氏杆菌(Brucella abortus)苹果酸脱氢酶(MDH)单克隆抗体,将牛型布氏杆菌A19菌株的MDH基因进行克隆和表达,表达产物被纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,最终获得3株分泌牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别被命名为C2、D5和F4。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 600～1∶3 200,小鼠腹水效价为1∶12 800～1∶25 600;Western-blot检测结果表明,3株单克隆抗体均能与牛型布氏杆菌MDH重组蛋白发生特异性反应。结果表明,本研究成功制备了牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体,为基于MDH的布氏杆菌检测方法的建立奠定了基础。

牛型布氏菌单克隆抗独特型抗体苗生产工艺的研究

采用生物反应器悬浮培养生产牛布氏杆菌单克隆抗独特型杂交瘤细胞，定期收获细胞，技106细胞／鼠行腹腔接种已用石蜡油预处理的BALB／c小鼠，从而大量生产腹水阻断效价达1：40000的牛布氏杆菌单克隆抗独特型抗体。佐以20％的铝胶生理盐水，配成新一代牛布氏杆菌二抗苗，经大动物（牛）攻毒试验，保护力可达6个月以上，其它各项检定指标均达到规程要求，并建立了切实可行的生产工艺。