呼和浩特市周边地区规模化牛场大肠杆菌K99流行情况调查

大肠杆菌K99引发的犊牛腹泻给养牛产业造成了巨大的经济损失,本研究为调查K99流行情况,自2020年8月至2021年7月从呼和浩特市周边7个规模化牛场随机采集380份粪样和血样,采用PCR和ELISA方法进行K99抗原抗体流行情况调查,对PCR检测阳性样品进行分离培养,经形态学、生化试验、菌毛特异基因扩增以及测序鉴定K99分离株,进一步通过药敏试验评价药物敏感性。结果显示,380份粪样中PCR检测K99阳性样品25份,阳性率6.58%;380份血样中ELISA检测阳性99份,阳性率为26%,阳性血样多集中于0~2月龄犊牛,阳性率达到48.28%。菌毛基因PCR测序鉴定了8株K99菌株,药敏结果显示,分离株对庆大霉素、氧氟沙星、链霉素、丁胺卡那、卡那霉素敏感。调查结果表明,呼和浩特市周边地区牛群中存在K99感染,且多发于0~2月龄犊牛,为养殖户临床合理用药以及进行疫病防控提供参考。

牛大肠杆菌灭活疫苗(K_(99)、F_(41)兼型)的研制与免疫研究

应用分离鉴定的兼有K99、F41菌毛抗原的产ST肠毒素的O142血清型大肠杆菌作菌种,制备出菌毛、全菌体和菌毛与菌体混合等3种灭活疫苗。疫苗物理性状良好,接种怀孕母牛产生良好的免疫反应,接种疫苗14 d后,抗体效价K99 为4.7～6log2, F41 为2.1～5.5 log2;28 d后K99 为6.5～8log2,F41 为2.6～6.5 log2。产犊后8～10 h,对犊牛口服攻毒800亿菌/mL O142大肠杆菌,结果3种疫苗均能使犊牛获得一定保护,保护率分别为89.1%、55.6%和94.6%,对照组为16.3%。菌毛苗和混合苗免疫效果均优于全菌体苗,K99免疫效果优于F41,两次免疫效果优于一次免疫。现地试验取得了良好的免疫效果,证明制备的油乳剂灭活疫苗安全, 免疫原性良好。

河南省2021-2022年犊牛腹泻主要病原流行情况调查

为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)及大肠杆菌K99^(+)(E.coli K99^(+))荧光PCR检测,并对检测结果采用SPSS 27.0软件进行数据统计以及显著性差异分析(Pearson卡方检验)。结果显示:2022年BRV检出率为50.00%、BCoV检出率为41.00%,相比2021年均显著增高(P<0.01),E.coli K99^(+)检出率与上一年相比基本持平,无明显差异(P>0.05),说明2022年BRV、BCoV流行情况愈加严重。进一步分析发现,2022年腹泻病原单一感染检出率为26.79%,其中主要是BRV感染,与2021年单一感染检出率25.29%基本持平,差异不显著(P>0.05)。2022年腹泻病原混合感染检出率为35.71%,且主要以BRV、BCoV混合感染为主。相比2021年的12.94%明显上升,差异显著(P<0.01),说明2022年混合感染情况愈加严重。建议针对河南省腹泻流行情况有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了2021年、2022年河南省不同地区犊牛腹泻主要病原流行情况,可为河南省制定犊牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。