抗牛安氏隐孢子虫单克隆抗体的研制与初步鉴定

通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3～4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11).5株单抗的染色体数目平均在96～98条之间,上清效价分别在1:100和1:12 800之间,腹水效价分别在1:12 800和1:204 800之间.采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗.对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52.7kDa,轻链分子量约为24kDa.