秦川牛心肌细胞色素C提取纯化及鉴定的研究

以健康秦川牛新鲜心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析过滤后采用国产D-85大孔离子交换树脂纯化。研究结果表明,提取纯化后细胞色素C,定性鉴别正常,与标准品在紫外可见分光光度上扫描,吸收光谱相同,在520nm和550nm处有最大吸收峰。电泳图谱显示,纯化后的细胞色素C为一条粗带,与纯品比较位置相同。纯化后样品铁含量平均为0.42%,酶活力平均为96.2%,符合中国药典规定。

牛心肌肌球蛋白轻链激酶的提纯及其一些生物化学性质的研究

本文采用离子交换柱层析、硫酸铵盐析、亲和层析等方法,从牛心肌中提取、纯化了肌球蛋白轻链激酶(MLCK),酶的比活性为12nmolPi/mg Min^(-1).提纯倍数为499倍,对底物ATP的km值为220μmol/L,MLCK为Ca^(2+)、钙调蛋白依赖性酶,在EGTA存在时,激酶无活性。同时还发现.低Mg^(2+)浓度时.MLCK 活性升高.高Mg^(2+)(4.5mmol/L以上)时,MLCK活性反而下降。

秦川牛心肌细胞色素C的提取与检测

为综合开发利用秦川牛产品,进一步优化牛心肌细胞色素C提取工艺条件,试验以秦川牛心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析后测定其细胞色素C含量。结果表明,所制备的细胞色素C定性鉴别正常,比色定量测定平均收率为146.3mg/kg,优于文献报导的结果,说明采用这种方法提取牛心肌细胞色素C是可行的。

秦川牛心肌渣辅酶Q_(10)的萃取方法研究

为综合利用资源,以提取细胞色素C后的秦川牛心肌渣为原料,采用醇碱皂化,石油醚萃取,硅胶柱层析,无水乙醇重结晶得到CoQ10。研究结果表明,醇碱皂化适宜温度为90℃,皂化时间为30min,萃取2次。经薄层层析样品仅有一个斑点,Rf=0.56(a=7.5 cm,c=13.5 cm),样品与标准CoQ10的紫外吸收光谱相同,在275nm处有最大吸收峰,定量测定样品的纯度为91.2%。从牛心肌渣萃取CoQ10的方法是可行的。

牛心肌肌红蛋白的提取纯化与鉴定

以牛心肌为原料,采用分段盐析法提取肌红蛋白,离心透析后,用Sephadex G-100柱层析纯化。电泳结果表明,纯化后的肌红蛋白为一条粗带,与纯品肌红蛋白比较位置完全相同,试验证试采用分段盐析法提取,Sephadex G-100柱层析纯化方法可获得肌红蛋白纯品。

抗牛心肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

血清肌酸激酶(CK)及其同工酶在诊断急性心肌梗塞及骨胳肌损伤有重要的临床价值。近年来国内外已广泛应用,其方法有离子交换柱层析法,电泳法和定量的动力学法(DTT对CK-MB选择活性作用)以及免疫学方法等。前三种方法均较繁琐且有的特异性差。免疫学方法较为省时省力,尤其特异性、敏感性均较高,但目前使用的均为多克隆抗体。为进一步提高CK检测中特异性和敏感性,且由于人心CK-MM抗原来源较困难,我们制备了抗牛心CK-MM单克隆抗体。

提高牛心肌细胞色素C（粗品）收率的探讨

介绍了由牛心肌提取细胞色素Ｃ工艺进行改造后的试验情况。在原工艺基础上，首先增加热水处理使脂肪溶解、上浮，迅速冷却再使脂肪凝固，从溶液中捞出，降低提取液粘度，排除细胞色素Ｃ受脂肪包埋现象，然后改变提取液ｐＨ值由４．０调整到３．５；温度由３５℃上升到４５℃，为细胞色素Ｃ向酸性水溶液中扩散创造最佳环境。通过３批对照试验收得率由平均１３０ｍｇ／ｋｇ提高到１４８ｍｇ／ｋｇ，且产品质量符合《中华人民共和国药典》（１９９０）要求。

牛心肌蛋白酶解物的呈味特性与其结构关系研究

利用10种食品级蛋白酶分别对牛心肌进行酶解处理,并探究酶解产物的呈味特性与肽结构之间的内在联系。分别采用Protease A、Protease P、Proteax、Flavourzyme、Alcalase、Papain、Bromelain、Protamex、Netutrase和Sumizyme BNP-L对牛心肌进行酶解,分析蛋白酶解物的水解度、分子质量分布、酶特异性,肽谱图与呈味特性的关系。研究结果表明,Protease A作为一种内外肽酶的复合酶制剂,是制备高鲜味、低苦味酶解物的最佳蛋白酶;然而,2种内肽酶(木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶)会导致蛋白酶解物产生苦味。偏最小二乘回归(partial least squares regression,PLSR)分析表明,酶解物的鲜味与低分子质量肽(<1 kDa)具有一定的正相关性,而其苦味与分子质量为0.5~1 kDa的肽组分呈正相关。蛋白酶特异性和肽谱图分析揭示,由于10种蛋白酶具有不同的酶切位点,导致相应的蛋白酶解物形成了不同的肽谱图,从而阐明蛋白酶解物的不同呈味特性。通过内肽酶和外肽酶联合酶解作用牛心肌,可以有效地减少蛋白酶解物的苦味并增加其鲜味。

牛心肌线粒体ADP／ATP载体蛋白的分离及应用

将分离的牛心肌线粒体先与其ＡＤＰ／ＡＴＰ载体蛋白抑制剂苍术苷交联，然后用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解线粒体膜，经羟基磷灰石离心制得该载体蛋白。用聚丙烯酰胺凝胶电泳及生物学方法鉴定，发现所分离的ＡＤＰ／ＡＴＰ载体蛋白分子量约为３０ＫＤ，可作为抗原用于抗该载体蛋白抗体的研究。

抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体制备中免疫抗原的选取

目的 获得与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ没有交叉反应的抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ (HcTnⅠ )特殊位点的单克隆抗体。方法 选择了包括牛心肌肌钙蛋白Ⅰ (BcTnⅠ )、根据HcTnⅠ氨基酸序列的亲水性设计的 4个钥孔虫戚血蓝蛋白 (KLH)偶联肽段和一个八倍体多肽分子 (MAP)等 6种代用抗原 ,通过免疫、杂交和筛选 ,获得了能分泌抗 (HcTnⅠ )的IgG型抗体的杂交瘤细胞株 ,并对得到的抗体进行了特异性鉴定。结果 用其中 4种抗原免疫得到了抗HcTnⅠ的IgG型单抗的细胞株 ,其中的 3种合成肽可以得到分泌抗HcTnⅠ特殊位点的IgG型单抗细胞株。结论 为临床上检测cTnⅠ以诊断急性心肌梗塞 。

急性心肌梗死溶栓治疗后迟发性ST段再抬高的临床意义

目的:研究急性心肌梗死(AMI)静脉溶栓后迟发性ST段再抬高的临床意义。方法:入选发病12小时之内行溶栓治疗成功的AMI患者180例,根据溶栓12小时后ST段是否再抬高分为A、B两组,监测CPK、CK-MB峰值及峰值时间,记录有无再灌注心律失常、心力衰竭,1周、1月、3月及6月各随访1次,复查心脏超声。结果:A组前壁心肌梗死的发生率,合并高血压、糖尿病、血脂紊乱者以及CPK、CK- MB峰值显著高于B组,CPK、CK-MB峰值时间较B组提前程度小,心力衰竭、室壁瘤发生率及死亡率均显著高于B组(P均<0.05)。结论: AMI溶栓成功后迟发性ST段再抬高者心力衰竭、室壁瘤发生率高,预后相对差。