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牛抑制素pET32a-matpeptide重组蛋白质的诱导表达及鉴定
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作者 吴迪 穆秋玲 +4 位作者 齐晓龙 常迪 李贺娟 郭勇 倪和民 《中国农学通报》 2017年第14期121-124,共4页
为表达纯化出免疫原性良好的牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,并利用重组蛋白大量表达纯化出目的蛋白,通过Western blot鉴定目的蛋白的免疫原性。结果表明:使用1 moL/L IPTG在18℃诱导表达18 h... 为表达纯化出免疫原性良好的牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,并利用重组蛋白大量表达纯化出目的蛋白,通过Western blot鉴定目的蛋白的免疫原性。结果表明:使用1 moL/L IPTG在18℃诱导表达18 h可得到重组抑制素蛋白,经重组蛋白小量表达确定目的蛋白以可溶性形式存在,Western blog试验表明重组蛋白有较高的免疫原性。本试验诱导表达出可溶性、免疫原性较高的抑制素pET32a-matpeptide重组蛋白质,为后续制备抗抑制素α亚基抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 牛抑制素 重组蛋白 蛋白免疫印迹 免疫原性
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牛抑制素α亚基基因克隆及表达载体的构建
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作者 吴迪 邢书涵 +3 位作者 齐晓龙 刘云海 郭勇 倪和民 《中国农学通报》 2015年第35期8-12,共5页
为克隆牛抑制素α亚基基因,构建抑制素p ET32a-成熟肽表达载体,从河北大厂县屠宰场采集卵巢,提取总RNA并反转录成c DNA,根据Gen Bank NM_174094.4设计一对引物扩增出成熟肽c DNA,将所扩增基因插入到p ET32a表达载体Bam HⅠ与HindⅢ酶切... 为克隆牛抑制素α亚基基因,构建抑制素p ET32a-成熟肽表达载体,从河北大厂县屠宰场采集卵巢,提取总RNA并反转录成c DNA,根据Gen Bank NM_174094.4设计一对引物扩增出成熟肽c DNA,将所扩增基因插入到p ET32a表达载体Bam HⅠ与HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒抑制素p ET32a-成熟肽。结果成功构建出抑制素α亚基基因。笔者初步得到了抑制素重组质粒,为今后重组蛋白原核表达的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛抑制素α亚基 成熟肽 载体构建
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牛肌肉生成抑制素基因原核表达及其功能的初步研究 被引量:5
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作者 倪宏波 宋丽 +3 位作者 崔玉东 邵红 李冬野 王喆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期622-626,共5页
根据GenBank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,扩增牛的MSTN基因,将其与pET32a(+)质粒连接,构建pET-MSTN重组质粒,重组菌经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白分子量大小约为60.4ku,表达蛋白经纯化、复性后接... 根据GenBank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,扩增牛的MSTN基因,将其与pET32a(+)质粒连接,构建pET-MSTN重组质粒,重组菌经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白分子量大小约为60.4ku,表达蛋白经纯化、复性后接种小鼠,结果复性高剂量组小鼠体重的增长与其他各试验组及对照组之间差异显著,而其他各试验组与对照组之间体重增加差异不显著。 展开更多
关键词 肌肉生成抑制 原核表达 小鼠 功能
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牛骨血管紧张素转化酶抑制肽发酵动力学及结构与特性分析 被引量:1
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作者 刘丽莉 李丹 +2 位作者 尹光俊 梁严予 康怀彬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期52-58,共7页
前期筛选蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U),结合嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus,St)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)混合发酵牛骨粉制备血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,对其发酵... 前期筛选蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U),结合嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus,St)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)混合发酵牛骨粉制备血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,对其发酵动力学进行研究,采用Logistic和Luedeking-Piret等方程对发酵过程进行非线性拟合,建立发酵过程中菌体生长、产物生成、基质消耗动力学模型,拟合度均高于0.97。通过扫描电镜、紫外扫描、差示扫描量热仪对ACE抑制肽进行结构表征。结果表明,由于牛骨ACE抑制肽具有良好的吸湿性,其在扫描电镜下表面出现明显的沟壑痕迹;在222 nm波长处出现强吸收峰,符合胶原多肽的特征吸收;与牛骨胶原蛋白相比,其热变性温度升高,热稳定性较强。同时对其特性分析表明,牛骨ACE抑制肽具有较好的溶解性、较强的耐酸碱性,在0.9 mol/L以内的NaCl浓度条件下耐盐性较强,胃肠道酶对牛骨ACE抑制肽的影响较小。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 骨血管紧张转化酶抑制 发酵动力学 结构表征 特性
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牛肌生成抑制素基因全序列的克隆及原核表达
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作者 倪宏波 宋丽 +3 位作者 崔玉东 邵红 李冬野 王喆 《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第6期46-49,共4页
根据GenBank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,利用RT-PCR技术,以牛肌细胞总RNA为模板,对牛的肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列进行扩增。经酶切鉴定、DNA测序和氨基酸序列分析证实MSTN基因克隆成功。从pMD18T-MSTN克... 根据GenBank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,利用RT-PCR技术,以牛肌细胞总RNA为模板,对牛的肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列进行扩增。经酶切鉴定、DNA测序和氨基酸序列分析证实MSTN基因克隆成功。从pMD18T-MSTN克隆中获得MSTN编码序列,将其与pET32a(+)质粒连接,构建pET32a(+)-MSTN重组质粒,重组菌经IPTG诱导在大肠杆菌中表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的,SDS-PAGE特异区带分子量为60ku。 展开更多
关键词 肌生成抑制基因 克隆 原核表达
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Sequencing Analysis of Myostatin Gene (MSTN) for Meat Cattle in Mongolia
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作者 Undarmaa Budragchaa Munkhtogtokh Baljinnyam +3 位作者 Davaakhuu Luvsan Sergelen Baldan Nyamsuren Balsai Sodnom Lkhagvasuren 《Journal of Agricultural Science and Technology(A)》 2016年第6期429-434,共6页
In developed countries, study on special or candidate genes, which are useful for identifying species, breed and productivity of livestock, was conducted at high level and the results have already been used in practic... In developed countries, study on special or candidate genes, which are useful for identifying species, breed and productivity of livestock, was conducted at high level and the results have already been used in practice. Such advanced technology and innovation that we are facing is necessary to adopt in Mongolia. In this study, the myostatin gene (MSTN) was investigated as a candidate gene for meat animal in Mongolian breeds of cattle. The conventional phenol-chloroform method and FavorPrepTM tissue DNA extraction kit were used for DNA isolation, and the polymerase chain reaction (PCR) and sequencing analysis were used for further study. The nucleotide sequences of MSTN gene from Selenge, Kazakh white head breeds and Mongolian cattle were sequenced and reported on the DDBJ/EMBL/GenBank database (LC142726, LC146648, LC146649), and Selenge breed showed the result of single nucleotide mutation in MSTN gene. 展开更多
关键词 Meat cattle candidate gene myostatin gene sequencing.
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