牛新孢子虫基因芯片检测方法的建立

为建立牛新孢子虫准确快速检测方法,本研究根据犬新孢子虫NcSAG1基因、Nc5基因和NcSRS2基因,以及弓形虫GRA6基因和牛性腺基因,设计合成相应的5对引物和5条芯片探针,以牛性腺基因为内标监控基因,进行芯片杂交试验,经反应条件的优化,建立了含监控内标,可对新孢子虫3个基因进行同步检测,并可与弓形虫GRA6基因进行区分检测的基因芯片检测方法.该方法对新孢子虫的最低检测限分别为102拷贝/μL,并且具有良好的特异性和重复性.利用建立的方法对157例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为99.3 ％～98％.该方法的建立为新孢子虫等多病原高通量检测方法的研究奠定基础.

新疆地区牛新孢子虫病血清抗体检测及结果分析

为了解新疆地区牛新孢子虫病的流行情况,用ELISA方法对采自新疆6个地区327份的牛血清进行了新孢子虫病的抗体检测,并以第一次检测结果为依据,对20头牛进行了5次连续采样检测,每次间隔30～40天。检测结果表明,该病在新疆不同地区都有不同程度的发生和流行,平均阳性率为24.5%,且在年龄大和流产牛群中阳性率偏高,血清抗体阳性持续时间至少半年以上。

新疆伊犁部分地区奶牛新孢子虫病血清学调查

用新孢子虫地方虫株SRS2重组抗原作为ELISA诊断抗原,对新疆伊犁部分地区奶牛新孢子虫病进行了血清学调查。结果表明,从101份奶牛血清样品中检出牛新孢子虫抗体阳性血清12份,阳性率为11.9%,各种年龄段的奶牛均可感染,经统计学分析,差异不显著(P>0.05)。本次血清学调查为新疆伊犁地区有效地控制该病的发生和蔓延提供了重要的理论依据。

3种ELISA试剂盒对牛新孢子虫血清抗体比较检测

用瑞典Svanova公司、美国IDEXX公司和美国VMRD公司生产的3种检测新孢子虫血清抗体ELISA试剂盒对来自澳大利亚牛血清(41份)、新西兰牛血清(40份)、乌拉圭牛血清(30份)和中国新疆牛血清(46份)进行了同步检测和比较分析,并以其中2个试剂盒检测结果均为阳性或阴性的血清为真阳性或真阴性,对另1个试剂盒在诊断相对敏感性和相对特异性方面进行了比较评估。结果表明,3个试剂盒的诊断相对敏感性和诊断相对特异性分别为:85.7%和92.5%(Svanova)、95.8%和98%(IDEXX)、88.5%和98%(VMRD)。3个试剂盒都具有较好的重复性,检测低限相近。在对样品的检测中,IDEXX与VMRD两个试剂盒检测符合率较高,但对不同国家的样品检测符合率差别较大。

牛新孢子虫NcSRS2基因真核重组质粒的构建及鉴定

为了解牛新孢子虫NcSRS2基因的生物学特性,试验扩增牛新孢子虫NcSRS2基因,亚克隆至pMD18-T载体后进行PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析,最后克隆至pVAXⅠ真核表达载体中,并进行PCR鉴定和酶切鉴定。结果表明:牛新孢子虫NcSRS2基因长度为1 227 bp,与GenBank中发表的NcSRS2(AF061249)核苷酸序列同源性为99%;构建的真核重组质粒pVAXⅠ-NcSRS2正确。

奶牛四种流产性疾病的流行现状及疫苗研究进展

奶牛布氏杆菌病、传染性鼻气管炎、病毒性腹泻-黏膜病及新孢子虫病是导致我国奶牛流产发病比例升高的主要疾病,有效防控这四种疾病一直是世界关注的重点之一。本文对上述四种疾病的流行现状及疫苗研究进展进行了综述。

一起奶牛感染性流产的诊断及分析

为了对引起黑龙江省某奶牛场奶牛流产的病原进行诊断,采用病毒检测、细菌分离、PCR扩增等对2头流产胎儿进行检测,无菌采集流产胎儿的内脏器官和脑组织进行病原学鉴定。结果表明：牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和新孢子虫为阳性,其他能够引起奶牛流产的细菌、病毒和寄生虫检测结果均为阴性。通过流行情况、临床症状及实验室对病原的检测和分离,说明该牛场本次流产是由IBRV和新孢子虫混合感染引起的。