猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

本研究旨在建立一种快速、高效、灵敏的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重鉴别荧光定量PCR检测方法,针对CSFV E2基因和BVDV 5′UTR基因序列的高度保守区域设计特异性引物和探针,经过反应条件及体系的优化,建立双重RT-qPCR方法。结果表明,该方法最低检测值均为5 copies·μL^(-1),比普通PCR灵敏约200倍,敏感性高;可准确区分CSFV和BVDV,且与口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒等猪常见病原均无交叉反应,特异性强;组内和组间重复变异系数均小于2%,重复性良好。对109份临床样品及7份商品化牛血清分别采用构建的双重RT-qPCR检测方法及CSFV RT-qPCR检测方法(GB/T 27540—2011)和BVDV RT-qPCR检测方法(GB/T 18637—2018)进行检测和对比,符合率为100%,同时,检测结果还证实目前商品化牛血清中仍存在BVDV污染,为CSFV、BVDV的鉴别诊断及流行病学的调查提供了技术支持。

牛腹泻病流行病学调查与分析

养殖业迅猛发展,农业产业结构的转型、升级、畜产品市场需求供给发生巨大变化,动物疫病严重制约养殖业健康发展。由于肉牛、奶牛生产中长期存在病毒性腹泻病的临床病例,通过对养殖环节开展流行病学调查以及对从临床收集的腹泻样品、肛拭子样品和对应的血清样本进行实验室检测,结果发现腹泻病主要由轮状病毒、沙门氏菌、大肠杆菌、冠状病毒、魏氏梭菌、病毒性腹泻等病原引起。为有效防控腹泻病发生给养殖业造成损失,围场满族蒙古族自治县动物疫病预防控制中心、河北省科技师范学院对围场县及部分地市开展了流行病学调查、采样检测、实验室诊断等项工作并进行分析,并提出了相应防控措施。