基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立

【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3~5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。

牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

牛流行热(BEF)是由牛流行热病毒(BEFV)引起的一种急性、热性传染病,是一种牛非接触性的虫媒病毒性疾病。该病发生于夏末秋初,给养殖业造成了重大损失。目前,国内外并没有针对该病的血清学检测方法。本研究针对BEFV的免疫保护基因——G基因(包含有G1基因的片段),设计引物,构建了表达载体,表达了该基因,利用此蛋白作为抗原,建立了牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法。本方法为牛流行热病毒的检测提供了有效的检测手段,也为我国制定牛流行热病毒的防控战略提供一定的理论依据。

2015年西藏地区牦牛流行热病血清流行病学调查

为调查牛流行热病在西藏地区牦牛群体中的流行情况,本试验应用双抗原夹心ELISA对2015年采自西藏地区的206份犊牦牛、成年牦牛血清进行牛流行热抗体检测。结果显示,49份血清呈牛流行热抗体阳性,总阳性率为23.8%(49/206),其中成年牦牛血清总阳性率为39.3%(44/112),成年母牦牛血清阳性率为46.2%(36/78),成年公牦牛血清阳性率为23.5%(8/34);犊牦牛血清总阳性率5.3%(5/94),母犊牦牛血清阳性率为9.3%(4/43),公犊牦牛血清阳性率为1.9%(1/51)。结果表明,西藏地区牦牛存在牛流行热病毒的感染,且年龄、性别与该病的发生有重要的关系。

牛流行热病的诊断及预防

近年,随着饲养业的不断进步,养牛业也得到了快速的发展,但是因为饲养生产中存在非常多的影响因素,很容易导致牛群发生疾病。而牛流行热在生产中比较常见,临床生产中曾经称之为'三日热'或者是'暂时热',感染的病牛主要症状就是机体发热,呼吸表现比较紧迫,同时可见关节障碍,但一般都是呈良性经过。

牛流行热病的防治

牛流行热病是由病毒引起的急性发热传染病,病牛典型症状是体温突然升高、呼吸困难、流眼泪、跛行等。虽然本病病程较短,一般经过2~3 d就可恢复正常,但是发病迅猛,能够在牛群中迅速传播,可以明显降低奶牛的产奶量,给牛场带来一定的经济损失,因此必须引起养殖人员的关注。

牛流行热病的诊治体会

1990年以来,由于牛流行热病的多次流行,湖南省慈利县养牛业的发展受到了严重的影响。为了搞好动物疾病的防控,笔者从诊疗实践中梳理出了一套牛流行热病的经典防治方法,文章主要从该病的流行特点、临床症状、诊断、辩证治疗、防治措施等方面作了详细的阐述和总结。

牛流行热病毒山东分离株α3基因序列分析及原核表达与纯化

为深入研究牛流行热病毒(BEFV)编码的α3非结构蛋白的功能及其在研发新型BEFV疫苗和诊断试剂上的应用,本研究对本实验室分离保存的BEFV采用RT-PCR法对其α3基因进行扩增;用DNAStar软件对序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;用ProtParam和抗原表位分析生物信息学软件研究α3蛋白的亲水性、优势抗原表位区;分别用限制性内切酶双酶切目的基因α3和pGEX-4T-1载体,构建pGEX-4T-1-α3原核表达载体,并进行诱导表达。结果表明,成功扩增出156bp的α3基因序列;该α3基因序列与参考毒株的核苷酸序列同源性为98.0%~100.0%,氨基酸序列的同源性也为98.0%~100.0%,表明α3蛋白具有较高的保守性;BEFV的α3蛋白抗原表位分析表明3~5、9~47aa是α3蛋白的优势抗原表位区段,总平均疏水性为-0.737,说明该蛋白以可溶性形式存在;构建的pGEX-4T-1-α3原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达,应用可溶性蛋白纯化的方法获得较高纯度的α3蛋白。本研究为该蛋白的免疫原性验证以及新型牛流行热病毒疫苗研发提供了数据参考。

夏季预防牛流行热病

牛流行热是病毒引起的一种急性传染病。蚊蝇叮咬病牛时将血液内的病毒吸入,这种带毒的蚊蝇再叮咬其他牛群时,即可将病毒注入牛体,其黄牛、水牛、奶牛均可感染发病。此症,发病快、精神沉郁,食欲废绝,反刍停止,眼结膜充血、流泪、鼻镜干燥、有鼻漏口、水粘,流成线状;体温升高至41℃～42℃,呼吸急促,每分钟80次以上,肺部听诊,肺泡音高亢;后肢微肿并有痛感,不愿行走,喜卧、不赶不起,起后站立不稳,强行驱赶步态不稳,后肢上提困难,呈擦地行走;排粪多为便秘呈黑褐色,夹有粘液,尿量减少,孕牛有流产,病牛经及时综合治疗2天～3天可恢复采食。

奶牛疑似牛流行热病例报告

奶牛疑似牛流行热病例报告马小容柳州市兽医站５４５００５在１９８７年６月中旬至７月上旬，本市鹏鸽江奶牛场曾发生过一次疑似流行热，发病率为１６．３％，由于及时采取措施，无一头死亡。１９９２年９月１２—２０日，即相隔５年后，流行热再度在该场奶牛中暴发。现报...

夏季预防牛流行热病

牛流行热是病毒引起的一种急性传染病。蚊蝇叮咬病牛时将血液内的病毒吸入,这种带毒的蚊蝇再叮咬其他牛群时,即可将病毒注入牛体,黄牛、水牛、奶牛均可感染发病。此症发病快,精神沉郁,食欲废绝,反刍停止;眼结膜充血、流泪,鼻镜干燥,有鼻漏口、水黏,流成线状;体温升高至41～42℃,呼吸急促,每分钟80次以上,肺部听诊,肺泡音高亢;后肢微肿并有痛感,不愿行走,喜卧,不赶不起;起后站立不稳,强行驱赶步态不稳,后肢上提困难,呈擦地行走;排粪多为便秘呈黑褐色,夹有黏液,尿量减少,孕牛有流产。病牛经及时综合治疗,2～3天可恢复采食。治疗本病无特效药,应采取综合防治措施:①注意观察牛群,发现病牛及时隔离治疗,可使用安痛定。

盛夏慎防耕牛流行热病

耕牛流行热病在盛夏7月至8月中下旬最易发生。病牛主要表现为体温升高至41-42℃,呼吸急促,眼结膜充血、流泪、鼻镜干燥有鼻漏;口水粘稠,流成线状;排粪干燥呈黑褐色,混杂粘液,尿量减少;精神萎顿,食欲废绝,反刍减少或停滞。防治措施:1.加强饲养管理,避免牛群暴晒或雨淋。

牛流行热病的防治

牛流行热又名牛流行性感冒,简称流感,俗称“撮脚瘟”,是奶牛、黄牛和水牛的一种急性、热性、全身性传染病。此病的发生具有明显的周期性。 牛流行热多发生于多雨高温季节。其发病率高,死亡率低,潜伏期为3～7天,病牛体温可高达42℃以上。该病的症状为:呼吸增快,心跳加剧,精神沉郁,肌肉震颤;鼻腔有浆液性鼻液流出,其量不定;患年后肢关节和腱鞘部波动性肿胀,与瘤胃臌气相似。

如何在夏季预防牛流行热病

在诸多研究调查和实践中证明，夏季与其它季节相比是牛发生疾病最高的季节，其中牛流行热是弹状病毒所引发造成的一种急性传染病，这种并并不是仅仅限与肉牛，还表现在不同品种、不同性别、年龄不限的牛，可以说只要属于牛这个种群，基本都难逃牛流行热的侵害，当然防范措施做好，可以很大程度上减低牛的发病率。牛流行热多发生在夏季，其具体时间表现为7～9月份，例如：在阴沉闷热且空气潮湿或者昼夜温差大，而这正是适合其牛流行热生长的环境，此病表现为发高热、呼吸和消化器官发生严重卡他性炎症。倘若牛流行热在牛群中发生，其能够在最短时间内传染，给牧民造成不可估量的经济损失。尽管患病的牛呈良性，3d左右即可康复，如若重病患牛在短时间内没有进行治疗，很容易引起并发症等其它疾病，本文在研究牛流行热病的同时，结合其症状和其它因素，从而找出预防牛流行热病的有效措施，为广大医疗工作者和牧民提供强大的理论支撑。

牛流行热病的诊治

牛流行性热病是由牛流行性热病毒引起的一种急性、热性传染病,具有较为明显的周期性和季节性。本文在分析该病流行病学及临床症状的基础上,提出了相应的诊断和治疗措施。

中西兽医结合防治牛流行热

牛流行热又称暂时热、三日热,是由弹状病毒属牛流行热病毒所引起牛的一种急性、热性传染病。在夏秋季阴湿多雨季节或干旱燥热气候下最易流行,不同年龄、性别的黄牛、犏牛、牦牛易感染,其中黄牛最易感染,一般呈良性经过,死亡率在1%以下。

一例牛流行热的诊治体会

牛流行热病又称三日热或暂时热,是由牛流行热病毒引起牛的一种急性热性传染病。本文就牛流行热病的病学特征、临床症状做了介绍,并对一例瘫痪型牛流行热的诊治做了总结,以供参考。

应用中药提取物发酵产品防控牛流行热

该文主要论述牛流行热的特点、症状,并提出相应的防治方法。用六安恒佳生物科技有限公司生产的中药提取物发酵产品治疗牛流行热:第一,呼吸型用"舒达",按250 g拌精料10~20 kg,连续饲喂3~5 d。第二,胃肠型用"刍胃安",按200~250 kg体重牛,300 mL/次,1次/d,连用5 d。第三,运动型用"转运安",按500 g拌精料100~200 kg,连续饲喂5~7 d。第四,混合型用"刍疫清",按1 kg拌精料250~500 kg,连续使用5~7 d。

牛流行热法国佐剂灭活疫苗效果好

中国农科院哈尔滨兽医研究的科技人员研制的牛流行热油佐剂灭活疫苗,从1993年开始在全国十几个省、市推广应用以来,在预防牛流行热病起到重要作用,受到广大用户的欢迎和好评,但由于该疫苗使用过程存在不同程度接种反应,严重影响该疫苗进一步推广应用。从1997年开始。

四种常见牛病特点及防治措施

对牛的几种常见疾病:牛口蹄疫、牛流行热病、牛结核病、小牛腹泻等发病特点进行了分析,并提出了相应的防治措施。