牛源肠球菌耐药基因与表型关系及16S rDNA同源性分析

为探究牛源肠球菌耐药性基因型与表现型之间的关系,采用微量肉汤稀释法分析62株肠球菌对7种抗生素的耐药表型,采用PCR技术检测相关的抗药基因,并分析62株肠球菌16SrDNA的同源性。结果显示,98.4%,98.4%,63.9%,6.5%,6.5%的菌株分别对万古霉素、红霉素、四环素、氯霉素和庆大霉素不敏感,100.0%菌株对卡那霉素敏感。100.0%的菌株均携带aphA3、aadA、aadE和aac6aph2基因;98.4%,98.4%,98.4%,95.2%,88.7%,72.6%,3.2%的菌株分别携带ermB、tet(M)、tet(O)、aac、mefA、vanB和vanA基因。62株肠球菌中均未检测出catpIP基因。结果表明,红霉素的耐药性(98.4%)与ermB(98.4%)基因呈正相关,与mefA(88.7%)的相关性也较好。氯霉素的耐药表型(6.5%)与catpIP(0)基因的相关性较好,万古霉素耐药表型(98.4%)与vanB(73.6%)基因相关性较好,其他耐药表型与检测的基因无明显相关性。16SrDNA分析表明,62株肠球菌按同源性可分为A、B、C、D、E、F这6种类型,其中E型与致病株EU717958的同源性较近,F型与致病株EU717964的同源性较近。

宁夏地区牛源肠球菌分离鉴定及耐药性与毒力基因检测

为了了解宁夏地区牛源肠球菌的耐药性及耐药基因和毒力基因的携带情况,本试验使用显色培养基及PCR法对肠球菌进行分类鉴定;采用药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)测定肠球菌对16种抗菌药物的敏感性;最后采用PCR方法对9种相关耐药基因与7种肠球菌毒力基因进行检测并测序。结果显示,在分离鉴定出的255株肠球菌中,屎肠球菌有78株(30.59%),粪肠球菌有53株(21.96%)。药敏试验结果显示,分离菌对磺胺异恶唑和杆菌肽耐药率达到了100%;其次是苯唑西林(92.16%)、红霉素(65.88%)、四环素(65.49%)和青霉素(56.86%)。分离菌对万古霉素和利奈唑胺高度敏感,敏感率分别为92.54%与95.29%。耐药基因检测结果显示,氨基糖苷类耐药基因aph(3)′-Ⅲ的检出率最高,为100%;其次是红霉素类耐药基因ermB,为46.27%;未检出耐万古霉素耐药基因VanA、VanB、VanC。已检测的毒力基因明胶酶gelE的携带率最高,为37.60%;其次为心内膜炎抗原efaA,为36.10%。结果表明,宁夏地区牛源肠球菌的多重耐药现象比较严重,应当加以重视。

牛源粪肠球菌人工感染BALB/c雌鼠肾脏组织过程中PRNP和PRND的表达变化研究

为了研究牛源粪肠球菌感染对小鼠PRNP和PRND基因表达水平的影响,用牛源粪肠球菌感染小鼠,在1~7 d内解剖小鼠,制作病理组织革兰氏染色及石蜡切片HE染色,最后通过荧光定量PCR检测感染后1~7 d内PRNP和PRND的表达情况。结果表明:牛源粪肠球菌感染BALB/c雌鼠后,肾脏组织病变较明显,实时荧光定量检测确实对PRNP和PRND基因的表达量存在影响;球菌感染PRNP和PRND基因在每个时段的表达量均高于空白对照组。说明小鼠肾脏的PRNP和PRND基因的表达水平随着感染时间的改变而发生变化。

牛源肠球菌的分离鉴定及毒力因子基因的检测

为探究牛源性肠球菌中6种毒力因子基因(ccf、asa1、ace、esp、cylA、gelE)的分布情况,采集了不同地区382份疑似隐形乳腺炎的奶样,常规分离纯化细菌,采用16SrRNA和16S^23SrRNA方法相结合的方法,共鉴定出了68株肠球菌并检测了其溶血特性和上述6种毒力基因的存在情况。结果显示,40株(58.82%)表现为α-溶血,10株(14.71%)为β-溶血,18株(26.47%)为γ-不溶血。68株(100%)携带asa1基因,49株(72.06%)携带gelE基因,43株(63.24%)携带ccf基因,12株(17.65%)携带ace基因,10株(14.71%)携带esp基因,6株(8.82%)携带cylA基因。54.41%的分离菌株同时携带gelE、ccf、asa1毒力基因,而青海民和分离株的esp与ace,gelE与ccf同时出现,有一定规律性;但溶血性基因cylA与14株溶血性肠球菌没有相关性。研究牛源肠球菌的溶血特性与毒力基因携带情况,对肠球菌性奶牛乳腺炎的防控具有指导意义,同时也为动物与人之间病原互相传播的研究提供试验依据。