一株鸭源大肠杆菌致病性及毒力因子检测

从新疆某鸭场的病鸭中分离到1株大肠杆菌,"O"抗原血清学鉴定为O78,药敏试验结果显示该分离株已产生较高程度的耐药性。对鼠疫菌素受体基因fyuA、铁调节蛋白基因irp2、LEE致病岛转录活化因子ler、紧密粘附素eaeA、Ⅰ型菌毛必须蛋白基因fimC、P型菌毛结构基因papA和血清耐受基因iss进行基因测序分析,结果表明该株细菌存在强毒力基因(high-pathogenicity island,HPI)。动物实验表明,该菌可引起雏鸭发生急性全身败血症;10日龄雏鸭半数致死量为2.0×105CFU/ml,表明该菌具有高致病性。

酸马奶提取植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性研究

为研究从酸马奶中提取的植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性,本试验提纯植物乳杆菌DSM20174细菌素,经过硫酸铵沉淀、透析后得到细菌素粗提液,再利用SephadexG-100凝胶柱层析进行纯化后,细菌素的比活力明显增加,达到154.70AU/mL,得率为43.5%。采用牛津杯法测定纯化的植物乳杆菌DSM20174细菌素在3种不同方式处理下对牛源野生致病性大肠杆菌O78抑菌效果的影响。结果显示：1植物乳杆菌DSM20174细菌素在5组温度处理下,随着温度的升高抑菌作用降低,各组抑菌作用差异显著（P〈0.05）。即使121℃处理30min后,抑菌直径仍达14.90mm。2植物乳杆菌DSM20174细菌素在pH 2.0-12.0由低到高的11组酸碱处理下,pH越大抑菌直径越小,且除了pH 9.0和pH 10.0之间差异不显著（P〉0.05）外,其余各组抑菌作用均差异显著（P〈0.05）。3植物乳杆菌DSM20174细菌素经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶3种酶处理后抑菌直径变化明显,处理前后抑菌作用均差异显著（P〈0.05）。结果表明植物乳杆菌DSM20174细菌素是较好的抑菌活性物质,但不是热稳定性物质;具有较广泛的pH适用范围,且pH越小时其抑菌活性越强,在最适生长pH时抑菌活性有所增强;不是蛋白酶稳定性物质。

锡林郭勒盟地区酸马奶提取的植物乳杆菌DSM20174的理化特性研究

为研究从内蒙古锡林郭勒盟地区酸马奶中提取的植物乳杆菌DSM20174的抑菌能力和抑菌活性物质的特性，采用牛津杯法将植物乳酸杆菌的菌液和发酵上清液在3种处理方式下，对牛源野生致病性大肠杆菌O78。的抑菌效果进行分析。结果表明：植物乳杆菌DSM20174的菌液和发酵上清液即使在121℃，30min处理后，抑菌直径达仍达到14．10和14．40mm；在pH=2．0时，菌液和发酵上清液的抑菌直径为21．9和22．1mm；而当pH：4．0时抑菌活性明显下降，前者为14．8mm，后者为14．9mm；pH5．0～7．0时，抑菌直径为0：二者分别经胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的反应后，处理前组和处理后组抑菌直径变化均不明显。在3种处理方式下，发酵上清液的抑菌直径均大于同组的菌液的抑菌直径。因此，植物乳杆菌DSM20174是一种较好的抑菌活性物质和热稳定性物质，随着温度和时间的升高，抑菌活性降低。其在pH〈5．0的条件下有抑菌活性，随pH的升高抑菌活性降低，pH越小时抑菌活性越强，pH≥5．0时失去抑菌活性。对蛋白酶不敏感。在相同条件下，发酵上清液的抑菌作用强于菌液。

E.coli O78和LAB对牦牛肠道上皮细胞MAPK/Zonulin通路的影响

为探究牦牛致病性大肠杆菌(E.coli O78)和乳酸杆菌(LAB)对牦牛肠道上皮屏障MAPK/Zonulin通路的影响作用,采用牦牛上皮细胞作为实验模型,Transwell构建单层上皮细胞屏障,设立阴性对照组(Control组)、阳性对照组(Model组,加入1×10^(5)CFU E.coli O78)、低剂量组乳酸杆菌组(LLAB组,加入1×10^(5)CFU E.coli O78和1×10^(5)CFU LAB)、高剂量乳酸杆菌组(HLAB组,加入加入1×10^(5)CFU E.coli O78和1×10^(7)CFU LAB),采用RT-qPCR和Western-blot技术测定各组P38、ERK、JNK、Zonulin的基因和蛋白表达水平。结果:与Control组相比,Model组的P38、ERK、JNK、Zonulin的基因表达水平极显著上升(P<0.01),而其蛋白表达水平呈现显著上升的趋势(P<0.05);与Model组相比,LLAB组P38的基因表达水平极显著下降(P<0.01),ERK、JNK、Zonulin的基因表达水平表现显著下降的趋势(P<0.05),P38、ERK、Zonulin的蛋白表达水平则呈现极显著下降的趋势(P<0.01),JNK的蛋白表达水平表现为显著下降(P<0.05);与Model组相比,HALB组P38、ERK、JNK的基因的表达水平表现为显著下降(P<0.05),Zonulin的基因表达水平表现为极显著下降(P<0.01),P38、ERK、JNK、Zonulin的蛋白表达水平呈现极显著下降的趋势(P<0.01)。结论:E.coli O78可通过上调MAPK通路关键基因P38、ERK、JNK的基因表达水平,同时上调Zonulin蛋白使肠道屏障受损;LAB可以减轻E.coli O78引起的肠道屏障受损,这一作用是通过下调MAPK通路关键基因P38、ERK、JNK的基因表达水平,同时下调Zonulin蛋白表达水平来实现的。