牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感MDBK细胞克隆与鉴定

研究采用有限稀释法将MDBK细胞进行克隆,并放大培养。将2种生物型(致细胞病变型和非致细胞病变型)的牛病毒性腹泻/黏膜病毒混匀,接种克隆的MDBK细胞并收获毒液。采用间接免疫荧光技术检测病毒含量,筛选BVDV敏感细胞。试验成功获得4株单克隆细胞,其中C3株对病毒高度敏感且产毒稳定,确定为BVDV敏感细胞株。

牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。

一株牛病毒性腹泻/黏膜病毒株的分离与鉴定

从云南某牛场疑似BVDV感染的病料通过接种MDBK细胞分离到1株BVDV,为了解分离毒株的特性,进行了病原学和分子生物学研究。该分离毒株连传15代均不产生CPE,为NCP型BVDV。通过电镜检测可观察到直径为40~60 nm病毒粒子。该分离病毒能被牛病毒性腹泻标准阳性血清中和,且能被BVDV IFA荧光抗体识别;采用BVDV 5'-UTR基因特异性引物,经RTPCR可扩增出288 bp特异性片段。将该片段测序后与Gen Bank已发表的30株BVDV 5'-UTR序列进行同源性比较,同源性为68.7%~89.2%。与我国分离的BJ1202株(登陆号:KF925514.1)和Y2株(登陆号:KY964311.1)同源关系最近,均为89.2%。与2014年以来我国分离的BVDV毒株亲缘关系在88%左右。5'-UTR遗传进化分析证实该分离毒株为BVDV-1型。动物回归试验显示,该分离毒株可引起出现体温升高、腹泻、粘膜病等典型的BVD/MD症状。结果表明,分离的毒株为BVDV,命名为BVDV/W株。

规模牛场牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查

[目的]掌握病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)在规模牛场3个品系牛间的感染状况,了解不同品系间BVDV感染是否存在差异。[方法]选择新疆师市范围内的19个规模牛场,分别饲喂中国荷斯坦奶牛(以下简称荷牛),弗莱维赫乳肉兼用牛×荷斯坦奶牛杂交代乳肉兼用牛(以下简称弗荷牛),挪威红牛×荷斯坦奶牛杂交代乳肉兼用牛(以下简称挪荷牛);共计采集血清样品7 965份,分别使用牛病毒性腹泻(BVD)实时荧光RT-PCR检测和牛病毒性腹泻ELISA方法检测抗原和抗体阳性率。[结果]实时荧光RT-PCR阳性总检出率为1.72%,荷牛阳性检出率为1.73%,弗荷牛阳性检出率为1.35%,挪荷牛阳性检出率为2.05%;场群阳性检出率为68.42%;3个品系的犊牛、青年牛、后备牛、成母牛均检测到BVDV,3个品系牛之间抗原阳性率差异不显著;牛病毒性腹泻ELISA方法检测阳性总检出率为36.69%,荷牛阳性检出率为37.11%,弗荷牛阳性检出率为36.74%,挪荷牛阳性检出率为34.02%,场群抗体阳性率为100%,3个品系牛之间抗体阳性率差异不显著。[结论]师市规模牛场3个品系牛均存在BVDV感染,且不同品系间BVDV感染率差异不显著。

牛病毒性腹泻黏膜病诊断与防治

牛病毒性腹泻黏膜病是由病毒性腹泻病毒引发的一种急性热性传染性疾病,临床上患病牛主要表现为发热腹泻、黏膜出现病变。该类疾病对妊娠阶段和犊牛阶段的牛造成的危害较为严重,母牛妊娠阶段受到病毒感染之后,会不明原因的出现流产或产下的胎儿畸形,犊牛表现出严重的腹泻,导致成活率显著下降,给养殖场造成较为严重的经济损失。再加上该类疾病属于免疫抑制性疾病,并且存在隐性感染的现象,一旦发生很难净化处理,会导致该类疾病在养殖场中周期性的传播蔓延,所以就需要掌握牛病毒性腹泻黏膜病的发生流行特点和诊断方法,并构建综合性的防治方案,确保早发现早处理。本文探讨了牛病毒性腹泻黏膜病的诊断与防治,希望对广大同行有所帮助。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

牛病毒性腹泻-黏膜病的诊断防治

牛病毒性腹泻-黏膜病是一种常见的传染病,对畜禽经济和养殖业产生了不小的影响。随着畜牧业现代化的进展,随之而来的是对牛病毒性腹泻等疾病的更高关注和防治要求。本文将介绍牛病毒性腹泻-粘膜病的诊断、防治措施,以期能够为广大畜牧业生产者提供参考和帮助。

牛病毒性腹泻病毒E^(rns)-ELISA抗体检测试剂盒的制备

为建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的血清学方法,本试验以BVDV NADL毒株结构蛋白E^(rns)作为包被抗原,优化反应条件并组装BVDV酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒,通过重复性试验、灵敏性试验、符合率试验和保存期试验验证该试剂盒的准确性、灵敏性和稳定性。结果显示,抗原包被浓度为4μg/mL,1%酪蛋白溶液37℃封闭45 min,被检血清以1∶400稀释孵育30 min,兔抗牛HRP标记二抗以1∶20000稀释孵育30 min,TMB底物反应5 min时,ELISA的反应背景下降,区分度最好。优化后方法的批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均在10%以内,表明该试剂盒具有较好的稳定性;灵敏性试验结果显示,当阳性血清稀释度达到1∶6400时仍可以检测为阳性,说明该试剂盒灵敏度较高;该试剂盒与美国爱德士生物科技公司(IDEXX)BVDV总抗体检测试剂盒共同检测466份临床血清样品,两者总符合率为89.1%;保存期试验结果显示,第4个月时该试剂盒仍能检测到阳性血清,说明稳定性较好。综上表明,本试验利用E^(rns)蛋白建立的BVDV间接ELISA抗体检测试剂盒灵敏度高且重复性好,可为BVDV抗体检测和流行性调查提供新的方法。

牛病毒性腹泻性黏膜病防控技术

牛病毒性腹泻性黏膜病(Bovine Viral Diarrhea-Mucosal Disease,BVD-MD)是一种由牛病毒性腹泻病毒引起的传染病。牛病毒性腹泻性黏膜病的病原体是一种BVDV病毒,主要通过接触传播。该病毒可以引起牛只的急性和慢性感染,导致牛只出现繁殖障碍、免疫功能抑制和生长发育迟缓等问题,给养殖业带来巨大的经济损失。目前,BVD-MD已经成为全球范围内牛养殖业的主要疾病之一。

牛病毒性腹泻黏膜病的诊断及防治

牛病毒性腹泻黏膜病(BVD)是一种影响牛群健康和生产的严重疾病。该病的传播途径复杂,而且可能导致多种临床症状。为了有效管理和控制BVD,诊断和防治至关重要。本文综述了BVD的诊断方法和防治策略,强调了早期诊断、生物安全措施、疫苗接种以及畜牧管理的重要性。

牛病毒性腹泻黏膜病诊断与防治

牛病毒性腹泻黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea-mucosal disease virus,BVDV)引起的一种急性或慢性的牛类病毒性传染病。该病毒主要通过呼吸道和消化道传播,感染后可引起发热、腹泻、脱水、口腔黏膜糜烂、体质量下降等症状,对养牛业造成严重威胁。通过现场调查和文献综述总结了该病的流行病学特征、诊断方法和防治措施。结果表明:通过实施疫苗接种、生物安全管理、病情监控与及时治疗等防控措施,能有效控制BVD-MD的疫情传播和发生。因此,在养牛业中应重视这些防控措施的应用,以减少疾病对牛健康和生产性能的影响。

牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状与防控策略

牛病毒性腹泻-黏膜病是生产养殖中比较常见的一种传染病,该病对养牛业、养羊业、养猪业等均可造成严重影响。易感动物包括犊牛、绵羊、山羊、猪和鹿等其他野生动物,患病动物常表现为精神不振、食欲不佳、腹泻、黏膜糜烂、体质量下降、繁殖性能降低等特征,同时造成动物免疫力低下,容易引发其他病原体的继发感染,加大养殖场疾病防控难度,带来巨大经济损失。目前在养牛业中,采取的防控方法是筛查并淘汰持续感染牛、群体进行疫苗免疫和持续进行疾病监测,达到降低牛群牛病毒性腹泻-黏膜病的发病率,并逐步做到疾病净化,促进养牛业乃至养殖业的安全和健康发展。

牛病毒性腹泻性黏膜病防控措施

近年来,由于中国畜牧业的快速发展,许多饲养者都开始饲养牲畜。然而,牲畜疾病却日益频繁,特别是腹泻。这种疾病具有很高的传播能力,而且致死率很高。初期,受影响的牛只症状往往比较轻微,但是随着疾病发展,会出现发烧、咳嗽等症状,而腹泻也是其常见的诊断方式。此外,若母牛也受到了疾病侵袭,会导致胎儿异常。疾病起源非常复杂,若没有及时有效治疗和预防,其蔓延会对畜牧业造成严峻的挑战。由此可见,牛病毒性腹泻病严重损害了畜牧生产,阻碍了畜牧业健康发展。

牛病毒性腹泻性黏膜病防控措施

牛病毒性腹泻黏膜病是一种急性且具有热性的传染病,由病毒感染引发,临床上主要表现为发热、腹泻和黏膜病变。该病对妊娠期和幼龄牛的危害尤为严重,主要表现为腹泻,严重影响牛只的存活率,并对养殖业造成了显著的经济损失。通过对牛病毒性腹泻黏膜病的流行病学特征、临床表现及防治措施的研究,提出了相应的防治策略,旨在减少牛疫病的发生,为牛养殖业的科学发展提供理论支持。

肉牛病毒性腹泻-黏膜病的发生与综合防控

病毒性腹泻-黏膜病是肉牛较为高发的一种疾病,该病主要以免疫抑制、免疫耐受、母牛繁殖障碍、黏膜溃疡、腹泻、发热为临床表现,不仅具有较高的致死率,且会对肉牛吸收利用饲料以及机体产肉增重产生直接影响。基于此,本文首先分析了肉牛病毒性腹泻-黏膜病的流行病学、临床症状、剖检变化、诊断方法,然后着重探讨了肉牛病毒性腹泻-黏膜病的治疗方法及防控策略,以期为广大肉牛养殖人员提供参考。

河北省廊坊市牛主要病毒性腹泻病原感染状况检测及牛冠状病毒演化分析

牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还会导致母牛生殖功能异常,这些疾病对畜牧业造成巨大的经济损失。为了解牛主要病毒性腹泻病原流行情况,本次试验通过PCR检测方法对我国河北地区323份腹泻牛粪样品进行常见9种病毒性牛腹泻病原进行检测。结果显示,BVDV阳性检出率1.85%(6/323)、BCoV阳性检出率14.24%(46/323)、BRV阳性检出率57.89%(187/323)、BoAstV阳性检出率0.31%(1/323)、BoNeV阳性检出率10.84%(35/323)、BNoV阳性检出率4.33%(14/323)、MRV阳性检出率2.48%(8/323)、BToV阳性检出率4.64%(15/323)、BKoV阳性检出率11.76%(38/323)。混合感染共有76份,占比23.53%(76/323)。HBLF2302株的全基因序列、S、HE、N、M和E基因进行同源性和遗传进化分析发现,HBLF2302与BCoV/NMG1/2022基因同源性最高,为GIIb亚型。基于氨基酸序列比对和HBLF2302的S蛋白三级结构预测发现,在S蛋白中157号位突变为157T,854号位点突变为854I。318V为独特突变,改变了与侧链残基的作用力,与631C形成氢键连接。并发现中国株区别于其它地区的GⅡb亚型,位于ORF1a区域有三个独特位点。本研究丰富了牛腹泻病原的流行病学数据,为牛腹泻病的防控奠定基础。

牛病毒性腹泻诊断与防治研究进展

近年来,牛病毒性腹泻在世界范围内广泛流行,给养牛业造成了严重的经济损失。该病严重损害牛群的免疫机能和繁殖机能,传播速度快,死亡率高。本文主要从诊断方法、防治措施等方面对该病进行综述,以期为牛病毒性腹泻的防治提供参考。

新疆某规模化肉牛场牛病毒性腹泻病毒分离与基因型鉴定

新疆许多规模化牛场存在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染,且因病毒基因型具有多样性,给该病的防控、疫苗选择、净化带来了一定的困难,开展新疆地区规模化牛场BVDV基因分型鉴定,对BVDV防控具有重要的指导作用。采集BVDV胶体金抗原检测卡确定为阳性的犊牛抗凝血样品并分离淋巴细胞,在MDBK单层细胞上进行病毒分离,盲传5代,提取培养物RNA,以BVDV5′-UTR、N^_(pro)特异性引物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测分析。结果显示,获得BL分离株1株,属于BVDV-1m亚型,研究结果丰富了新疆南疆地区规模牛场BVDV分子流行病学数据库。

山东地区1株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况,为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液,利用RT-PCR方法进行病原鉴定,接种MDBK细胞进行病毒分离培养,采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定,对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序,并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、N^(pro)和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带,与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光;电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子,表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株,命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12232 nt,与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%~93.8%,其中,与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高,为93.8%;N^(pro)和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异;SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支,而与BVDV 1型毒株处于同一分支,属于BVDV 1c基因型。【结论】本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株,并进行基因组和遗传演化分析,与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近,为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

不同基因型牛病毒性腹泻病毒对BALB/c小鼠致病性研究

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是危害养牛业的重要病原。2021年本实验室从患有肺炎的牛肺中分离出1株BVDV(毒株编号为JS2201),经鉴定为1b亚型。为了评价该分离株的毒力与致病性,分别建立了分离株与参考株BVDV-1型Oregon C24V株、BVDV-2型C1602株BVDV感染BALB/c小鼠模型,通过检测攻毒后小鼠临床症状、体重变化、病毒血症情况、血液中白细胞与淋巴细胞的变化、组织器官的病理组织学变化及病毒载量,比较了分离株JS2201与1型和2型参考株的致病性差异。结果显示:BVDV分离株JS2201与参考株均能够成功感染BALB/c小鼠,攻毒BALB/c小鼠均形成病毒血症,导致血液中白细胞数量、淋巴细胞数量以及淋巴细胞百分比短暂下降;BVDV分离株JS2201株攻毒组小鼠肝脏、肾脏、肺脏、脾脏中BVDV载量要高于C24V、C1602株攻毒组;攻毒组小鼠均表现为间质性肺炎病变,JS2201株攻毒组与1型参考株C24V株攻毒组小鼠肺脏病理组织学变化相似,BVDV-2型参考株C1602株攻毒组小鼠肺脏病变更为严重。综上,本研究成功建立了不同亚型BVDV急性感染BALB/c小鼠的模型,且比较分析了分离株与参考株之间的致病性差异,为BVDV疫苗的研制以及致病机制的研究奠定了基础。