牛病毒性黏膜/腹泻病毒与牛传染性鼻气管炎病毒双重PCR检测方法的建立

为了建立同时检测牛病毒性黏膜/腹泻病毒(BVDV)与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重PCR方法,试验采用文献记载的检测BVDV和IBRV的单项PCR方法,设计并合成引物,通过优化反应条件和反应体系,以及特异性和灵敏度试验,建立同时检测BVDV和IBRV的双重PCR方法。结果表明:建立的方法具有高度特异性,可同时扩增出BVDV的244 bp和IBRV的362 bp片段,而对猪瘟病毒(CSFV)与牛轮状病毒(BRV)均无扩增;并且该双重PCR方法对BVDV和IBRV的检测下限均为10 pg;用25份临床样本对双重PCR方法与单项PCR方法进行对比验证,二者的符合率为100%。说明建立的双重PCR检测方法具有特异、灵敏、快速的特点,可用于BVDV和IBRV的同时检测。

牛病毒性黏膜病的病因与治疗策略

牛病毒性黏膜病又称牛病毒性腹泻,是由牛病毒性腹泻病毒引起,幼龄牛感染率最高,全年均可发病。本文简要介绍了牛病毒性黏膜病的流行特点、临床症状和诊断方法,提出了针对性的防治建议。1流行特点牛病毒性黏膜病是牛感染病毒性腹泻病毒引起的,该病毒各年龄的牛都易感染,而且感染率还很高,以幼龄牛最为高发。这是因为新生牛犊在吸吮母乳时,可以获取一定的母源抗体,抵抗力较强,可以安全度过犊牛时期。但母源抗体在半年后会逐渐下降直至消失。此时犊牛抵抗力下降而变得不易感,同时该病毒可通过胎盘传播。

牛病毒性腹泻黏膜病诊断与防治

牛病毒性腹泻黏膜病是由病毒性腹泻病毒引发的一种急性热性传染性疾病,临床上患病牛主要表现为发热腹泻、黏膜出现病变。该类疾病对妊娠阶段和犊牛阶段的牛造成的危害较为严重,母牛妊娠阶段受到病毒感染之后,会不明原因的出现流产或产下的胎儿畸形,犊牛表现出严重的腹泻,导致成活率显著下降,给养殖场造成较为严重的经济损失。再加上该类疾病属于免疫抑制性疾病,并且存在隐性感染的现象,一旦发生很难净化处理,会导致该类疾病在养殖场中周期性的传播蔓延,所以就需要掌握牛病毒性腹泻黏膜病的发生流行特点和诊断方法,并构建综合性的防治方案,确保早发现早处理。本文探讨了牛病毒性腹泻黏膜病的诊断与防治,希望对广大同行有所帮助。

牛病毒性腹泻-黏膜病的诊断防治

牛病毒性腹泻-黏膜病是一种常见的传染病,对畜禽经济和养殖业产生了不小的影响。随着畜牧业现代化的进展,随之而来的是对牛病毒性腹泻等疾病的更高关注和防治要求。本文将介绍牛病毒性腹泻-粘膜病的诊断、防治措施,以期能够为广大畜牧业生产者提供参考和帮助。

牛病毒性腹泻黏膜病诊断与防治

牛病毒性腹泻黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea-mucosal disease virus,BVDV)引起的一种急性或慢性的牛类病毒性传染病。该病毒主要通过呼吸道和消化道传播,感染后可引起发热、腹泻、脱水、口腔黏膜糜烂、体质量下降等症状,对养牛业造成严重威胁。通过现场调查和文献综述总结了该病的流行病学特征、诊断方法和防治措施。结果表明:通过实施疫苗接种、生物安全管理、病情监控与及时治疗等防控措施,能有效控制BVD-MD的疫情传播和发生。因此,在养牛业中应重视这些防控措施的应用,以减少疾病对牛健康和生产性能的影响。

牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状与防控策略

牛病毒性腹泻-黏膜病是生产养殖中比较常见的一种传染病,该病对养牛业、养羊业、养猪业等均可造成严重影响。易感动物包括犊牛、绵羊、山羊、猪和鹿等其他野生动物,患病动物常表现为精神不振、食欲不佳、腹泻、黏膜糜烂、体质量下降、繁殖性能降低等特征,同时造成动物免疫力低下,容易引发其他病原体的继发感染,加大养殖场疾病防控难度,带来巨大经济损失。目前在养牛业中,采取的防控方法是筛查并淘汰持续感染牛、群体进行疫苗免疫和持续进行疾病监测,达到降低牛群牛病毒性腹泻-黏膜病的发病率,并逐步做到疾病净化,促进养牛业乃至养殖业的安全和健康发展。

基于重组牛病毒性腹泻病毒囊膜糖蛋白E2的间接ELISA检测方法建立

为建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法,本试验将纯化后的重组BVDVE2蛋白作为抗原包被96孔酶标板,采用方阵滴定法优化间接ELISA的各项反应参数初步建立检测方法,并进一步分析了该方法的特异性、敏感性和重复性。确定的最佳ELISA反应条件如下:抗原包被浓度为1.5μg/mL,1:100稀释待检血清于37℃孵育1 h,1:6 000稀释辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG于37℃作用1 h,确定阴、阳性血清临界OD450 nm值分别为0.203和0.226。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,与商品化试剂盒的检测符合率达96%,该方法可以用于BVDV抗体的检测和试剂盒的进一步研制。

新疆部分地区牛病毒性腹泻-黏膜病病毒的分离鉴定

【目的】了解新疆地区BVDV毒株的生物型和基因型。【方法】采集新疆石河子和伊犁地区疑似感染病毒性腹泻-黏膜病病毒牛的新鲜粪便174份,应用RT-PCR方法对其进行检测,将检测结果为阳性的样品接种于MDBK细胞上培养,电镜观察,测定毒价,使用RT-PCR方法对细胞培养物进行鉴定,并提取质粒进行测序,对结果分析。【结果】该毒株可使MDBK细胞发生病变,扩增出一条286 bp目的片段,经同源性和遗传进化分析,确定为BVDV-1型毒株。【结论】分离到一株BVDV-1型新疆毒株,可使MDBK细胞发生病变,病毒粒子直径约为20~40 nm,毒株TCID5010-4.5/0.1 m L。

河南牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查

为探讨河南省牛病毒性腹泻病毒的流行情况,用牛病毒性腹泻病毒抗体检测试剂盒(IDEXX)对本省部分地区6个奶牛场、5个肉牛养殖场的181份牛奶样品和395份血清样品进行BVD抗体的检测。结果检出阳性牛奶106份,阳性率最高为93.3%,最低的为5.0%,平均阳性率为58.6%。其中有5个规模化奶牛场牛奶样品阳性率均在75%以上。肉牛血清样品共检出阳性124份,最高阳性率为74.12%,最低5.80%,平均阳性率31.39%。结果表明,该病在所调查地区中奶牛和肉牛均有感染,不同牛场间感染率差异较大,其中规模化奶牛的感染率较高。表明应采取相应的净化措施对该病进行控制。

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E_2基因在卡介苗中的表达

在成功克隆牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因的基础上,将E2基因与表达载体pMV261连接,构建了重组穿梭质粒pMV261-E2,后电转化到卡介苗中,获得了具有卡那霉素抗性的重组卡介苗,并对重组卡介苗进行菌落PCR鉴定。在45℃下热诱导E2基因在重组卡介苗中的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Wesern blotting分析。结果证明,牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因在卡介苗中成功的表达。

牛病毒性腹泻/黏膜病RT-PCR 3种体系的试验研究

根据牛病毒性腹泻/黏膜病病毒5′端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/黏膜病病毒244 bp片段的RT-PCR 3种体系。该3种体系对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒NADL、Oregon C24V和长春184毒株各标准毒株的检测结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。证明3种体系方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的RT-PCR技术3种体系可用于牛病毒性腹泻/黏膜病的检测及流行病学调查。

河北省奶牛牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查

从河北省部分奶牛场采集直肠粪便样品1030份,用改进的双抗体夹心ELISA试验法检测牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(Bovine viral diarrhea-Mucosald isease virus,BVD-MDV)抗原。结果:不同年龄的奶牛均可感染BVD-MDV,抗原最低阳性检出率为10.0%,最高阳性检出率为81.4%,平均检出率为40.9%。证实本省奶牛群中存在有BVD-MDV感染。

贵州省某牛场牛病毒性腹泻-黏膜病的诊治

2017年1月上旬,贵州省某牛场发现6~7月龄小牛口鼻有大量黏液流出,四肢无力,水样腹泻,呈酱油色,发病后曾用青霉素、安乃近、双黄连及磺胺类等药物进行治疗,但未见好转。于是送检小牛（200 kg左右）1头到贵州大学生物技术中心实验室进行确诊。根据发病牛的临床症状、病理剖检和实验室诊断结果,确诊发病小牛为牛病毒性腹泻-黏膜病病毒感染。现将诊治情况报道如下。

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达

为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)基因工程活载体疫苗,根据已知的BVDV Changehun184毒株E2基因序列,利用DN.AStar生物学软件对其进行分析,预测了可能存在的抗原表位,设计6对引物,分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段,1—297 aa、1—345 aa、1—374 aa、45—297 aa、45—345 aa和45—374 aa,克隆至穿梭表达载体pMV361中,经酶切、PCR扩增和测序证实已正确插入到表达载体中,构建了6个原核表达质粒。阳性重组质粒通过电转化到卡介苗(BCG)感受态中,热诱导后,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹检测。结果表明6个重组质粒在卡介苗中均有不同程度的表达,表达产物与理论推测的相对分子质量一致。Western blot结果显示其融合蛋白能被牛抗BVDV的阳性血清识别,具有相应的反应原性。本研究为进一步研究BVDV基因工程活载体疫苗奠定了基础。

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究

为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。

牛病毒性腹泻-黏膜病的持续性感染

牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD/MD)是一种较为特殊的病毒性传染病,除具有传染病的一般特征外,与其他绝大多数传染病的重要区别之一是产生持续性感染(PI).PI由非致细胞病变型(NCP)毒株所引起的,PI动物往往血清阴性,机体呈带毒状态并不断向外排毒,从而促进了本病的流行和蔓延,给养牛业造成了极大的危害.笔者对持续性感染原因、机理、危害、检测和防制等作简要综述.

牛病毒性腹泻黏膜病毒E2基因的原核表达与免疫原性分析

[目的]原核表达牛病毒性腹泻黏膜病毒(BVDV)E2基因编码蛋白。[方法]采用PCR方法从BVDV中扩增E2基因片段,与原核表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-E2,转化E.coli(Rosetta)感受态细胞,重组菌用1 mmol/L IPTG诱导表达E2蛋白,进行SDS-PAGE电泳,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,经Western blot分析鉴定免疫原性。[结果]重组质粒pET-32aE2经PCR及酶切鉴定证明构建正确,重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为58 kDa,纯化后E2重组蛋白浓度0.521 mg/mL,Western blot分析表明,其能被BVDV阳性血清识别,具有很好的免疫原性。[结论]E2蛋白成功表达,为后续建立BVDV检测方法奠定了基础。

鹿源牛病毒性腹泻—黏膜病病毒E_2基因的克隆与序列分析

对已发表的牛病毒性腹泻—黏膜病毒E2基因的核苷酸序列进行比较分析并设计引物,应用套式RT-PCR获得鹿源BVDV E2基因。测序分析结果表明:鹿源BVDV E2基因由1 122个核苷酸组成,编码374个氨基酸。与Oregon CV24、NADL、ZM-95、SD1、Osloss、S10、SH9、Changchun184、Shitara、Deer-GB1核苷酸和推导氨基酸同源性分析表明:鹿源DVBV分离株与Changchun 184株及Osloss株的同源性较高,分别为99.2%和92.8%;与日本Shitara株的同源性为71.2%;与国际标准毒株CV24的同源性为74.6%。

甘肃省部分地区牛病毒性腹泻/黏膜病流行病学调查与分析

[目的]为了解甘肃省牛病毒性腹泻/黏膜病的流行情况。[方法]随机在3个市8个养殖场1个屠宰场及部分散养户采集牛血清220份,采用ELISA(酶联免疫吸附试验)检测牛病毒性腹泻/黏膜病的抗体。[结果]检出阳性血清124份,阳性率为56.36%。[结论]说明我省养牛场普遍存在该病,且污染面大,损失严重,必须引起高度重视。

牛病毒性腹泻-黏膜病的血清学调查

采用竞争ELISA法,对188头牛血清进行了病毒性腹泻-黏膜病抗体检测。结果显示,170头牛抗体呈阳性,阳性率为90.4%,牛病毒性腹泻-黏膜病在调查该县不仅存在且感染率较高,对该病应引起高度重视并应积极采取预防控制措施。