牛痘相关激酶1在小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制

目的:探讨牛痘相关激酶1(vaccinia-related kinase 1, VRK1)在小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)增殖及迁移中的作用及机制。方法:培养小鼠肺动脉平滑肌细胞系,细胞传至第3代至第5代细胞进行后续实验。在低氧条件下检测不同低氧时间干预后PASMC中VRK1蛋白水平的变化。为探究VRK1在低氧所致PASMCs增殖和迁移中的作用,通过携带Vrk1特异短发夹RNA(Vrk1 short hairpin RNA,sh Vrk1)或相关阴性对照RNA(shCon)的慢病毒转染PASMCs,将转染后的PASMCs分别进行常氧、低氧处理,Western blot检测VRK1和β-catenin蛋白水平变化,采用Ki-67细胞免疫荧光染色法检测PASMCs的增殖活性,划痕实验检测PASMCs的迁移能力。加入40μmol/L SKL2001恢复β-catenin活性后再次检测上述指标。结果:与常氧组相比,低氧处理24 h和36 h后PASMCs中VRK1蛋白表达水平升高(P<0.01)。常氧培养条件下,sh Vrk1转染细胞中VRK1及β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.01)。相较于常氧培养的shCon转染细胞,低氧条件下shCon转染细胞中Ki-67阳性细胞率升高,划痕愈合速度提高(P<0.01)。低氧培养条件下,sh Vrk1转染后细胞的Ki-67阳性细胞率降低,划痕愈合速度降低(P<0.01)。低氧培养条件下,sh Vrk1+SKL2001组β-catenin蛋白表达水平升高,Ki-67阳性细胞率及划痕愈合速度较sh Vrk1+DMSO组均升高(P<0.01)。结论:沉默Vrk1通过降低β-catenin的表达抑制低氧所致小鼠PASMCs体外的增殖和迁移。

牛痘相关激酶2在神经发育过程中小胶质细胞介导的突触消除中起重要作用

在出生后的神经发育过程中,大脑神经回路的建立需要小胶质细胞消除过度的突触连接。小胶质细胞突触调节缺失已被证实与自闭症、精神分裂症和智力残疾等神经发育障碍有关。小胶质细胞中表达的牛痘相关激酶2(VRK2)可能可以激活突触消除的过程。在VRK2缺陷小鼠(VRK2KO)中,可以观察到小胶质细胞内突触前位点的减少。而且,在出生后第2周,VRK2KO小鼠的突触前位点和突出的数量都出现了异常增加。这些差异并没有持续到成年期。尽管突触数量的增加最终结局与正常小鼠无异,但成年VRK2KO小鼠在社交行为、情境恐惧记忆和空间记忆中表现出行为缺陷。

VRK1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨牛痘相关激酶1(VRK1)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中表达及其与临床病理、预后关系,对DLBCL细胞凋亡的影响。方法RT PCR法检测98例DLBCL组织和62例淋巴结反应性增生组织(RHL)淋巴结组织中VRK1 mRNA表达,Western blot法在正常B细胞永生化细胞系HMy2.CIR和DLBCL细胞系SU-DHL-4、OCI-Lyl9、OCI-Ly3、VAL、SU-DHL-2、SU-DHL-6中检测VRK1蛋白表达,同时基于可视化软件GEPIA和TCGA(The cancer genome atlas)数据库中DLBCL基因芯片表达数据分析VRK1表达。统计分析VRK1表达与DLBCL患者临床病理特征关系。随访比较VRK1高表达组与VRK1低表达组患者预后情况。Real-time PCR法检测DLBCL组织中DNA修复通路相关蛋白XRCC3、CDC20 mRNA表达,并比较VRK1和XRCC3、CDC20之间共表达关系。构建沉默表达VRK1稳定DLBCL细胞株,通过软琼脂克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞增殖和凋亡能力。结果VRK1在DLBCL组织和细胞中均高表达。VRK1表达与DLBCL患者Ann Arbor分期、免疫分型差异相关。VRK1高表达组患者5年总生存率低于VRK1低表达组。VRK1和XRCC3、CDC20之间均正向共表达。沉默表达VRK1可抑制OCI-Ly3细胞的增殖活性,促进OCI-Ly3细胞的凋亡能力。结论沉默VRK1表现出了较强的抗肿瘤潜能,具有一定的临床意义,为将来基于VRK1进行DLBCL临床诊断、预后判断及分子靶向治疗提供新的思路和理论依据。

Calreticulin、VRK1、Fbxw7在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及诊断价值研究

目的探究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中钙网蛋白(Calreticulin)、牛痘相关激酶1(VRK1)、F框/WD40域蛋白7(Fbxw7)的表达及诊断价值。方法选取2019年3月到2021年3月在秦皇岛第一医院病理科保存60例DLBCL组织以及瘤旁组织标本为DLBCL组,选取同期保存的正常的淋巴组织为正常组。采用荧光定量RT-PCR检测Calreticulin、Fbxw7,免疫组织化学法检测组织中VRK1表达。结果弥漫大B细胞淋巴瘤组织Calreticulin、VRK1表达高于瘤旁组织和正常组织,Fbxw7表达低于瘤旁组织和正常组织(P<0.05)。瘤旁组织Calreticulin、VRK1表达高于正常组织,Fbxw7表达低于正常组织(P<0.05)。随着临床分期程度加重、分化程度越低,Calreticulin、VRK1在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达不断升高,Fbxw7不断降低(P<0.05);结外病灶个数>2、LDH升高、有淋巴结转移者Calreticulin、VRK1的表达量高于无淋巴结转移、结外病灶个数≤2、LDH正常者;而Fbxw7则相反(P<0.05)。ROC分析Calreticulin、VRK1、Fbxw7预测弥漫大B细胞淋巴瘤的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.650、0.659、0.711、0.731。结论Calreticulin、VRK1在弥漫大B细胞淋巴瘤组织高表达,Fbxw7在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中低表达,三者联合对弥漫大B细胞淋巴瘤患者的诊断价值显著。

食管鳞状细胞癌组织中VRK1及BANF1的表达及其意义

目的探讨牛痘病毒相关性激酶1(VRK1)及屏障自整合因子1(BANF1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其意义。方法免疫组化染色法检测120例ESCC患者癌组织及配对的癌旁组织中VRK1和BANF1蛋白的表达水平;RT-q PCR法检测VRK1和BANF1 mRNA在ESCC癌组织和配对的癌旁组织中的表达水平;并分析其与ESCC患者临床病理参数间的关系。结果免疫组化染色结果表明,VRK1和BANF1蛋白在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ2分别为70.815,60.286,P均<0.05),且两者的表达水平与TNM分期和分化程度差异均有统计学意义(P均<0.05),而与不同性别、年龄和有无淋巴结转移的差异无统计学意义(P均>0.05)。RT-q PCR结果显示,VRK1和BANF1 mRNA在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(0.88±0.09 vs 0.59±0.08,0.78±0.08 vs 0.41±0.05),差异均有统计学意义(t分别为1.95,1.99,P均<0.05)。结论 VRK1和BANF1在ESCC患者组织中呈过表达,且与ESCC的发生、发展有关。

子痫前期孕妇血清circRNA VRK1表达水平与临床指标的相关性及对妊娠结局的预测价值

目的探讨子痫前期(preeclampsia,PE)孕妇血清环状RNA(circRNA)牛痘相关激酶1(VRK1)表达水平与临床指标的相关性及其对妊娠结局的预测价值。方法选取2019年1月至2021年12月邯郸市妇幼保健院就诊的95例PE孕妇为PE组,纳入同期来院检查的100例健康孕妇为对照组。记录两组孕妇临床指标及妊娠结局,并检测血清circRNA VRK1表达水平。采用Pearson相关性分析探讨circRNA VRK1与舒张压(DBP)、尿酸(UA)等临床指标的相关性。ROC曲线分析血清circRNA VRK1表达水平对PE孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果对照组血清circRNA VRK1表达水平(0.97±0.18)低于PE组(1.83±0.50)(P<0.05)。PE组收缩压(SBP)、DBP、24 h尿蛋白、尿酸氮(BUN)、肌酐(Scr)、超敏-C反应蛋白(Hs-CRP)、UA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)显著高于对照组(P<0.05)。circRNA VRK1与SBP、DBP、24 h尿蛋白、BUN、Hs-CRP、ALT、AST存在正相关(r=0.591、0.546、0.617、0.482、0.450、0.594、0.536,P<0.05)。总不良妊娠结局发生率PE组(50.53%)高于对照组(13.00%)(P<0.05)。PE组不良妊娠结局孕妇血清circRNA VRK1表达水平(2.15±0.52)显著高于正常妊娠结局者(1.50±0.48)(P<0.05)。circRNA VRK1预测不良妊娠结局的曲线下面积为0.857(95%CI:0.779-0.934)。结论PE孕妇血清circRNA VRK1呈上调表达,且与临床特征变化相关,对不良妊娠结局有较高预测效能。

siRNA干扰VRK1表达对食管癌细胞BANF1蛋白表达及增殖迁移能力的抑制作用

目的探讨小干扰RNA干扰VRK1表达对食管癌细胞株BANF1蛋白的表达及其增殖迁移能力的影响。方法将VRK1 siRNA转染EC109和EC1细胞系干扰VRK1的表达, Western blot法检测VRK1siRNA干扰效率及siRNA干扰后食管癌细胞BANF1的表达。CCK-8实验和流式细胞术检测干扰VRK1表达后对细胞增殖能力的影响,Transwell细胞体外侵袭实验观察干扰前后细胞迁移能力的改变。结果两株食管癌细胞VRK1 siRNA转染后,转染实验组VRK1蛋白表达分别下调62.40%和52.14%,同时BANF1蛋白表达分别下调24.51%和52.87%。转染12 h后,细胞增殖开始受到抑制,36 h抑制率最高,分别达19.41%、20.10%。VRK1和BANF1表达下调后,G_1、G_2期细胞比例下降,S期细胞比例上升。实验组细胞迁移个数下降,细胞迁移数和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA干扰VRK1表达后可降低食管鳞癌细胞BANF1蛋白的表达,使食管鳞癌细胞增殖周期阻滞在DNA合成期,分裂期细胞比例下降,抑制其增殖及迁移能力。

染色质蛋白激酶VRK1的生物学功能及其在癌症靶向治疗中的意义

牛痘相关激酶1(vaccinia-related kinase 1,VRK1)是一种核染色质丝苏氨酸蛋白激酶,在癌症中不发生基因突变,但在很多类型的肿瘤中表达上调并与不良预后相关。在细胞核内,VRK1可以磷酸化几种转录因子、组蛋白和涉及DNA损伤反应途径的蛋白质,还可以参与转录过程中组蛋白的乙酰化修饰,调节细胞周期、有丝分裂等过程促进细胞增殖,并且在DNA损伤修复中发挥至关重要的作用。在DNA损伤修复反应中,VRK1调控组蛋白乙酰化,介导DNA损伤反应的触发,进一步参与非同源末端连接DNA修复途径,还可以调控p53相关的DNA损伤修复过程。基于VRK1的以上生物学功能,癌组织中VRK1的高表达可以促进肿瘤细胞增殖、转移以及参与肿瘤细胞DNA修复过程。在癌症靶向治疗研究中,VRK1可以作为癌症合成致死性策略的选择靶点用于多种癌症的防治。

中国人群中单核苷酸多态性位点rs2312147与脑区体积的相关性

目的探讨健康中国汉族人群精神分裂症易感基因牛痘病毒相关激酶2(vaccinia virus kinase related kinase 2,VRK2)单核苷酸多态性(SNP)位点rs2312147与部分脑区体积的相关性。方法搜集299名健康中国汉族志愿者,对所有志愿者行MRI,采用VBM8软件测量19个脑区体积,以SNaPshot法对rs2312147位点进行基因分型,采用线性回归模型分析rs2312147位点与所选19个脑区体积的相关性。结果在健康中国人群中rs2312147与多个脑区的体积显著相关,易感等位基因的携带者相关脑区有相对小的体积,其中以尾状核及枕中叶的相关性最为显著,结果可以经受多重校正的检验。结论VRK2可能潜在地影响脑的结构和功能,或许是精神分裂症易感性的一个病理生理机制。

VRK 1基因c.1124G>A纯合突变导致远端型遗传性运动神经病一家系遗传学分析

目的分析一家系2例远端型遗传性运动神经病(distal hereditary motor neuropathy,dHMN)患者临床特征,探讨牛痘相关激酶1(vaccinia-related kinase 1,VRK1)基因突变情况。方法收集一家系2例dHMN患者临床资料。采集先证者及其父母、女儿外周血,提取基因组DNA,进行全外显子组测序及生物信息学分析,采用Sanger测序进行验证。结果先证者双下肢肌萎缩并逐渐加重,感觉无异常。先证者弟弟有类似症状及体征,父母及女儿无相关症状及体征。先证者存在VRK1基因c.1124G>A位点纯合突变;先证者父母及其女儿均存在VRK1基因c.1124G>A位点杂合突变;先证者弟弟未行全外显子组测序及Sanger测序。该突变为已报道致病性突变;该突变使VRK1蛋白C端第375位色氨酸变为终止密码子(p.W375X),导致VRK1蛋白部分功能缺失,为无义突变。结论VRK1基因c.1124G>A(p.W375X)位点纯合突变可能是该家系2例dHMN患者的致病原因;VRK1基因突变导致dHMN患者的临床表型存在异质性。