脲和盐酸胍诱导的牛碳酸酐酶B的去折叠

采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效凝胶排阻色谱和激光光散射光谱研究了脲和盐酸胍诱导的牛碳酸酐酶B的去折叠。实验结果表明,在脲和盐酸胍诱导的牛碳酸酐酶B的去折叠过程中,溶液中只含有单分子牛碳酸酐酶B和二分子牛碳酸酐酶B集聚体;二分子牛碳酸酐酶B集聚体是通过单分子牛碳酸酐酶B之间的疏水和静电相互作用力而形成的。

脲变性牛碳酸酐酶B的稀释复性过程及其集聚作用研究

采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效凝胶排阻色谱以及激光光散射光谱研究了脲变性牛碳酸酐酶B的稀释复性过程及其集聚作用。在脲变性牛碳酸酐酶B的稀释复性过程中,当最终复性液中脲浓度大于2.0mol/L时,牛碳酸酐酶B在复性液中以单分子和二分子集聚体形式存在;当最终复性液中脲浓度小于2.0mol/L大于1.0mol/L时,牛碳酸酐酶B在复性液中以单分子、二分子集聚体和少量多分子集聚体形式存在;而当最终复性液中脲浓度小于等于1.0mol/L时,脲变性牛碳酸酐酶B复性时会形成均匀透明的上清和不透明的沉淀,牛碳酸酐酶B在上清和沉淀中达到动态解离平衡,且在两相中都以单分子、二分子集聚体和少量多分子集聚体形式存在。溶液中二分子和多分子牛碳酸酐酶B集聚体是通过牛碳酸酐酶B分子之间的疏水和静电相互作用力而形成的,当溶液中这些成分达到一定浓度并且溶液中脲的浓度小于某一个值时,它们之间会通过非共价形式形成沉淀。

碳酸酐酶在多孔玻璃上的固定化及性质研究

将牛碳酸酐酶共价固定到多孔玻璃CPG上,拟应用于烟道气中CO2的强化吸收。多孔玻璃经过烷基化和戊二醛活化后,与酶共价结合。以p-硝基苯乙酸酯水解活力来表示碳酸酐酶的活性,在最优固定化pH=8.0下,固定化酶的活力为1.32U/g CPG,固定化酶载量为14.7mg/g CPG,固定化效率因子为0.334。测得固定化酶的米氏动力学参数k2和Km的值分别是258min-1和259×10-4 mol/L,分别是游离酶的61.7%和2.23倍。以pH=7.85和40℃时的酶活作为比较标准,当pH>7.85和T>40℃时,固定化酶的性质优于游离酶。在pH=10和40℃下,固定化酶的活性似乎不稳定,在7天内下降为原来的37%。然而,以压力法测得的CO2水合活力表示酶的活性,在上述条件下,固定化酶却很稳定,活性在21天内几乎没有变化,表明酯酶活力法测定酶活不能用来评估CPG-固定化碳酸酐酶的稳定性。