牛磺熊去氧胆酸钠抑制小鼠间歇性低氧模型肺组织中内质网应激的激活

目的:探究牛磺熊去氧胆酸钠(tauroursodeoxycholic acid sodium,TUDCA)在间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)模型小鼠肺组织中抑制细胞凋亡的机制。方法:32只C57小鼠随机分为对照组、TUDCA组、IH组和IH+TUDCA组,每组8只。将C57小鼠放入低氧舱中进行IH处理4周(氧气浓度从21%下降到10%,再从10%恢复到21%为一个循环,每个循环的时间为90 s),每天持续8 h。4周IH处理后,Western印迹检测caspase-12和cleaved caspase-3在肺组织中的表达。同时,Western印迹、免疫组织化学和实时定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)和CCAAT/增强结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)的表达。结果:与对照组和TUDCA组相比,IH组小鼠肺组织中caspase-12,cleaved caspase-3,GRP78和CHOP表达明显升高(均P<0.01);而在IH+TUDCA组中,TUDCA能够显著地减少上述蛋白的表达(均P<0.05)。结论:慢性的IH能够导致肺组织中内质网应激介导的细胞凋亡,而TUDCA可以通过抑制内质网应激的激活来降低细胞的凋亡水平。

HPLC法测定参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量

目的：探讨参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量测定方法，方法：ＨＰＬＣ法，选用ＣＬＣ－ＯＤＳ柱，以甲醇－磷酸二氢钠（０．０３ｍｏｌ／Ｌ）为流动相，用磷酸将流动相ｐＨ值调至４．４０，检测波长２１０ｎｍ。结果：回归方程为ｙ＝－９９６．９０＋３ ８３９．３３ Ｘ，ｒ＝０．９９９ ６（ｎ＝５），线性范围为 ３．１４－１５．７０μｇ，平均回收率为９９． ８７％，ＲＳＤ为１．５０％。结论：ＨＰＬＣ法可以用来测定参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量。

高效液相色谱法测定熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸钠的含量

目的:建立高效液相色谱法测定熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸的含量。方法:Hypersil ODS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.02 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液(65:35,用磷酸调节pH至4.5),检测波长210 nm,柱温为室温,流速:1.0 ml·min^(-1)。结果:牛磺熊去氧胆酸钠浓度在25.2～252μg·ml^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9993),平均回收率为98.8%,RSD为0.8%(n=6)。结论:方法简便、灵敏、准确,可作为熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸钠的质量控制。

HPLC法测定熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸钠的含量

目的:建立高效液相色谱法测定熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸的含量。方法:选用迪马(钻石)C(18)色谱柱(200mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.03 mol/L磷酸二氢钠溶液(65:30,用磷酸调节pH至4.4),检测波长210 nm,柱温为室温,流速:1.0ml/min。结果:牛磺熊去氧胆酸钠浓度在1.92-24.0μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991)(n=6),平均回收率为98.2%,RSD为0.9%(n=6)。结论:此HPLC法可以用来测定熊胆痔疮膏中牛磺熊去氧胆酸钠的含量。

HPLC法测定鼻渊喷雾剂中牛磺熊去氧胆酸的含量

目的：建立鼻渊喷雾剂中牛磺熊去氧胆酸的含量测定方法。方法：采用HPLC法，Diamonsil^TM C18柱（250mm×4.6mm,5μm），以甲醇－0.03mol.L^-1磷酸二氢钠溶液（75：25）为流动相，流速为1.0mL.min^-1，牛磺熊去氧胆酸钠为外标物，检测波长为210nm，结果：牛磺熊去氧胆酸钠的线性范围为150－750μg.mL^-1，平均回收率（n=6)为98．7％，RSD＝0．58％，结论：本方法快速，简便，准确。

内质网功能状态对卵巢癌细胞顺铂敏感度的影响

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)功能状态对卵巢癌细胞顺铂(DDP)敏感度的影响。方法卵巢癌细胞系SKOV3接受40μmol/L DDP处理24 h后,q RT-PCR检测ERS相关基因改变;同时内质网示踪染料(ER-tracker)观察内质网形态变化;分别用ERS稳定剂牛磺熊去氧胆酸钠(tauroursodeoxycholate,TUDCA)或ERS诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)预处理SKOV3,再接受DDP处理,应用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP是否表达;从临床卵巢癌患者腹水中分离与培养原代卵巢癌细胞后,采用流式细胞术比较TUDCA及TG预处理对原代卵巢癌细胞DDP敏感度影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白PARP和Caspase-3的变化。结果顺铂处理卵巢癌细胞系SKOV3后能够引起明显的ERS,ERS相关蛋白明显上调,内质网形态呈现颗粒化;TUDCA可以显著下调DDP引起的杀伤作用(P<0.05),显著降低GRP78和CHOP蛋白水平;TG可以显著上调DDP引起的杀伤作用(P<0.05)、GRP78和CHOP蛋白水平;在卵巢癌腹水原代细胞中TUDCA亦可显著抑制DDP引起的杀伤作用(P<0.05),TG亦可显著上调DDP引起的杀伤作用(P<0.05)。结论改变ERS的功能状态能够影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。