牛磺酸对STZ诱导大鼠胰岛细胞凋亡及BCL-xL和BAX表达变化的影响

目的 观察牛磺酸（taurine）对链脲菌素（STZ）引起胰岛细胞凋亡及胰岛素分泌与BCL-xL和BAX蛋白表达变化的影响。方法 用体外单层培养的方法，培养已存活3～5 d的Wistar乳鼠的胰岛细胞，在瑞氏染液染色后光镜下分别检测STZ使用前后胰岛凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中NO2^-/NO3^-含量、NOS活性、胰岛素分泌以及BCL-xL和BAX的变化，并进一步观察牛磺酸对上述指标的影响。结果 STZ可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加，从（4.0±0.7）%升至（40.5±5.7）%，使DNA明显片段化、胰岛素分泌明显降低、BCL-xL表达下降、BAX表达增强（P＜0.01）和NO2^-/NO3^-含量升高，但NOS活性变化不明显。牛磺酸能有效抑制STZ引起的上述指标（NO2^-/NO3^-含量除外）的变化，该效应具有一定的剂量依赖性。结论 牛磺酸能够改善STZ诱导的胰岛细胞凋亡，其机制可能与下调BAX/BCL-xL比例有关，而与NO2^-/NO3^-含量及NOS活性关系不大。

牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤时细胞凋亡的影响

目的:从细胞凋亡的角度探讨肢体缺血再灌注(LIR)后急性肺损伤(ALI)的发病机制及牛磺酸的影响。方法:复制大鼠肢体缺血再灌注(LIR)损伤动物模型,采用TUNEL法、电泳法、半定量逆转录聚合酶链反应(SqRT-PCR)及免疫组织化学等技术观察LIR后肺损伤发生过程中,肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡变化以及Fas/FasL系统蛋白质和mRNA表达的改变。结果:大鼠LIR后,肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡明显增加;肺组织Fas/FasL mRNA和蛋白质表达明显上调,DNA断链率、组织钙含量和活性氧(ROS)升高,且与肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡的增加相一致。结论:肺泡上皮及血管内皮细胞凋亡以及Fas/FasL系统表达明显上调可能参与LIR后ALI的发生;牛磺酸可减少肺组织细胞凋亡,但并非通过影响Fas/FasL基因表达而实现其保护效应。

牛磺酸对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及fas和caspase-3基因表达的影响

目的观察牛磺酸对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及fas和caspase-3基因表达的影响,探讨牛磺酸对运动心脏保护作用的可能机制。方法采用力竭性游泳训练建立大鼠过度训练模型,30只SD大鼠随机等分为正常对照组、过度训练组和过度训练+牛磺酸组。实验后采用流式细胞仪检测各组大鼠心肌细胞凋亡,半定量RT-PCR检测caspase-3和fas mRNA表达,二步法免疫组化检测Fas和Caspase-3蛋白表达。结果过度训练组大鼠心肌细胞凋亡率、fas和caspase-3基因表达水平均显著高于正常对照组(P<0.01)。而过度训练+牛磺酸组心肌细胞凋亡率、fas和cas-pase-3基因表达与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论牛磺酸对过度训练大鼠心肌细胞凋亡以及fas和caspase-3基因表达增高有较好的颉颃作用。

内质网应激诱导的细胞凋亡在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用及牛磺酸的影响

目的:探讨内质网应激诱导的细胞凋亡在大鼠肢体缺血再灌注(LIR)后肺损伤中的作用及牛磺酸的影响。方法:成年雄性SD大鼠40只,随机分成4组:(1)对照组(control);(2)LIR组;(3)牛磺酸处理组(LIR+taurine);(4)生理盐水处理组(LIR+saline)。采用生物化学方法检测血气变化及肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量;采用原位末端标记(TUNEL)法观察肺组织细胞凋亡情况;采用蛋白质印记方法(Westernblotting)及实时定量PCR(real-timePCR)方法观察LIR后肺损伤发生过程中CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)及活化的转录因子4(ATF4)和X-盒结合蛋白-1(XBP1)基因表达的改变;光镜下观察肺脏组织的形态学改变。结果:与对照组相比,LIR组的动脉血氧分压(PaO2)和动脉血二氧化碳分压(PaCO2)明显下降,肺组织中MDA水平明显升高,SOD和CAT活性明显降低,细胞凋亡数增多,CHOP蛋白表达上调,XBP-1、ATF4和CHOPmRNA表达水平明显上调;而牛磺酸能明显减轻LIR后肺损伤;肺呼吸功能明显改善,肺组织MDA的含量减少,SOD和CAT活性增加,细胞凋亡明显减少,CHOP蛋白表达下调,ATF4、XBP1和CHOP基因表达下调。结论:内质网应激诱导的细胞凋亡参与LIR后肺损伤,牛磺酸对LIR后肺组织的保护作用与其减轻内质网应激诱导的细胞凋亡有关。

牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡

目的观察牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。方法体外皮层神经细胞至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分7组,即对照组、染锰组(低、中、高剂量0.2,0.6,1.0mmol/L)、干预组(染低、中、高浓度锰同时分别给予1.5mmol/L牛磺酸干预)。各组处理24h后终止培养,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。结果1.TUNEL显示染锰后神经细胞呈现典型的凋亡形态学变化,牛磺酸对中浓度锰有一定的拮抗作用;2.FCM结果表明牛磺酸能拮抗锰诱导的神经细胞凋亡。结论牛磺酸对锰所致体外培养的皮层神经细胞的凋亡有保护作用。

高糖诱导的视网膜胶质细胞凋亡以及牛磺酸的防护效应研究

目的通过检测高糖和牛磺酸培养对大鼠视网膜胶质细胞凋亡的影响,探讨牛磺酸保护糖尿病引起视网膜损伤的机制。方法实验分为10组,分别为:5mmol/L葡萄糖培养组(正常葡萄糖);5mmol/L葡萄糖+(0.1、1和10mmol/L)牛磺酸培养组;25mmol/L葡萄糖培养组(高葡萄糖);25mmol/L葡萄糖+(0.1、1和10mmol/L)牛磺酸培养组;5mmol/L和25mmol/L葡萄糖+20mmol/L甘露醇组。用免疫细胞荧光双标法鉴定胶质细胞,用Annexin-V/PI双染结合流式细胞检测技术检测大鼠视网膜胶质细胞的凋亡情况。结果与正常对照组相比,25 mmol/L高糖组胶质细胞凋亡明显,高糖组的早期凋亡细胞百分率为20.6%;加入0.1、1、10mmol/L牛磺酸干预后,高糖组细胞凋亡率分别降为16.4%、5.7%和7.6%,牛磺酸干预组胶质细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。结论体外高糖培养可诱导大鼠视网膜胶质细胞发生凋亡,而牛磺酸对胶质细胞凋亡具有保护效应。上述结果可为牛磺酸用于糖尿病早期视网膜病变的防治提供重要的实验依据。

IL-1β、TNF-α和IFN-γ引起的大鼠胰岛细胞凋亡及牛磺酸的影响

目的:观察白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)引起胰岛细胞凋亡、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax蛋白表达变化及其牛磺酸的影响。方法:应用体外单层培养Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β、TNF-α和IFN-γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中NO2-/NO3-含量及NOS活性、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax表达的影响,并进一步观察牛磺酸的作用。结果:IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加,DNA明显片段化,同时NO2-/NO3-含量和NOS活性亦明显升高,胰岛素分泌明显降低,Bcl-xL表达下降和Bax表达增强(P<0.01);牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用(P<0.01),并有一定的剂量依赖性。结论:牛磺酸能够改善IL-1β、TNF-α和IFN-γ诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成以及下调Bax/Bcl-xL比例有关。

牛磺酸脱氧胆酸损伤线粒体诱导HepG2细胞凋亡

目的:探讨牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导HepG2细胞凋亡的分子机制。方法:应用HE染色、电镜和DNA电泳对细胞凋亡定性;应用流式细胞仪对细胞凋亡定量;检测TDCA诱导HepG2细胞凋亡过程中,线粒体细胞色素C释放及凋亡特异性蛋白酶Caspase-3、8、9活性的变化。结果:TDCA 400μmol/L孵育12h可诱导显著HepG2细胞凋亡,凋亡率为50.4±2.20％;TDCA诱导HepG2细胞凋亡过程中,线粒体细胞色素C释放呈时间依赖性增加,同时伴有Caspase-9,3蛋白酶活性显著增高,Caspase-8活性仅轻度增高。结论:启动线粒体细胞色素C释放及随后激活Caspase-9途径,可能是TDCA诱导HepG2细胞凋亡的主要机制。

牛磺酸对心肌细胞凋亡的保护及其机制

探讨牛磺酸对血管紧张素II(AngⅡ)诱导心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。将培养Wistar乳鼠心肌细胞随机分成对照组、细胞凋亡组(10-5mol/LAngⅡ诱导)和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)保护组,培养24h后观察各组心肌细胞存活率,细胞超微结构变化,末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪检测细胞凋亡,同位素标记磷酸化底物法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPKs)和蛋白激酶C(PKC)活性。凋亡组心肌细胞凋亡率为21.23%,呈现凋亡形态结构特征,MAPK和PKC活性分别较对照组升高33.8%和81.8%。3个牛磺酸保护组凋亡率分别为4.89%、2.53%和1.58%,MAPK活性较凋亡组分别下降16.0%、23.5%、29.8%,PKC活性较凋亡组分别降低18.8%、29.8%、44.6%。牛磺酸能浓度依赖地抑制血管紧张素II诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与心肌细胞内MAPKs和PKC活性降低有关。

大鼠脑出血后细胞色素c表达和神经细胞凋亡的关系及牛磺酸熊去氧胆酸的干预作用

目的 研究大鼠脑出血（ICH）后细胞色素c（cytc）表达和神经细胞凋亡的关系，探讨牛磺酸熊去氧胆酸（Tudca）的干预作用及其机制。方法 用VII型胶原酶注入到大鼠右侧苍白球诱导ICH模型。用凋亡原位末端标记技术（TUNEL）和免疫组化方法检测血肿周围神经细胞凋亡和cytc表达的动态变化。透射电镜观察术后3d血肿周围神经元超微结构的变化。结果：ICH后6hcytc表达开始增加，1d达高峰．此后逐渐减少，7d时回落至假手术组水平。ICH后6h血肿周边组织可见TUNEL阳性细胞．3d达高峰。然后逐渐减少，7d、10d时仍见较多凋亡细胞。ICH后7d内cytc表达和神经细胞凋亡呈正相关（r=0．6357，P〈0．01）。Tudca治疗组cytc和TUNEL阳性细胞数较模型组明显减少（P〈0．05～0．01），神经元超微结构改变亦比模型组减轻。结论 ICH后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与，cytc释放是神经细胞凋亡的一个关键事件，Tudca可以有效减轻脑出血后的细胞凋亡，其机制之一是抑制凋亡通路cytc的释放。

牛磺酸对细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡的影响

目的：观察牛磺酸对白细胞介素－１β（１Ｌ－１β）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）诱导的胰岛细胞凋亡的影响。方法：应用体外单层培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰岛细胞，分别检测ＩＬ－１β、ＴＮＦ和ＩＦＮ－γ以及牛磺酸对胰岛细胞凋亡细胞百分率，培养液中ＮＯ含量及ＮＯＳ活性以及ＤＮＡ片段的影响。结果：ＩＬ－Ｉβ、ＴＮＦ和ＩＦＮ－γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率及ＤＮＡ片段明显增加，同时ＮＯ含量和ＮＯＳ活性亦明显升高（Ｐ＜０．０１）；牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用（Ｐ＜０．０１），且有剂量依赖性。结论：ＮＯ可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径之一。牛磺酸能够改善细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡，其机制可能与抑制ＮＯＳ活性从而减少ＮＯ的生成有关。

牛磺酸对大鼠肝细胞凋亡的作用

目的 探讨牛磺酸对大鼠肝细胞凋亡的作用。方法 用CCl4诱导形成大鼠急性肝损伤模型 ,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记 (TUNEL)技术法测定大鼠肝细胞凋亡 ,免疫组织化学法测定大鼠肝细胞Bcl 2、Bax基因表达水平。结果 牛磺酸治疗组肝细胞凋亡指数明显降低 ,Bcl 2表达增强 ,Bax表达降低 ,与模型组比较差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 牛磺酸具有抑制肝细胞凋亡作用 ,机理可能与通过增强Bcl 2表达及抑制Bax表达有关。

牛磺酸抑制糖尿病大鼠坐骨神经雪旺细胞凋亡

目的观察牛磺酸对糖尿病大鼠坐骨神经雪旺细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法用链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型。牛磺酸治疗8周后应用化学比色法测定坐骨神经组织中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;用免疫组化法、RT-PCR和TUNEL法检测坐骨神经中活化的caspase-3蛋白和mRNA表达,以及雪旺细胞凋亡的情况。结果牛磺酸能降低坐骨神经中MDA水平,提高GSH水平(均P<0.05)。在正常鼠坐骨神经中,未见活化的caspase-3蛋白表达和细胞凋亡;Caspase-3 mRNA有极少量表达。模型对照组上述表达均增加,牛磺酸干预后其表达均较模型组表达明显减少(P<0.05)。结论牛磺酸抑制caspase-3 mRNA的转录与caspase-3的活化,减少细胞凋亡,与调节机体内的氧化应激状态有关,从而达到神经保护作用。

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Mller细胞凋亡的防护研究

目的观察高糖培养条件及牛磺酸干预视网膜Mller细胞的凋亡变化,探讨牛磺酸对早期糖尿病视网膜Mller细胞的保护作用。方法取出生后3d的SD大鼠视网膜,分离纯化培养视网膜Mller细胞;经预实验选取25mmol/L葡萄糖作为高糖培养条件,实验分为6组:正常组;高糖+0.1mmol/L牛磺酸组;高糖+1mmol/L牛磺酸组;高糖+5mmol/L牛磺酸组;高糖+10mmol/L牛磺酸组,用原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测视网膜Mller细胞凋亡并观察牛磺酸的防护效应。结果神经胶质酸性蛋白(glia1fibrillary acid protein,GFAP)和S-100荧光双染鉴定纯化培养的视网膜Mller细胞均被双染;牛磺酸干预后TUNEL阳性细胞数量明显减少,并呈一定剂量的关系效应,1～10mmol/L牛磺酸干预TUNEL阳性细胞显著低于高糖培养组(P<0·01)。结论牛磺酸能够呈剂量依赖性地抑制高糖所致视网膜Mller细胞凋亡。

牛磺酸对新生大鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 :研究牛磺酸对培养的心肌细胞模拟缺血 /再灌注 (I/R)过程中心肌细胞凋亡的影响。方法 :培养 SD大鼠乳鼠心肌细胞 ,建立模拟 I/R模型。实验分 3组 :1正常对照组 ;2模拟 I/R组 :缺氧 12 0 min,复氧 2 40 min;3牛磺酸组 :I/R前加用 2 0 mm ol/L 牛磺酸。计算台盼蓝摄取率 ,测定乳酸脱氢酶 (L DH)活性 ,以流式细胞仪 (FCM)和透射电镜观察细胞凋亡。结果 :在正常对照组 ,FCM未发现凋亡峰 ,电镜未发现凋亡细胞 ;I/R组 FCM检测的凋亡率为 15 .1%,电镜下可见到典型的凋亡细胞 ,台盼蓝摄取率和 L DH活性较对照组显著增加 [分别为 (35 .3± 1.7) %vs(2 .6± 0 .8) %和 (184.8± 4.6 ) U/m l vs(4 6 .3± 2 .4) U/ml;两者 P<0 .0 5 ]。牛磺酸组心肌细胞大部分存活 ,凋亡率明显降低 (平均 3.5 %,P<0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡参与了心肌 I/R损伤 ,牛磺酸可减少 I/R心肌细胞的凋亡。

牛磺酸对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及其凋亡抑制作用

目的:探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(AM)肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达和对细胞凋亡的影响及其作用机制,为尘肺的临床治疗提供依据。方法:24只大鼠随机分为对照组、模型组和牛磺酸组,每组8只。收集各组大鼠肺泡灌洗液(BALF),分离AM。应用ELISA检测灌洗液中TNF-α水平;采用TUNEL法检测各组大鼠AM凋亡情况;采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂情况。结果:对照组、模型组和牛磺酸组大鼠肺泡灌洗液中TNF-α水平分别为(215.8±11.7)、(528.2±23.3)和(364.3±21.4)ng·L-1,与模型组比较,牛磺酸组矽尘大鼠肺BALF中TNF-α水平明显降低(P<0.05)。牛磺酸组AM凋亡指数为(9.38±1.64)%,显著高于对照组[(5.01±1.17)%](P<0.01);牛磺酸组与模型组AM凋亡指数[(14.03±0.74)%]比较显著降低(P<0.05)。模型组大鼠AM呈现细胞凋亡的特征性DNA梯状带,对照组和牛磺酸组AM未见特征性DNA梯状带。结论:牛磺酸通过下调TNF-α的表达,抑制二氧化硅引起的大鼠AM的凋亡。

牛磺酸对汞致肾细胞凋亡的影响

目的探讨牛磺酸对汞致肾细胞凋亡的影响。方法昆明种小鼠24只随机分成3组,第1组为阴性对照组,第2组为单纯染汞组,第3组为牛磺酸干预组。单纯染汞组小鼠腹腔注射3.0mg/kg的氯化汞溶液,对照组注射0.9%的氯化钠溶液,注射容量为0.2ml/10g。牛磺酸干预组于注射3.0mg/kg的HgCl2前2h腹腔注射4mmol/kg牛磺酸溶液。24h后将小鼠颈椎错位处死,制备透射电镜标本,观察凋亡细胞形态;免疫组化法检测bcl-2和bax凋亡相关基因表达。制备单细胞悬液,流式细胞仪进行凋亡细胞百分数分析。结果透射电镜观察,对照组小鼠肾近曲小管细胞形态规则,单纯染汞组表现微绒毛排列紊乱,染色质聚集成块,核破碎释放出凋亡小体,凋亡小体被邻近细胞吞噬等典型细胞凋亡形态。牛磺酸组显示接近正常的肾小管上皮细胞的形态,仅见到少量的线粒体嵴溶解。流式细胞仪分析染汞组明显高于对照组,牛磺酸干预组均显著低于染汞组。免疫组化检测牛磺酸干预组bcl-2蛋白的表达显著高于染汞组;bax蛋白的表达显著低于染汞组。结论牛磺酸可以抵抗汞所致的肾细胞凋亡,使凋亡相关基因bcl-2的表达上调,bax的表达下调。

牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法取兔晶状体离体培养,分为对照组、H_2O_2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组,每组64只晶状体,分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况,DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H_2O_2氧化损伤组,与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳:H_2O_2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带;而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H_2O_2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡,从而延缓或减轻白内障形成。

新生牛肝中三种低分子化合物牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:研究三种新生牛肝源低分子化合物:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL60白血病细胞增殖的抑制作用并探讨其调控机理。方法:用MTT法分别检测三种活性成分作用后HL60细胞和正常人淋巴细胞的存活率。分别用琼脂糖凝胶电泳,顺磁共振ESR技术,免疫组化法测定其对HL60细胞的核DNA、氧自由基活性和细胞周期蛋白水平的影响。结果:三种化合物能够有效地抑制HL60细胞的增殖,而对正常的人淋巴细胞的生长没有抑制作用;三种化合物使HL60细胞的核DNA产生30kb片段,使HL60细胞内的氧自由基活性降至痕量水平,并下调HL60的p45/skp2的水平,而上调p27/kip的水平。结论:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽能够通过调控细胞周期蛋白的水平而选择性的抑制肿瘤细胞的增殖。