5个牛种X染色体单纯型微卫星分布规律及其差异研究

为探究牦牛、普通牛、瘤牛、水牛和印度野牛X染色体基因组序列中单纯型微卫星(Perfect Microsatellites)的分布规律及其差异,本研究利用Krait v 1.4.0软件对以上5个牛种X染色体基因组中的单纯型SSRs序列进行了检测,并对其分布特征进行了综合分析。结果表明,在牦牛、普通牛、瘤牛、水牛和印度野牛的X染色体基因组序列中分别筛选到41321、44200、44075、45206个和45701个单纯型SSRs;普通牛X染色体中的单纯型SSRs相对频率最高(317.96 loci/Mb),其次是水牛(315.70 loci/Mb)、印度野牛(312.74 loci/Mb)和牦牛(303.08 loci/Mb),而瘤牛最低(296.16 loci/Mb);水牛X染色体中单纯型SSRs序列总长度占比最高(0.58%),普通牛(0.57%)、牦牛(0.57%)和印度野牛(0.56%)次之,瘤牛最低(0.53%)。5个牛种的X染色体中,单碱基重复类型的SSRs相对频率均最高,其次是两碱基、三碱基、五碱基、四碱基和六碱基重复类型,且单碱基、两碱基、三碱基、四碱基和五碱基重复类型中单纯型SSRs数量最多的重复拷贝类别相同,分别是A、AC、AGC、AAAT和AACTG,普通牛六碱基重复类型中AACCCT重复拷贝类别的SSRs数量最多,牦牛、瘤牛、水牛和印度野牛则是AAAAAC重复拷贝类别的SSRs数量最多。各牛种间相同重复类型的SSRs其重复单元的拷贝数集中的范围基本一致,6种重复类型的SSRs其重复单元的拷贝数分别集中在12~28次(单碱基)、7~24次(两碱基)、5~13次(三碱基)、4~8次(四碱基)、4~7次(五碱基)和4~10次(六碱基)。5个牛种X染色体上单纯型SSRs的分布模式均为非随机分布,部分单纯型SSRs(如重复基序为AT、ATCC、AACCCG的SSRs)倾向于聚集在X染色体的某一个区域,各牛种X染色体中发生聚集的SSRs类别和区域存在差异,显示单纯型SSRs在各牛种X染色体中拥有独特的分布模式。本研究结果为深入了解各牛种X染色体基因组序列中单纯型SSRs的组成和分布特征提供了参考,并为进一步探讨各牛种X染色体基因组中重复序列的进化规律和生物学功能奠定了基础。

贵州省2株牛种布鲁氏菌分子流行病学特征分析

目的分析贵州省牛种布鲁氏菌分子流行病学特征,为牛种布鲁氏菌病疫情的防控提供科学依据。方法采用BCSP31-PCR及AMOS-PCR技术对经传统方法鉴定为牛种布鲁氏菌的2株分离株进行属/种复核,采用基于布鲁氏菌rpoB基因的单核苷酸多态性分析了解其rpoB基因型,采用MLVA-16技术进行MLVA分型,了解其与国内牛种布鲁氏菌的聚类关系,采用MLST技术分析其序列型及其与国内菌株间的遗传进化关系。结果2株分离株经BCSP31-PCR和AMOS-PCR技术被鉴定为布鲁氏菌属细菌,未能明确其具体种型;其rpoB基因型相同;MLVA分型与新疆牛种布鲁氏菌共享同一MLVA-16型(4-5-3-12-2-2-3-1-6-43-8-5-5-5-3-3);MLST分析鉴定2株菌均为ST2型,最小间距图显示2株菌与布鲁氏菌属内的牛种布鲁氏菌遗传距离最近,属同一个遗传复合体。结论贵州省2株牛种布鲁氏菌分离株间的遗传距离近,与新疆牛种3型布鲁氏菌为同一MLVA型,提示分离株引起的感染可能为外省输入。

牛种布鲁氏菌31KD_a蛋白基因引物的PCR试验(Ⅰ)

目的 检查Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓ３１ＫＤａ蛋白基因引物ＰＣＲ的特异性和敏感性。方法 用煮沸法和酚提法分别从６个种布鲁氏菌和耶氏菌Ｏ３、Ｏ９、大肠菌 Ｏ１５７．Ｈ７以及鼠伤寒沙门氏菌４７ ７２９中提取ＤＮＡ进行ＰＣＲ试验。结果３１ＫＤａ蛋白基因引物Ｂ４、Ｄ５对６个种布鲁氏菌ＤＮＡ均能扩增，对非布鲁氏菌ＤＮＡ呈阴性。该扩增反应与提取ＤＮＡ方法无关，与在一定范围内酶量关系不大。Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ可查０．９５ｏｇ／μｌ的布鲁氏菌ＤＮＡ。结论Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ具有良好的特异性和敏感性，可在现场中试用。

牛种布氏杆菌单克隆抗体株的建立

作者选用布鲁氏菌地方株牛种Ⅲ型S_(85)A与SP2/0-Ag14细胞融合,获得7株产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,这些单克隆抗体为IgG_(2b)和IgG_3亚类,其中S_(85)A-A_7株所产生的单克隆抗体效价达1∶25×10~4,它除与S_(85)A呈阳性反应外,与其他强毒株均无交叉反应。

中国牛种布鲁氏菌疫苗株A19 SNP位点的研究

为鉴别我国牛种布鲁氏菌疫苗株A19与野生菌株,运用生物信息学方法结合基因测序,对疫苗株A19基因组单核苷酸多态性(SNP)位点分析筛选,选取其中部分SNP位点,通过与布鲁氏菌常见种、生物型标准参考菌株和疫苗株基因组SNP位置核苷酸测序比较,验证SNP位点的A19特异性。结果表明,共筛选获得A19基因组29个SNP位点,验证ClpX G825-C825、LysR A605-C605、Omp2b G503-A503这3个SNP位点为A19(或S19)特异,揭示了A19基因组SNP位点分布情况,为疫苗株A19与野生菌株鉴别提供了分子依据。

新型牛种布鲁氏菌菌苗(SRB51)国外研究进展

牛种布鲁氏菌株SRB51是一新的布鲁氏菌菌苗株,它是牛种布鲁氏菌株2308(简称S2308)的变异株.它不仅用在牛的免疫接种,而且也用在鼠、小猎兔犬、(北美洲野牛)等动物的免疫接种.本文就此菌苗在国外的研究状况加以概述,仅供参考.

牛种布氏菌单克隆抗体的研究

应用酚杀死的光滑型牛种布氏菌544A抗原免疫的BALB/C小鼠,融合前一周用超声波处理后高速离心制备的可溶性抗原加强免疫,腹腔内注射3次,以无菌手术取脾,制备成免疫脾细胞悬液,取10~8个免疫脾细胞与10~7个SP^2/0小鼠骨髓瘤细胞混合,在分子量4000的PEC 0.8ml(w/v)融合剂的作用下,两分钟后速加无血清的1640液25ml,离心沉淀再悬浮于20%FBSHAT1640培养基中,分装六块96孔细胞培养板,定期补加培养液。10天后开始测其孔上清,其检出阳性孔44孔(ELISA OD值>0.3),初步筛选出11株效价较高、特异性较好者,经反复检测,抗体分泌水平比较稳定,扩大培养,冻存液氮中。克隆后的细胞染色体计数平均为94条/细胞,无血清培养的细胞上清液在PAGE中呈现一条带,符合Mc.cell株仅分泌一种抗体的特性。

亚州部分牛种间类缘关系的研究

本研究以三个主要血液蛋白位点（血红蛋白、白蛋白及运铁蛋白）探讨了亚州78个牛种间的亲缘关系．结果表明；所研究的亚州78个牛种分属家牛型、爪哇牛型及大额牛型三个集团．家牛集团由北方与南方两大类群组成；北方牛类群包含有中国、南朝鲜及日本之牛种，南方牛类群包含有东南亚、南亚八国牛种，两者群体间遗传关系较远（D＝0.622），与爪哇牛（D＝0．82）及大额牛（D＝0.92）3更远．确认中国黄牛主要血统来源为早期饲养在我国黄河中下游一带的亚州原牛和瘤原牛．

云南主要地方牛种的屠宰性能研究

首次对云南主要地方牛种的屠宰性能作了研究。大额牛、云南瘤牛、迪庆黄牛、中甸牦牛和中甸牛扁牛的宰前活重（ｋｇ）分别为１７０．０±２５．０、３２４．５±２８．５、１６３．３０±２４．８９、３０９．１３±５９．７５和１８３．２５±２７．５９；胴体重（ｋｇ）分别为７８．１８±８．８２、１６５．９１±１６．２９、８３．８８±１５．４２、１７８．７７±３４．０８和８３．８５±１８．１４；屠宰率（％）分别为５２．５６±０．７８、５１．０８±１．５３、５１．２５±２．９０、５７．６０±４．５４和４５．４４±３．５１；净肉率（％）３９．７６±０．２４、３９．９７±１．２９、３９．７９±３．９２、４５．６８±４．３９和３４．３１±３．８５；眼肌面积（ｃｍ２）分别为４９．８４±１４．８２、７６．０７±３．６０、３３．２０±５．９２、５５．３５±１５．３１和３４．３７±９．７２。结果表明：大额牛、云南瘤牛、迪庆黄牛和中甸牦牛，在放牧条件下有较好的产肉性能，尤其是云南瘤牛、中甸牦牛的产肉性能更为突出。

云南主要地方牛种肉质特性研究

对大额牛、云南瘤牛、中甸牦牛、迪庆黄牛和中甸牛扁牛的肉质特性作了系统测试，分析和对比。结果表明：５个牛种在肌肉ＰＨ值、系水率、嫩度（剪切力）、贮藏损失、熟肉率、肉色评分和大理石评分以及品偿鉴定等肉质特性指标上均有差异。但总的看来，它们在自然放牧条件下，均表现出优良的肉质特性。５个牛种肌肉蛋白质含量均高于１９％，脂肪含量均低于１．４０％。低脂肪含量的特性，与纯天然放牧有关，也与种质特性密切相关。

云南主要地方牛种肌肉氨基酸营养特性研究

首次报道了云南主要地方牛种肌肉氨基酸测定分析结果，氨基酸总含量（ｍｇ／１００ｇ）：云南瘤牛（７４９５３．１３）、中甸牦牛（７３０４７．７９）和大额牛（７０９３７．９８）均明显高于迪庆黄牛（６７２２８．０１）和中甸牛扁牛（６３９０２．８５）；必需氨基酸含量（ｍｇ／１００ｇ）：云南瘤牛（３０８７１．８６）、中甸牦牛（３０４１４．３６）和大额牛（３０２０７．６１）均显著高于迪庆黄牛（２７０５３．２６）和中甸牛扁牛（２３６１９．９４）；必需／非必需氨基酸之比，大额牛（０．７４１３）、中甸牦牛（０．７１３９）和云南瘤牛（０．７００３）均明显高于迪庆黄牛（０．６７１５）和中甸牛扁牛（０．５９２１）。结果表明，在自然放牧条件下，大额牛、中甸牦牛和云南瘤牛的肌肉氨基酸营养价值要高于中甸牛扁牛和迪庆黄牛。

牦牛mtDNA限制性类型及与其它牛种分化研究

用２０种限制性内切酶分析了２１头牦牛ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性（ｍｔＤ－ＮＡＲＦＬＰ），通过双酶切制定出其内切酶物理图谱，发现牦牛ｍｔＤＮＡ存在４种限制性类型。计算出牦牛与普通牛、瘤牛分化时间大约分别在１．１－２．２、１．０１－２．

云南主要地方牛种横纹肌组织形态学研究

采用组织学、电镜方法对云南主要地方牛种大额牛、云南瘤牛、中甸牦牛、迪庆黄牛和中甸牛扁牛的肌纤维特性作了系统研究。５个牛种背最长肌的肌纤维直径（μｍ）分别为５７．４８±１．１５、１０９．４５±１．８４、１００．３８±６．２５、９０．３８±５．３１和９７．３５±９．６２；肌纤维密度（根／ｍｍ２）分别为２０１．５４±２．６６、１１５．４５±４．０４、１０６．３０±１０．１０、９０．３８±５．３１和９２．３５±９．６２；肌束内纤维数（根）分别为７３．２３±８．９０、３４．３２±８．７７、３６．３２±８．３０、４７．６２±８．９０和４０．４０±８．７９。肌节长度（μｍ）以大额牛公牛最长（１．７０６５），云南瘤牛去势公牛居中（１．４６７０），云南瘤牛公牛最短（１．２０５０）。

中国旱区的牛种资源与利用

在评价我国旱区养牛业基本条件的基础上，对列入《中国牛品种志》的旱区１１个品种（其中黄牛４个．耗牛３个，培育品种４个）做了简要剖析，提出进一步发展和利用旱区珍贵牛种资源，提高养牛业经济—社会—生态效益的四点意见。

五大牛种转型的启示

笔者在《五大牛种转型记》一文中，记述了我国的五大地方良种牛——秦川牛、南阳牛、晋南牛、鲁西牛、延边牛，改革开改30多年来转型发展的情况。在全国肉牛业一片不景气的声浪中，五大牛种转型的成绩，让人们看到了亮点，看到了希望，这也许就是中国肉牛业崛起的先声，假以时日，一个独立的现代化的肉牛产业可能就会展现在我们的面前。

牛种布鲁氏菌2308紫外诱变株毒力检测及其对昆明系小鼠的免疫效果研究

为了检测牛种布鲁氏菌2308紫外诱变株毒力和免疫效果,本实验以S19疫苗株为对照,用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外线照射组(2308△rwbk A、2308△romp25和2308△rery)和非照射组(2308△wbk A、2308△omp25和2308△ery)分别侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,对小鼠巨噬细胞内的细菌进行计数评价毒力致弱情况;用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外照射组、非照射组以及S19疫苗株分别以1×107CFU/0.2 m L免疫4-6周龄昆明系小鼠,通过ELISA检测小鼠血清中布鲁氏菌Ig G抗体和IFN-γ细胞因子,同时分离脾脏,CFU计数布鲁氏菌胞内菌数量;用2308强毒株以3×108CFU/0.2 m L腹腔感染各组免疫10周后小鼠,脾脏CFU评价各受试组小鼠的免疫效果。结果表明:在细胞水平,紫外线照射后的布鲁氏菌基因突变株其CFU较紫外线非照射组有不同程度的下降,统计学分析无显著性差异(P>0.05),但均高于S19胞内菌CFU;与S19疫苗株相比,2308△rwbk A和2308△rery紫外线照射组与其对应的2株紫外线非照射组在不同检测阶段,其Ig G和IFN-γ含量水平相当,但2308△romp25紫外线照射菌株组在第6、8周,其Ig G和IFN-γ含量均高于2308△omp25紫外线非照射菌株组和S19免疫组,统计学分析有显著性差异(0.01<P<0.05);攻毒实验表明:经过紫外照射的romp25缺失株产生的保护力高于其它未经过紫外照射的缺失株,但低于S19疫苗株免疫效果。结论:紫外诱变株romp25毒力进一步降低而且能够产生一定的保护效果。

牛种布鲁氏菌SP41基因的克隆及序列分析

根据GenBank上发表的牛种布鲁氏菌SP41基因序列,设计合成了一对特异性引物。从牛A19疫苗中提取全基因组DNA作为模板,PCR扩增出SP41基因,连入pEASY-T3载体,测序结果表明,扩增的片段含有1 302个核苷酸,编码433个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的布鲁氏菌2308、A-13334、S19、9-941序列的氨基酸同源性为100%;与布鲁氏菌ATCC、CCM4915、M28、M5-90、NI的氨基酸同源性为99.8%。布鲁氏菌SP41基因的克隆,为获得重组SP41蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。

谈我国牛种与奶业开发

我国是世界上拥有黄牛、水牛、牦牛和奶牛较多的国家,总计已近亿头。其中以黄牛最多,约占总牛数的60％以上,水牛占20％以上,牦牛占13％以上而奶牛仅占2％左右,年产奶总量约为400多万吨,年人均占有奶量为4公斤,与世界奶牛业发达国家相距甚远,奶业资源亟待开发。