不同温度对牛精子相关抗原11D基因的影响

为探讨高温对精子膜蛋白牛精子相关抗原11D(sperm associated antigen 11,SPAG11D)表达水平的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸原代细胞和娟姗牛、槟榔江牛、西门塔尔牛的正常精子及低活力精子中SPAG11D的表达。结果显示,牛睾丸原代细胞在不同温度(32、34、36、38和40℃)下培养24h,SPAG11D的mRNA及蛋白在36℃时表达水平最高,且高温时表达水平比低温时要高;培养48h时,SPAG11D的mRNA表达基本和24h相一致,但蛋白表达水平在高温时明显下降。此外,槟榔江牛和娟姗牛低活力精子中SPAG11D的蛋白表达量比正常精子明显降低,而在西门塔尔牛的精液中变化不明显。

牦牛SPAG11基因克隆与生物信息学分析

【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)精子相关抗原11(Sperm-Associated Antigen 11,SPAG11)基因,并了解其分子结构特征,为进一步研究牦牛SPAG11生物学功能奠定基础。【方法】从牦牛睾丸中提取总RNA,RTPCR扩增并克隆SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,测序后进行生物信息学分析。【结果】克隆出牦牛SPAG11基因3个亚型:SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E,序列大小分别是351,408和261bp,分别编码117,129和80个氨基酸,其中SPAG11 D和SPAG11E序列包含1个完整开放阅读框(ORF),SPAG11C序列包含部分ORF。牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E核苷酸序列与黄牛(Bos taurus)相应序列相似性最高,而与黄牛β-防御素1相似性较低(<50%)。3个蛋白亚型均具有β-防御素家族基本特性,生物信息学分析显示其均含有磷酸化位点。【结论】成功克隆牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,明确了其编码蛋白的分子结构特征。