用于Real-time PCR检测的牛肉组织DNA提取方法探索

使用Chelex-100提取牛肉组织DNA,并用紫外分光光度法检测所提取的DNA浓度和纯度,结果表明所提取的DNA A260 nm/A280 nm在1.662～1.826之间,纯度较高。Real-time PCR扩增提取的DNA模板,表现出较高的敏感性。该DNA提取方法效率较高,操作简便,能够获得较高质量的DNA,适合检疫部门的快速检测需要。

牛肉肌纤维直径和结缔组织含量与嫩度相关性研究

分别选取来自安徽大明牧业牛场的18、36、54、72月龄西门塔尔杂交公牛各6头,在同一商业屠宰场进行屠宰。测定其背最长肌肌纤维直径、羟脯氨酸含量和剪切力。结果表明:背最长肌剪切力随着肌纤维直径的增大而增大,随着羟脯氨酸含量的增加而增大;背最长肌剪切力与肌纤维直径、羟脯氨酸含量有较高的相关性;剪切力与肌纤维直径和羟脯氨酸含量的相关系数r分别为0.833和0.835,为强正相关;建立的剪切力与肌纤维直径的指数回归方程为y=1.162e0.034x,R2=0.932,说明回归方程拟合较好;建立的剪切力与羟脯氨酸含量的指数回归方程为y=1.793e27.430x,R2=0.947,说明回归方程拟合较好。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡组织和牛组织中的甲苄喹啉和癸氧喹酯

目的建立超高效液相色谱-串联质谱检测鸡组织和牛组织中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留的检测方法。方法样品采用乙腈提取,亲水-亲脂平衡介质固相萃取柱(hydrophile-lipophile balance,HLB)净化,超高效液相色谱-串联质谱仪检测,外标法定量。结果甲苄喹啉和癸氧喹酯在0.005~0.250 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法定量限为0.01 mg/kg,平均回收率范围为77.0%~110%,相对标准偏差范围为1.36%~12.4%。结论 本方法简便、快速、准确、灵敏度高,适用于鸡组织和牛组织中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留的检测与确证。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛肉中18种食源性兴奋剂类药物残留

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测牛肉中18种食源性兴奋剂类药物残留的方法。牛肉组织经酸化乙腈提取,Captiva小柱脱脂净化后,用无水硫酸镁干燥,上清液氮吹浓缩,残渣用甲醇-水(7∶3,v/v)溶解。采用Agilent Zorbax Phenyl-Hexyl色谱柱分离,以5 mmol/L醋酸铵水溶液(含0.01%(v/v)醋酸)和甲醇-乙腈(7∶3,v/v)作为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾正负离子切换模式下以多反应监测(MRM)方式检测,用基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明,18种食源性兴奋剂类药物在0.10~50μg/L范围内线性关系良好,相关系数(R2)≥0.995 0;在0.4、1.0和2.0μg/kg添加水平下的回收率为57.3%~117.5%,相对标准偏差为3.1~15.6%(n=5);方法的检出限和定量限分别为0.000 6~0.090 0μg/kg和0.002 0~0.300 0μg/kg。该法可以实现对牛肉样本中18种兴奋剂类药物残留的定性定量分析,具有简单、快速、准确性高的特点。

QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法测定牛肉及其组织中巴喹普林残留

目的建立QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定量检测牛肉及其组织中巴喹普林残留量的方法。方法样品经甲醇-1%氨水(2:8,V:V)超声提取后,使用QuEChERS试剂盒净化,UPLC-MS/MS检测,内标法定量分析。结果巴喹普林在0.5~20.0 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,线性相关系数为0.9996;检出限为1.0~2.0μg/kg,定量限为3.0~6.0μg/kg;巴喹普林在7种牛肉组织中均表现为基质减弱效应,在牛肝中基质效应最强,为75.45%,在其他基质中基质效应不明显。经同位素内标校正后,巴喹普林在所有基质中的回收率为101%~111%;3个添加水平的平均回收率为89.71%~103.94%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.95%~6.58%。结论该方法灵敏度高、精密度好、准确度高、前处理简便,可以作为牛肉及其组织中巴喹普林残留量的快速检测方法。

头孢噻呋钠在肉牛组织中的残留消除

本研究旨在分析头孢噻呋钠在牛体内的残留消除规律,进而为休药期的制定提供依据。20头健康试验牛按体质量以2.2 mg/kg肌内注射头孢噻呋钠,连续给药3 d,分别在最后1次给药后0.5,3,5,7,9 d宰杀所有试验牛并采集背最长肌、注射部位、肝、肾以及脂肪样品。样品用二硫赤藓糖醇提取后,经碘乙酰胺衍生化后调节pH至2.3,最后使用HLB固相萃取柱净化,氮吹复溶后用高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测。结果显示:给药后0.5 d肾组织中的药物浓度最高,为3772.02μg/kg,且所有组织的药物浓度均低于最大残留限量(MRL)。参照EMEA制定的头孢噻呋钠在牛上的MRL,采用休药期计算软件WT1.4计算各组织的休药期,各组织的休药期分别为背最长肌0.00 h、注射部位92.01 h、肝31.77 h、肾68.13 h、脂肪25.74 h,计算可得注射部位的休药期最长,为92.01 h。结果提示,头孢噻呋钠在牛体内代谢迅速,消除较快,建议将休药期定为4 d。