牛肌酸激酶同功酶CK-BB的全基因合成及其原核表达

牛肌酸激酶是重要的能量代谢酶,尤其是在机体发生炎症时,会在局部存在特异性升高,具有潜在的疾病标志物作用。根据牛肌酸激酶同功酶CK-BB的氨基酸序列及大肠杆菌(BL21)密码子的偏爱性,设计合成54条互相重叠的引物,通过组装PCR分别合成CK-BB的6个片段CK-BB1、CK-BB2、CK-BB3、CK-BB4、CK-BB5和CK-BB6;再以基因头ck-1和基因尾ck-54为引物,以CK-BB1、CKBB2、CK-BB3、CK-BB4、CK-BB5和CK-BB6混合物为模板进行第2轮扩增;将得到的产物连接到p ET28b载体上,挑取重组子测序。通过PCR扩增对人工合成的基因进行校正,得到完全正确的CK-BB基因,为重组牛肌酸激酶同功酶CK-BB的规模化制备奠定了基础。