电针对慢性炎症疼痛大鼠背根神经节牛肾上腺髓质22肽及其受体基因表达的影响

[目的]观察电针对完全福氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)致慢性疼痛大鼠患侧腰背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)牛肾上腺髓质22肽(BAM22)与其感觉神经元特异性受体(SNSR)、MOR与DOR基因表达的影响。[方法]200±20g雄性SD大鼠30只,随机分成正常对照组、模型对照组、电针组,每组10只,模型对照组、电针组右足CFA造模。电针组从造模24h开始治疗,患侧"足三里"穴,2/100Hz,30min,1次/d,治疗10d,其余2组不予治疗。采用辐射热法检测大鼠缩爪潜伏期观察大鼠患侧热痛敏变化,免疫组化法检测患侧背根神经节BAM22多肽的含量,定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测患侧背根神经节SNSR、MOR与DOR mRNA的表达。[结果]经过10d的治疗,电针组的痛阈与模型对照组相比,有显著提高(P<0.05)。免疫组化结果显示,电针干预后,患侧背根神经节的BAM22阳性细胞率比模型对照组有显著的提高(P<0.01)。定量PCR结果显示,电针极大地促进了SNSR(P<0.01)、MOR(P<0.01)与DOR mRNA(P<0.01)在患侧DRG中的表达。[结论]电针对CFA大鼠慢性疼痛有良好的干预作用,推测该作用与电针增强患侧腰背根神经节BAM22多肽表达,增强其非阿片受体SNSR与其阿片受体MOR与DOR mRNA表达相关。

椎管内注射牛肾上腺髓质22肽差异性翻转吗啡耐受作用

牛肾上腺髓质22肽(bovineadrenalmedulla22,BAM22)是脑啡肽原A的一种降解产物,与阿片受体和感觉神经元特异性受体(sensoryneuron-specificreceptor,SNSR)均有亲合力。本研究的目的是探讨BAM22对吗啡耐受的影响。连续7d对大鼠椎管内注射20μg吗啡形成吗啡耐受后,分为吗啡组、盐水组和BAM22组,第8天三组大鼠椎管内分别注射吗啡、生理盐水和BAM22,第9天三组大鼠椎管内均注射吗啡后,运用撤足反射、福尔马林实验和免疫组织化学等方法观察吗啡的作用效果。结果显示:在撤足反射实验中,BAM22组的吗啡能延长撤足反射潜伏期最大可能作用的48.5%,并持续约1h;在福尔马林实验中,BAM22组的吗啡能分别缩短福尔马林引起的第一期和第二期疼痛行为变化3.2min和24min,比盐水组分别减少45%和82%(P<0.05,P<0.001);此外,在免疫组织化学实验中,BAM22组的吗啡能显著减少热刺激引起的脊髓背角c-Fos蛋白表达,其I-II层、III-IV层和V-VI层均减少约80%(P<0.001)。本研究从整体和细胞水平表明,BAM22能翻转吗啡的耐受,这种作用在持续性疼痛模型中的表现要比急性痛中更为明显,显示BAM22对吗啡耐受的差异性调制;同时也提示感觉神经元特异性受体可能参与吗啡耐受的调制。

牛肾上腺髓质22肽削弱完全弗氏佐剂引起的早期痛觉过敏

本研究旨在探讨感觉神经元特异性受体(sensory neuron-specific receptor,SNSR)的内源性激动剂牛肾上腺髓质22肽(bovine adrenal medulla22,BAM22)对完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)引起的早期炎性痛的影响。在大鼠后足皮下注射CFA形成炎性痛模型,通过撤足反射、脚肿测定和免疫组织化学等方法观察鞘内给予BAM22对炎性痛的影响。结果显示:在撤足反射实验中,BAM22能剂量依赖地延长CFA炎性鼠撤足反射潜伏期基础阈值,增强抗伤害作用,并降低脚肿程度。10nmol BAM22作用48h后,撤足反射潜伏期恢复至正常的83.2%,脚肿仅增加60.0%;24h时延长撤足反射潜伏期达最大可能作用的33.5%,并持续至少1h。在免疫组织化学实验中,BAM22能显著降低CFA引起的L3-L5脊髓背角神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)阳性细胞和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)样免疫活性物质的表达,与生理盐水组相比分别下降了25.6%(P<0.01)和25.2%(P<0.001);BAM22处理组背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的小型和中型CGRP阳性细胞分别为57.4%和35.2%,明显低于生理盐水组(P<0.001)。结果表明,BAM22可能通过SNSR下调nNOS和CGRP的表达来削弱CFA引起的早期热痛觉过敏和恢复抗伤害效力。

牛肾上腺髓质8-22肽增强吗啡的抗伤害作用

采用甩尾反射实验研究椎管内注射感觉神经元特异性受体的激动剂牛肾上腺髓质8-22肽(bovineadrenal medulla 8-22,BAM8-22)对吗啡抗伤害作用的影响.结果表明,BAM8-22本身并不能改变伤害性热刺激引起的甩尾反射潜伏期,但与吗啡混合使用时,能明显增强吗啡的抗伤害作用.0.1,1,10 nmol BAM8-22与0.3μg吗啡混合进行椎管内注射,能剂量依赖地增强吗啡的抗伤害作用.0.1 nmol BAM8-22分别与0.2,1,5μg吗啡混合进行椎管内注射后,吗啡的抗伤害作用分别为35.1%,61.8%,72.7%,明显高于吗啡对照组的13.0%,30.7%,52.8%(P<0.01).本研究表明,BAM8-22能增强吗啡的抗伤害作用,暗示感觉神经元特异性受体(SNSR)参与调制阿片受体的抗伤害过程.

牛肾上腺髓质8-22肽在福尔马林持续性痛中对吗啡耐受的调制

观察椎管内注射感觉神经元特异性受体选择性激动剂牛肾上腺髓质8-22肽(bovine adrenal me-dulla 8-22,BAM8-22)在福尔马林引起的持续性痛中对吗啡耐受的影响.结果表明,吗啡(20μg)在正常大鼠中能显著抑制福尔马林引起的痛行为,多次应用吗啡导致耐受后,其抑制痛行为的能力大大减弱(P<0.001);吗啡耐受后,BAM8-22(0.1 nmol)能翻转吗啡的耐受效应,福尔马林引起第2期抬足/舔爪持续时间和抖动次数分别减少了39.4%(P<0.001)和25.3%(P<0.05).每天椎管内联合应用BAM8-22(0.1 nmol)和吗啡(20μg)不影响吗啡耐受的形成,但隔天给予BAM8-22则能有效延缓吗啡耐受的形成,福尔马林引起第2期缩足舔爪和抖动分别为14.7 min和234.5次,与吗啡耐受鼠相比,分别减少了41.0%(P<0.001)和24.8%(P<0.05).然而,BAM8-22并没有完全翻转或抑制吗啡的耐受(P<0.001).此外,连续6 d给予BAM8-22后会降低吗啡在福尔马林持续痛中的抗伤害作用.证明在福尔马林引起的持续性痛中,SNSR受体参与了调制阿片受体的敏感性.同时,提示在持续性痛中,通过BAM8-22延缓或翻转吗啡耐受是利用阿片受体治疗持续性痛的有效方法.

BAM22多肽对慢性炎性痛大鼠痛阈和电针镇痛作用的影响

目的采用大鼠右足底注射完全弗氏佐剂(complete freund's adjuvant,CFA)建立大鼠慢性炎性痛模型,观察牛肾上腺髓质22肽(bovine adrenal medulla 22,BAM22)对CFA致大鼠慢性炎性痛和电针(electroacupuncture,EA)镇痛作用的影响。方法将42只脊髓鞘内插管成功的健康雄性SD大鼠右足底注射CFA建立大鼠慢性炎性痛模型,造模后将大鼠随机分为生理盐水组、BAM22组、BAM22+纳洛酮组、生理盐水+EA组、BAM22抗体组和BAM22抗体+EA组,每组7只。生理盐水+EA组和BAM22抗体+EA组均在造模24 h后开始介入电针治疗,电针刺激大鼠双侧足三里、昆仑穴,刺激参数为疏密波,频率2/100 Hz,刺激强度1 mA,时间30 min,每日1次,连续7 d;余组仅以相应固定,不予电针处理。造模后第7天,各组大鼠鞘内注射相应试剂。分别检测造模前和造模后24 h、6 d、7 d时大鼠右足的热缩腿潜伏期(thermal paw withdrawal latency,T-PWL)作为痛阈指标。结果 BAM22多肽、电针组均可明显延长大鼠患侧T-PWL,鞘内注射纳洛酮能部分阻断BAM22多肽对大鼠痛阈的影响;BAM22抗体也可明显反转电针的T-PWL延长效应。结论 BAM22多肽和电针均能显著抑制CFA大鼠慢性炎性痛,电针镇痛作用可能存在与BAM22多肽相关的非阿片机制。

鞘内注射牛肾上腺素髓质肽8-22对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射Mas相关基因受体C（MrgC）高选择性激动剂牛肾上腺素髓质8-22 （BAM8-22）对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3H/HeJ小鼠50只,8～ 10周龄,体重18～22 g,随机分为5组（n=10）：假手术Sham组（S组）、癌痛模型组BCP组：分为人工脑脊液对照组（B0组）和BAM8-22组（B1、B2、B3组）.BCP组（B0 ～ B3组）小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×105个NCTC 2472纤维肉瘤细胞的20μl α-MEM,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的20μl α-MEM.在接种肿瘤细胞后第14天S组和B0组鞘内注射5μl人工脑脊液,B1～B3组分别鞘内注射溶于人工脑脊液的BAM8-22 0.8 nmol/5μl、2.4 nmol/5μl、8.0 nmol/5μl,连续给药7d,1次/d.各组于首次给药前0.5h及每次给药后2h检测小鼠的自发抬足次数（NSF）、机械性缩足反射阈值（PWMT）.结果 与S组[（1.80±0.20）次、（1.87±0.22）g]比较,BCP组接种后7～21 d时NSF[（14.67±2.65）次]显著增多（P=0.000）,PWMT[（0.42±0.22）g]显著降低（P=0.002）;与B0组[（12.38±1.12）次、（0.48±0.22）g]及14 d给药前[（12.65±1.10）次、（0.46 ±0.19）g]比较,给药后2h,B2[（7.28 ±0.82）次、（1.01±0.13）g]和B3组[（4.18±1.02）次、（1.38±0.12）g]NSF显著减少（P=0.012、0.011、0.001、0.001）,PWMT显著增高（P=0.027、0.025、0.013、0.009）,且B3组比B2组对痛行为学的改善更显著（P =0.007、0.031）;B1组[（12.03±1.22）次、（0.51±0.16）g]给药后痛行为学无明显变化（P =0.096、0.074、0.527、0.474）.结论 鞘内注射BAM8-22能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.

激活脊髓MrgC受体抑制大鼠痛觉过敏

研究旨在探讨激活脊髓MrgC （Mas-related gene C）受体对痛觉过敏的作用及细胞学机制。在大鼠足底皮下注射（Tyr6）-γ2-MSH-6–12 （MSH）或完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant, CFA）形成痛觉过敏或炎性痛模型，通过缩足反射和免疫组织化学等方法观察鞘内给予MrgC受体特异性激动剂MSH或牛肾上腺髓质8-22肽（bovine adrenal medulla 8-22, BAM8-22）对痛觉过敏的影响。结果显示，鞘内给予MSH不影响正常大鼠对热伤害性刺激引起的缩足潜伏期变化，但能抑制足底注射MSH引起的急性痛觉敏感反应，还能降低CFA引起的痛觉过敏，鞘内给予μ阿片受体（μ-opioid receptor, MOR）拮抗剂CTAP （D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Arg-Thr-Pen-Thr-NH2）能阻止鞘内给予MSH的延迟抗痛觉过敏作用。鞘内给予BAM8-22能显著降低CFA引起的脊髓背角L3～L5节段一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS）阳性神经元数量和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）样免疫活性物质的表达。以上结果提示，鞘内激活MrgC受体通过抑制NOS阳性神经元活性和下调CGRP阳性产物表达来降低痛觉过敏，并能通过间接机制调制MOR起到延时持续抗痛觉过敏作用。因此，MrgC受体激动剂有望成为一类新型抗炎症痛觉过敏的药物。

间隔联合应用BAM8-22增强慢性吗啡抑制c-Fos表达的作用

通过观察腰段脊髓背角c-Fos阳性神经元数量变化,探讨鞘内间隔联合应用牛肾上腺髓质8-22肽（bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22）在福尔马林引起的持续性痛中对吗啡耐受的影响.结果显示,连续6 d应用吗啡导致耐受（吗啡耐受组）后,福尔马林诱发的c-Fos阳性神经元数量明显增加,与吗啡组相比,其脊髓Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ和Ⅴ-Ⅵ层c-Fos阳性神经元分别增加了164.9%、131.5%和125.3%（P〈0.05~0.01）;但隔天给予BAM8-22（吗啡＋BAM8-22组）则能明显增强慢性吗啡抑制c-Fos阳性神经元的表达,与吗啡耐受组相比,其脊髓Ⅰ-Ⅱ和Ⅴ-Ⅵ层c-Fos阳性神经元数量分别下降了66.6%和48.8%（P〈0.05~0.01）.在福尔马林引起的持续性痛中,BAM8-22延缓吗啡耐受是通过抑制脊髓背角伤害性神经元的活性来实现的。

BAM8-22对吗啡耐受的影响

采用缩足反射观察椎管内注射感觉神经元特异性受体(SNSR)激动剂牛肾上腺髓质8-22肽(BAM8-22)对吗啡耐受的影响.结果表明,椎管内注射BAM8-22(0.1nmol)后,吗啡抗伤害作用的半数有效剂量由耐受时的80.99μg恢复至12.38μg(P<0.001);隔天混合给予BAM8-22后,能显著延缓吗啡耐受,第6天吗啡抗伤害作用的半数有效剂量为14.84μg,与吗啡耐受组相比有极显著差异(P<0.001);但这两组动物吗啡的抗伤害作用没有达到正常吗啡组水平(P<0.05和P<0.01).连续椎管内单独注射BAM8-22 6d后,吗啡抗伤害作用的半数有效剂量为12.23μg,明显高于正常吗啡组(P<0.01),但又明显低于吗啡耐受组(P<0.001).而椎管内连续6d混合给予BAM8-22和吗啡,并不能阻止吗啡耐受.研究表明,椎管内注射BAM8-22能部分翻转或延缓吗啡的耐受,而BAM8-22的长期作用则会部分降低吗啡的抗伤害作用,提示感觉神经元特异性受体参与了阿片受体功能的调制.

电针对慢性炎性痛大鼠镇痛作用及机制研究

目的观察电针对慢性炎性痛大鼠镇痛作用及患侧背根神经节及脊髓背角Mas相关G蛋白偶联受体C(Mas-related G protein-coupled receptor C,Mrgpr C)的调节机制。方法健康雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为正常组、模型组、针刺组、电针组,每组10只。右后足底注射完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)0.1 m L建立慢性炎性痛模型,分别测量大鼠造模前及干预第1、3、5、7日及干预后患侧足缩腿阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)。采用免疫印迹法检测大鼠干预后患侧背根神经节和脊髓背角Mrgpr C表达,采用免疫组化法检测患侧脊髓背角牛肾上腺髓质22肽(bovine adrenal medulla 22,BAM22)含量。结果与正常组同期比较,模型组各时点PWTs降低(P<0.01)。与模型组同期比较,电针组干预第5日及干预后PWTs升高(P<0.05,P<0.01)。与针刺组同期比较,电针组干预后PWTs升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组患侧背根神经节Mrgpr C表达及患侧脊髓背角浅层BAM22阳性细胞率升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组患侧背根神经节Mrgpr C表达及患侧脊髓背角浅层BAM22阳性细胞率升高(P<0.05)。结论电针对CFA诱导的慢性炎性痛有良好的镇痛效应,其作用机制可能与其上调患侧背根神经节Mrgpr C表达和患侧脊髓背角BAM22含量相关。

激活SNSR受体削弱大鼠CFA炎症水肿的研究

观察椎管内注射感觉神经元特异性受体(sensory neuron-specific receptor,SNSR)的选择性激动剂牛肾上腺素髓质8-22肽(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22)或(Tyr6)-γ2-MSH-6-12(MSH)对完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)引起的大鼠足底水肿的影响.结果表明,BAM8-22和MSH能剂量依赖地削弱CFA炎症灶的水肿情况.椎管内给予BAM8-22(30 nmol)或MSH(15 nmol)后,足底水肿分别为160.2%和160.8%,均明显低于生理盐水组的178.2%(P<0.01).炎症灶组织切片显示,椎管内注射BAM8-22后,CFA炎性鼠足底炎症灶处水泡明显缩小,血管扩张程度下降,中性粒细胞和淋巴细胞渗出血管明显减少,真皮和皮下组织结构得到改善,骨骼肌结构得到一定程度的恢复.以上结果证明,激活SNSR受体能削弱炎症引起的水肿,提示激活SNSR受体可能成为消炎镇痛的一种新途径.