牛膝多糖调控转移相关蛋白1/核因子-κB通路对类风湿关节炎大鼠踝关节破坏的影响实验研究

目的:探究牛膝多糖对类风湿关节炎(RA)大鼠踝关节破坏的影响及可能机制。方法:将40只大鼠随机分为对照组、RA组、牛膝多糖组及低表达转移相关蛋白1(MTA1)组,每组10只。肉眼观察大鼠踝关节变化,进行关节炎评分。HE染色与番红O-固绿染色检测大鼠滑膜炎症、骨侵蚀和软骨损伤情况。免疫荧光染色检测大鼠滑膜组织MTA1、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测大鼠滑膜组织MTA1、NF-κB mRNA表达水平。Western blot检测大鼠滑膜组织MTA1、NF-κB蛋白表达水平。结果:与对照组比较,RA组大鼠踝关节增粗,关节炎评分增加且在21 d后显著升高,踝关节滑膜增生,滑膜炎症评分、骨侵蚀评分和软骨损伤评分升高,滑膜组织MTA1、NF-κB蛋白及mRNA表达水平增加(均P<0.05)。与RA组比较,牛膝多糖组大鼠踝关节变小,关节炎评分降低,踝关节滑膜厚度减少,滑膜炎症评分、骨侵蚀评分和软骨损伤评分降低,滑膜组织MTA1、NF-κB蛋白及mRNA表达水平减少(均P<0.05)。与RA组比较,低表达MTA1组大鼠滑膜组织MTA1、NF-κB蛋白表达减少,骨侵蚀评分减少(均P<0.05)。结论:牛膝多糖可通过下调MTA1/NF-κB通路改善RA大鼠踝关节破坏。

牛膝多糖对雏鸡免疫功能的影响

文章旨在研究牛膝多糖对雏鸡免疫功能的影响。试验将120只1日龄雏鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只鸡(公母各半)。在常规饲料中分别添加200、150、100、0 mg/kg牛膝多糖。所用雏鸡连续饲喂至30日龄,每组取10只进行取样。计算动物机体免疫器官指数,MTT检测T细胞增殖活性,Griess检测巨噬细胞释放NO能力,ELISA检测血清总IgG水平。结果表明,在雏鸡饲料中添加中剂量(150 mg/kg)的牛膝多糖能显著提高雏鸡免疫器官指数、T细胞增殖活性、巨噬细胞释放NO能力和血清总IgG水平(P<0.05)。结论:牛膝多糖在一定程度上对雏鸡的免疫功能具有增强作用,从而提高机体抗病能力,饲料中牛膝多糖最适添加量为150 mg/kg。

牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性

从中药牛膝中提取得到的一种新多糖化合物一牛膝多糖，用不同的硫酸化试剂合成牛膝多糖硫酸酯。研究了最佳反应条件，其产物水溶性好，呈中性，最高产率达８２．１１％，取代度（Ｄｓ）···达到三以上，硫含量达２１％以上。根据牛膝多糖的分子结构，多糖分子中的羟基已最大限度地被酯化。体外抗病毒试验初步表明牛膝多糖硫酸酯有很强的抑制乙型肝炎病毒ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的活性，对Ｉ型单纯性疱疹病毒也有明显的抑制力。

牛膝多糖对草鱼免疫和抗氧化功能的影响

为探讨在饲料中添加牛膝多糖(ABP)对草鱼免疫和抗氧化功能的影响,选取平均体重(88.13±0.76)g的健康草鱼375尾,随机分成5个处理,即基础饲料组、0.05%、0.10%、0.20%、0.40%ABP添加组,每个处理3个重复,每个重复25尾鱼,饲养65 d。结果表明,在饲料中添加ABP对草鱼头肾体指数影响不显著(P>0.05),对脾体指数影响显著(P<0.05),与对照组相比,0.05%、0.10%、0.20%和0.40%添加组脾体指数分别增加6.29%(P>0.05)、28.00%(P<0.05)、9.14%(P>0.05)和13.14%(P>0.05);血液中NBT阳性细胞数随着ABP添加量的增加呈增加的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05);在饲料中添加ABP对草鱼血清白蛋白、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)含量和过氧化氢酶活影响不显著(P>0.05),显著影响草鱼血清总蛋白(TP)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量(P<0.05)。与对照组相比,0.40%添加组的TP和AKP分别增加24.64%(P<0.05)和33.56%(P<0.05);0.20%、0.40%添加组的LZM活力分别增加34.97%(P<0.05)和31.21%(P<0.05),SOD活力分别增加27.28%(P<0.05)和22.41%(P<0.05);饲料中随着ABP添加剂量的增加,各组血清ACP活性先增加后缓慢下降,MDA含量先下降后上升。与对照组相比,0.20%、0.40%添加组ACP活性分别增加15.33%(P<0.05)和11.10%(P<0.05),0.05%、0.10%、0.20%及0.40%添加组MDA含量分别下降11.97%(P>0.05)、21.33%(P<0.05)、32.37%(P<0.05)和2.53%(P>0.05)。饲料中随着ABP添加量的增加,各组草鱼血清TNF-α含量变化规律不明显,但与对照组相比,0.20%添加组TNF-α含量显著增加(P<0.05)。综上所述,在草鱼基础日粮中添加适量牛膝多糖可以提高草鱼的免疫和抗氧化能力,建议添加量为0.20%。

枸杞多糖、牛膝多糖对H_2O_2诱导2BS细胞衰老的影响

目的:研究枸杞多糖(LBP)和牛膝多糖(ABP)对H2O2诱导2BS细胞衰老模型的影响。方法:应用MTT法测定细胞的增殖活性,检测衰老相关β半乳糖苷酶(SA—β—gal)染色情况,采用硫巴比妥酸(TBA)反应比色法测定细胞的丙二醛(MDA)水平,通过紫外分光光度法检测细胞的单胺氧化酶-B(MAO-B)活性,利用试剂盒检测细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:经H2O2处理后细胞形态出现衰老样改变,LBP和ABP均能提高经100μmol·L-1H2O2处理的2BS细胞的存活率,降低细胞的SA—β—gal染色阳性率以及MDA水平,抑制细胞的MAO-B活性,增强SOD活力。结论:以亚致死量H2O2处理年轻2BS细胞可以建立细胞衰老模型。LBP和ABP能够改善H2O2诱导的衰老模型细胞的某些表型,这可能与其抗氧化作用有关。

牛膝多糖对人胸腔巨噬细胞的激活作用

目的：研究牛膝多糖对巨噬细胞的激活作用。方法：０３１２ 、０６２５ 、１２５０ 、２５００ 和５０００ ｍｇｍｌ 牛膝多糖对体外培养的人胸腔巨噬细胞进行诱导培养２４ ｈ ，用全自动生化分析仪测定胸腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶与酸性磷酸酶活性，用放射免疫分析法测定胸腔巨噬细胞内肿瘤坏死因子α与白细胞介素６ 的含量。结果：牛膝多糖能上调胸腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性，并能显著诱导胸腔巨噬细胞表达肿瘤坏死因子α和白细胞介素６ ，而且对肿瘤坏死因子α的诱导表达具有显著的剂量效应。结论：牛膝多糖可诱导巨噬细胞表达细胞因子，并对巨噬细胞具有激活作用。

牛膝多糖研究进展

牛膝多糖是从中药牛膝的干燥根里分离得到的果聚糖,相对分子质量小,水溶性好,易被人体吸收,具有广谱的免疫调节活性。牛膝多糖经结构修饰(硫酸酯化,磷酸酯化,羧甲基化,羟甲基化)后得到的一系列的多糖衍生物显示出更高的活性或新的生理活性,具有广阔的药物开发及应用前景。现对牛膝多糖的结构、分离、药理活性、及其衍生化修饰等方面的最新研究进展进行综述。

川牛膝多糖的分离、纯化及单糖组成

采用水提醇沉法提取川牛膝多糖粗品GPC,经685弱碱阴离子交换柱层析和Bio-Gel P2凝胶柱层析进一步纯化,得到川牛膝多糖RCP(refined Cyathula officinalis Kuan polysaccharide).紫外扫描、高效液相色谱、聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳证明RCP为均一组分.质谱图显示RCP的分子量(Mr)主要分布在1000～2200.薄层正交试验确定了RCP完全水解的最优条件.薄层层析及高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)技术揭示,RCP单糖组成为D-果糖和D-葡萄糖.

川牛膝多糖的免疫活性研究

本文研究了川牛膝多糖对实验小鼠RES吞噬功能、PFC反应能力、淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果表明,川牛膝多糖能增强小鼠REC吞噬功能及PFC反应能力,能提高NK细胞杀伤活性,但对小鼠淋巴细胞转化率无显著影响。

川牛膝多糖硫酸酯的体外抗单纯疱疹病毒2型活性

从传统的川产道地中药材川牛膝中提取多糖RCP ,用氯磺酸 -吡啶法制备了它的硫酸酯衍生物S RCP .产物经红外鉴定 ,证实RCP硫酸酯化后羟基部分被硫酸基取代 ,在 12 5 0cm-1和 810cm-1处显示了硫酸基的特征吸收峰值 .w(S) =8.2 7% ,取代度Ds=0 .5 6 9.体外实验研究了RCP和S RCP对非洲绿猴肾细胞 (Verocellline)的细胞毒性和抗单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )的活性 .细胞病变效应法 (CPE)和MTT法结果表明RCP在 6 .0mg/mL以下 ,S RCP在 4 .0mg/mL以下均无细胞毒性 ,RCP本身无抗病毒活性 ,经硫酸酯衍生后的S RCP获得抗病毒活性 ,0 .2 5～ 4 .0mg/mL的S RCP能很好地抑制HSV 2引起的细胞病变 .以 0 .5mg/mL的无环鸟苷 (ACV)作为阳性对照 ,结果显示当S RCP浓度为2 .0mg/mL和 4 .0mg/mL时有显著的抗病毒作用 ,效果与阳性ACV相当 .图 1表 8参 2

牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤能力的影响

目的:研究牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗肿瘤能力的影响。方法:正常小鼠骨髓来源单个核细胞通过粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)体外诱导生成DC,细胞培养第3天加入3种质量浓度的牛膝多糖(200、300和400mg/L),第5天负载EC9706细胞制备的冻融抗原,流式细胞术检测DC表面CD86和CD11a的表达和成熟情况。提取培养第8天的DC和T淋巴细胞再混合培养3d,流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖分化情况及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对EC9706细胞的杀伤活性。以上均以生理盐水培养作为对照组,各组均设4个复孔。结果:与生理盐水组相比,低中剂量牛膝多糖在有异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓来源DC的分化、成熟及表面标记CD86(F=9.788,P=0.012)、CD11a(F=10.220,P=0.016)的表达,增加DC致敏的T淋巴细胞增殖指数(F=9.807,P=0.012),DC诱导的CTL对EC9706细胞的杀伤活性增强(F=9.923,P=0.015),且在一定范围内存在量效关系。400mg/L的牛膝多糖可使这些方面的效应明显降低。结论:适当质量浓度的牛膝多糖能够提高DC的抗原递呈能力,进而提高DC的抗肿瘤作用。

川牛膝多糖对衰老小鼠模型的体内抗氧化作用

目的探讨川产道地中药材川牛膝多糖(RCPs)对衰老小鼠模型的体内抗氧化作用。方法采用D-半乳糖注射诱导衰老模型,同时给予RCPs或维生素C(Vc),连续处理42日后检测小鼠肝脏、心脏、脑组织抗氧化指标。结果与模型组相比,灌胃RCPs或Vc均显著增加小鼠脾脏和肝脏指数(P<0.05);增强肝、心、脑总抗氧化能力(T-AOC)、超氧阴离子及羟自由基清除能力(P<0.05);提高肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性(P<0.05),心脏GSHPx和CAT活性(P<0.05),脑T-SOD及GSH-Px活性(P<0.05);降低肝、心、脑丙二醛(MDA)含量(P<0.05);上调肝、心、脑Cu,Zn-SOD、Mn-SOD、GSH-Px及肝、心CAT mRNA表达水平(P<0.05)。结论川牛膝多糖具有和Vc相当甚至更强的体内抗氧化活性,可作为一种优良的天然抗氧化剂来源。

川牛膝多糖的体外免疫活性研究

通过体外细胞毒性检测、小鼠脾淋巴细胞增殖实验、NK细胞活性测定以及腹腔巨噬细胞吞噬中性红等实验,对川牛膝多糖的免疫活性进行了研究.研究结果表明,川牛膝多糖体外在10～300μg/mL浓度范围内对细胞不具有直接毒性作用,能够促进B淋巴细胞增殖(P<0.01),增强小鼠NK细胞活性(P<0.05)和腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性(P<0.01),且随多糖浓度增高而增强;但对T淋巴细胞的增殖无促进作用(P>0.05).因此,川牛膝多糖既具有体液免疫功能,又能提高NK细胞活性和小鼠巨噬细胞的吞噬能力,表明其免疫活性广泛.

纤维素酶法提取川牛膝多糖

以得率为评价指标,采用纤维素酶提取川牛膝多糖。对药材粒径、酶的用量、酶解温度、酶解时间、溶剂p H、液固比和提取时间等因素进行了考察,结合正交试验设计,得到最佳工艺条件：药材粒径550～830μm、酶用量4 mg/g、酶解温度50℃、酶解时间90 min、溶剂p H5.0、液固比60（m L/g）和提取时间30 min,发现在此条件下,川牛膝多糖得率为71.70%。

牛膝多糖衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IL-2和TNF-α的影响

目的研究牛膝多糖硫酸酯(S-AbP)和磷酸酯(P-AbP)衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IL-2和TNF-α的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测淋巴细胞增殖,ELISA法测定培养上清液中IL-2和TNF-α的含量。结果S-AbP和P-AbP均能剂量依赖性地促进小鼠脾淋巴细胞增殖,S-AbP和P-AbP的促增殖活性较AbP强。P-AbP显著诱导脾淋巴细胞分泌TNF-α,对IL-2的分泌无明显影响。S-AbP能诱生较高含量的IL-2,而对TNF-α的分泌无明显影响。结论S-AbP和P-AbP较牛膝多糖能更有效地促进淋巴细胞增殖,还可以分别通过IL-2和TNF-α发挥免疫调节作用。

牛膝多糖对脂多糖免疫应激仔猪血液生化指标和白细胞分类计数的影响

试验旨在探讨牛膝多糖(ABPS)对脂多糖(LPS)刺激的断奶仔猪血液生化指标和白细胞分类计数的影响。选用48头(28±3)d、体重(8.45±0.14)kg的杜洛克×长白×大白断奶仔猪,采用2×2因子设计,两个因子分别为不同日粮处理(0或500mg/kgABPS)和免疫应激(注射LPS或生理盐水)。试验期28d。在第14天和第21天,每日粮组的一半猪注射100μg/kgBW的LPS,另一半注射生理盐水作对照。注射后3h,采血测定血液生化指标,并进行白细胞分类计数。结果表明:LPS刺激提高了第14天和第21天血清中碱性磷酸酶、谷草转氨酶(GOT)的活性及谷草转氨酶与谷丙转氨酶的比值(P<0.05),并降低了第21天血清总蛋白和白蛋白的含量(P<0.05);ABPS提高了第14天血清总蛋白和球蛋白的含量(P<0.05)。在第14天,LPS刺激降低了白细胞、淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的含量及单核细胞比例(P<0.001)。在第21天,LPS刺激降低了白细胞、淋巴细胞的含量及比例,而提高了中性粒细胞比例(P<0.001)。ABPS提高了白细胞(14d:P<0.10)和中性粒细胞(14d:P<0.05;21d:P<0.05)的含量及中性粒细胞比例(14d:P<0.05;21d:P<0.10),降低了淋巴细胞比例(14d:P<0.05;21d:P<0.10)。结果提示,LPS可引起仔猪血液生化指标和白细胞分类计数发生显著变化,ABPS在一定程度可缓解上述现象,表现出一定的改善免疫和缓解炎症的作用。

牛膝多糖对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1 mRNA表达的影响

本文旨在探讨牛膝多糖(ABPS)对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1(PG-1)mRNA表达的影响。试验采用单因子设计,按照日粮处理因素不同,设对照组、抗生素组、0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组,共5个处理。选用28日龄杜长大仔猪160头,随机分入5个处理,每个处理4个重复,每个重复8头猪(公母各半)。采用半定量RT-PCR法,以18SrRNA为内标,检测PG-1mRNA相对表达量。结果表明:日粮中添加牛膝多糖均不同程度地促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA的表达。与对照组相比,0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组分别使断奶仔猪PG-1mRNA的相对表达量增加14.9%(P>0.05)、36.4%(P<0.05)和7.3%(P<0.05);与抗生素组相比,其PG-1mRNA的相对表达量分别增加7.8%(P>0.05)、27.9%(P>0.05)和19.4%(P>0.05)。即牛膝多糖能显著促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA表达,且日粮中以0.10%添加量为适宜。

牛膝多糖对抗原诱导的肥大细胞活化的影响

目的观察牛膝多糖(achyranthes bidentata polysaccha-rides,ABPS)对肥大细胞活化脱颗粒的影响。方法运用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,用比色测定法检测ABPS在体内对肥大细胞(MC)影响;体外实验将ABPS分为高、中、低3个剂量组,然后分别将其加入抗原致敏的RBL-2H3细胞中(大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞,国际公认的MC研究模型细胞),观察ABPS对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响。结果ABPS能明显抑制大鼠PCA、RBL-2H3细胞脱颗粒,并能抑制RBL-2H3细胞释放组胺、肿瘤坏死因子α及白细胞介素4;抑制RBL-2H3细胞中Akt和p38的磷酸化。结论ABPS的抗过敏作用与抑制肥大细胞的脱颗粒及炎性物质释放有关;ABPS抑制肥大细胞的活化与抑制Akt和p38的活性相关。

牛膝多糖的化学研究

我国传统的中草药牛膝经沸水提取,去游离蛋白质,透析,沉淀,依次进行Cellex D和Sephadex G-150柱层析,得到有免疫活性的肽多糖ABAB,分子量2.3×10~4。是由D-葡萄糖酸,D-半乳糖,D-半乳糖酸,L-阿拉伯糖和L-鼠李糖组成,摩尔比为12:2:3:1:1。经羧基还原,甲基化反应,过碘酸盐氧化,Smith降解,IR分析,证明它有(1→4)-D-葡萄糖酸和(1→4)-D-半乳糖酸残基组成的主链。ABAB中肽的含量为24.7％,主要有甘氨酸,谷氨酸,门冬氨酸和丝氨酸组成。

牛膝多糖对仔猪肠道微生物及小肠黏膜形态的影响

选用28日龄、体重相近(8.898±0.742)kg,健康的DLY(杜洛克×长白×大白)断奶仔猪160头,随机分为5个组,采取单因子试验设计,对照组、试验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组分别饲喂添加0,0.01%抗生素,0.05%牛膝多糖、0.1%牛膝多糖、0.15%牛膝多糖的试验日粮,试验期28 d.每个处理4个重复,每个重复8头猪.结果表明:试验组在抑制肠道大肠杆菌和促进肠道双歧杆菌、乳酸杆菌的增殖效果明显好于对照组(P<0.05或P<0.01);牛膝多糖试验组在抑制肠道大肠杆菌和促进肠道有益菌方面达到或显著好于添加抗生素试验组;随着牛膝多糖添加量的增加,其抑制肠道大肠杆菌和促进肠道有益菌的效果逐渐提高,Ⅱ和Ⅳ组之间差异显著或极显著(P>0.05,P<0.05或P<0.01).各试验组之间的十二指肠段上皮细胞层厚度无显著性差异;试验Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组随着牛膝多糖添加量的增加,回肠段和空肠段的上皮细胞层厚度增加,显著或极显著大于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,试验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组显著增加肠绒毛高度和降低隐窝深度(P<0.05或P<0.01);试验Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组在增加十二指肠段肠绒毛高度和降低隐窝深度方面明显好于试验Ⅰ组(P<0.05或P<0.01);各试验组回肠和空肠的隐窝深度之间没有显著性差异;试验Ⅲ和Ⅳ组间小肠黏膜形态没有显著性差异.