牛膝中牛膝甾酮25位异构体构型的确定及其抗肿瘤活性的研究

目的牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)中牛膝甾酮 2 5位异构体的分离、鉴定、构型确定以及肿瘤抑制活性的测定。方法利用硅胶吸附柱色谱和HPLC法进行分离 ,利用理化性质和波谱分析对化合物进行鉴定 ;利用体外实验法测定其活性。结果 2个非对映异构体化合物分别鉴定为 2 5 R牛膝甾酮 (2 5 Rinokosterone ,1)和 2 5 S牛膝甾酮 (2 5 Sinokosteone ,2 )。化合物 1具有一定的肿瘤抑制活性。结论 2个化合物均为首次从牛膝中分离得到 ,首次确定了其绝对构型 ,并首次对牛膝甾酮 2个 2 5位异构体进行了1H NMR、13 C NMR数据归属。牛膝中发挥肿瘤抑制作用的成分主要应为皂苷类成分。

牛膝甾酮25位差向异构体的分离与鉴定

目的 分离并确定苋科植物怀牛膝 (AchyranthesbidentataBlume .)中牛膝甾酮 2 5位差向异构体的结构。方法 利用色谱技术分离纯化牛膝甾酮 2 5位差向异构体 ,用波谱 (IR ,UV ,MS ,NMR)方法及化学方法确定结构。结果 从怀牛膝的乙酸乙酯部位分离得到 3个化合物 ,分别鉴定为 2 5S 牛膝甾酮 (1,2 5S inokosterone) ,2 5R 牛膝甾酮 (2 ,2 5R inokosterone) ,β 蜕皮甾酮 (3,ecdysterone)。 结论 化合物 1和 2为首次从怀牛膝中分离得到的 2 5位差向异构体 ,首次确定了 2 5位绝对构型和发表该 2 5位差向异构体的1 3CNMR数据。

不同盐制方法对牛膝中有效成分含量的影响

目的:比较盐粒拌炒和盐水炙牛膝2种不同方法对牛膝中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮含量的影响,为牛膝盐制工艺研究提供参考。方法:采用HPLC测定β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮的含量,流动相乙腈-水-甲酸(16∶84∶0.1),检测波长250 nm。以牛膝生品为参考,考察2种盐制方法对牛膝中指标成分含量的影响。结果:盐水炙样品中以每100 g牛膝加食盐1 g,在150~180℃下炒制15 min的含量最高,盐粒拌炒样品以每100 g牛膝加食盐2 g,150~180℃炒制4 min的含量最高。盐水炙样品中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮,25S-牛膝甾酮质量分数均以3号样品为最高,分别为0.083%,0.015 7%,0.010%;盐粒拌炒样品中三者的最高质量分数分别为0.100%,0.019 1%,0.012 3%。结论:盐粒拌炒牛膝的样品中3种甾酮类成分的含量均大于生品和盐水炙牛膝的样品,2种不同盐制方法对牛膝中有效成分均有影响,为牛膝盐制工艺的确定提供参考。

HPLC法同时测定怀牛膝中5个成分的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长250 nm(β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮)和203 nm(人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa)。结果:5个分析物分离良好,β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa进样量分别在0.218~2.725μg(r=0.999 8)、0.080~0.995μg(r=0.999 9)、0.155~1.935μg(r=0.999 9)、0.352~4.400μg(r=0.999 8)和0.338~4.225μg(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为98.3%、101.5%、98.4%、99.3%和101.4%,相应的RSD分别为0.89%、0.93%、1.4%、0.69%和1.3%;16批不同产地的怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量范围分别为0.032%~0.074%、0.008%~0.017%、0.008%~0.017%、0.044%~0.107%和0.047%~0.103%。结论:本方法可作为评价怀牛膝质量的方法。

HPLC法测定参乌益肾片中8种成分及其化学计量学综合评价

目的建立HPLC法同时测定参乌益肾片中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、大车前苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷8种成分,联合化学计量学方法对参乌益肾片的产品质量进行综合评价。方法采用Sepax Bio-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈–0.1%甲酸进行梯度洗脱;检测波长分别为250 nm(0~20 min测定β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮)、330 nm(20~60 min测定大车前苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷);柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样量10μL。采用聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法–判别分析法对8种指标成分检测结果相关性进行分析评价。结果β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、大车前苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷分别在1.47~36.75、0.66~16.50、0.74~18.50、5.80~145.00、15.77~394.25、4.58~114.50、1.29~32.25、8.78~219.50μg/mL有良好的线性关系;平均回收率分别为97.78%、96.90%、97.96%、99.67%、100.01%、99.54%、98.03%、100.11%,RSD值分别为1.17%、0.82%、1.48%、0.93%、0.77%、0.69%、1.13%、0.65%。成分8(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷VIP=1.503)、成分4(大车前苷AVIP=1.404)、成分5(毛蕊花糖苷VIP=1.274)、成分1(β-蜕皮甾酮VIP=1.030)是影响参乌益肾片样品质量的关键成分。结论建立的方法简便快捷、准确可靠,可用于参乌益肾片中多指标成分的质量综合评价模式。