中药怀牛膝醇提物有效单体成分的定性定量研究

目的:基于现代检测技术对怀牛膝有效制剂——牛膝醇提物的单体成分进行定性定量分析。方法:将怀牛膝醇提物液体制剂按照检测进样要求分别制备成烘干物和液体物,再应用核磁共振波谱(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)、气相色谱质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)、顶空-气相色谱质谱联用(Headspace-Gas Chromatography-Mass Spectrometry,HS-GCMS)、液相色谱质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)、三重串联四极杆液相质谱联用(Triple Series Quadrupole Liquid Mass Spectrometry,LC-MSMS)等技术对牛膝醇提物的化学成分进行鉴定分析。结果:共检测出23个单体成分,包括糖类1个,类黄酮类1个,黄酮类1个,甾酮类1个,三萜类1个,氨基酸类16个,果酸类2个,其中槲皮素含量为0.0021%,β-蜕皮甾酮含量为0.0210%,齐墩果酸含量为0.00017%,并根据分子片段信息预测出了4’,5,6,7-四甲氧基黄酮成分。结论:本实验为怀牛膝醇提物制剂的临床应用提供了有效单体成分参考,为进一步对其单体物质的“药物-疾病-靶点”进行验证研究和开发应用提供依据。

牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白组学分析

背景:前期研究发现牛膝醇提物具有诱导骨髓间充质干细胞定向软骨细胞分化的作用,但具体作用蛋白靶点和网络机制不详。目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白质组学分析及蛋白质相互作用网络构建。方法:采用密度梯度离心联合细胞贴壁法分离培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,取第3代细胞随机分成5组:空白组、对照组、牛膝醇提物低、中、高剂量组,连续成软骨诱导培养21 d后,用qRT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达及甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞形成,应用绝对定量同位素标记(iTRAQ)结合双向液相色谱-串联质谱(2DLC-MS/MS)技术对各组差异表达蛋白质进行鉴定,并对差异蛋白进行GO分析、KEGG分析及蛋白质网络相互作用分析。结果与结论:(1)qRT-PCR结果显示牛膝醇提物高剂量组较其他组Ⅱ型胶原mRNA表达明显增高(P<0.05),牛膝醇提物高剂量组甲苯胺蓝染色阳性,蛋白组学分析共鉴定到1354个差异蛋白点,上调蛋白633个,下调蛋白721个。(2)根据qRT-PCR结果对空白组、牛膝醇提物高剂量组、对照组3组差异表达蛋白进行生物信息分析。GO分析发现这些差异表达蛋白参与代谢、细胞分化、细胞周期与凋亡、炎症反应、免疫调控、氧化应激、磷酸化、泛素化、癌相关等;KEGG分析获得与骨关节病最相关的10个典型信号通路:白细胞介素17信号通路,Toll样受体信号通路,Wnt信号通路,PI3K-Akt信号通路,mTOR信号通路,Jak-STAT信号通路,NF-kappa B信号通路,MAPK信号通路,AMPK信号通路,HIF-1信号通路;根据组间差异蛋白,使用Cytoscape3.6.0软件成功构建蛋白互作网络图。(3)结果表明,牛膝醇提物可以通过调控氧化、细胞周期与凋亡、细胞结构改变、细胞分化、代谢及炎症损伤等环节诱导兔骨髓间充质干细胞成软骨分化,具有多靶点、多中心的网络调控作用,其具体作用机制有待进一步研究。

牛膝醇提物经皮透入治疗骨质疏松症的临床研究

目的:观察牛膝醇提物经皮透入治疗骨质疏松症的临床疗效。方法:选取2019年10月—2021年10月深圳市罗湖区中医院收治的经中医辨证分型属肾虚血瘀型诊断为原发性骨质疏松的患者60例,按就诊先后次序随机分为两组:治疗组30例,应用牛膝醇提物经皮透入加碳酸钙D3片口服治疗;对照组30例,单纯应用碳酸钙D3片口服治疗。比较两组患者不同治疗时间节点的骨密度(BMD)、腰椎T值、髋部T值以及Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)、骨钙素(BGP)、骨特异性碱性磷酸酶(BLAP)等骨代谢指标。结果:治疗前,两组BMD、腰椎T值、髋部T值、PINP、BGP、BLAP差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后6、12个月,治疗组的BMD、腰椎T值、髋部T值、PINP、BGP、BLAP与治疗前差异有统计学意义(P<0.01),对照组上述指标与治疗前差异无统计学意义(P>0.05);治疗组与对照组的上述指标差异有统计学意义(P<0.01)。结论:牛膝醇提物经皮透入治疗骨质疏松症对比单纯西药治疗具有更好的临床疗效,值得在临床进一步推广应用。

牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及糖胺聚糖的干预作用

目的观察牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及对糖胺聚糖(GAG)形成的影响。方法骨关节炎造模成功后提取、分离兔骨关节炎软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将软骨细胞接种于5组:空白对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组、经典软骨增殖组。倒置相差显微镜观察软骨细胞形态,用CCK-8法检测软骨细胞增殖率,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,q RT-PCR检测软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA表达水平,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量。结果牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白对照组比较Ⅱ型胶原蛋白荧光明显阳性表达;牛膝醇提物高、中剂量组与空白对照组比较软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA明显增加(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P<0.01),与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白对照组GAG含量与经典软骨增殖组及不同剂量牛膝醇提物组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组GAG最多(P<0.01),牛膝醇提物高剂量组与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛膝醇提物中药含药血清可促进体外软骨细胞的增殖和蛋白合成,具体作用机制有待进一步探讨。

牛膝醇提物对兔骨关节炎模型的疗效比较

目的比较牛膝醇提物(AEAB)与硫酸氨基葡萄糖和双醋瑞因对于兔骨关节炎(OA)的疗效。方法将35只实验兔采用随机区组分组法分为正常组、模型组、AEAB组、硫酸氨基葡萄糖组和双醋瑞因组,每组7只。石膏固定制动6周制备OA模型,造模后,分别以蒸馏水、AEAB、硫酸氨基葡萄糖及双醋瑞因灌胃,正常组不予处理,6周后处死实验兔,取软骨标本进行大体观察、Pelletier评分、Mankin评分,用免疫组化测定软骨Ⅱ型胶原蛋白含量,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。结果 AEAB组、硫酸氨基葡萄糖组和双醋瑞因组Pelletier评分、Mankin评分、Ⅱ型胶原蛋白含量、血清和关节液中TNF-α、IL-1β以及MMP-3的含量分别与正常组、模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);AEAB组与硫酸氨基葡萄糖组及双醋瑞因组比较,上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 AEAB可以促进兔OA模型的软骨修复,其疗效与硫酸氨基葡萄糖及双醋瑞因相当,具有较高的临床应用价值。

牛膝醇提物对佐剂性关节炎模型大鼠滑膜病理的影响

目的观察牛膝醇提物(alcohol extractive of Achyranthis Bidentatae,AEAB)对佐剂性关节炎(AdjuvantArthritis,AA)大鼠的治疗作用及对关节滑膜病理的影响。方法20只大鼠随机分为正常对照组、AA模型组、雷公藤多甙(Tripterygium Wilfordii Hook F,TWH)治疗组和AEAB治疗组。除正常组外,用氟氏完全佐剂(Freund's CompleteAdjuvant,FCA)0.2ml诱发关节炎,以TWH为阳性对照药,用AEAB灌胃治疗,观察各组大鼠足跖关节肿胀度、关节炎症指数(AI)及滑膜病理变化。结果TWH和AEAB治疗组关节肿胀度、AI均低于模型组;滑膜病理学较模型组明显改善。结论AEAB能显著减轻AA大鼠关节肿胀,降低AI,能有效抑制关节滑膜增生。

牛膝醇提物对实验兔膝骨关节炎模型AMPK/Wnt/MAPK信号通路串话的影响

目的:探究牛膝醇提物对实验兔膝骨关节炎(OA)模型AMPK/Wnt/MAPK信号通路串话的影响。方法:将64只实验兔按照随机数字表法分为造模组50只、空白对照组(未造模)14只,造模6周后,从造模组和空白对照组各随机取2只实验兔进行OA模型验证;造模成功后,将造模组48只实验兔随机分为模型对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组,每组12只。各组连续灌胃给药6周后,HE染色法观察软骨组织及病理学改良Mankin’s评分;免疫组化检测膝关节软骨AMPK、ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达变化;Western blotting检测关节软骨AMPK、ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达情况。根据https://string-db.org/蛋白互作网址预测牛膝醇提物对AMPK/Wnt/MAPK信号通路关键蛋白互作网络机制图。结果:HE染色提示模型对照组血管入侵潮线结构、软骨细胞数量明显减少,软骨细胞排列纹理、基质染色变浅,牛膝醇提物低、中、高剂量组局部软骨表面可见不规则裂隙,达钙化层,软骨细胞数量增多,基质染色呈浅红色,潮线结构稍正常。病理学改良Mankin’s评分显示,模型对照组改良Mankin’s评分高于空白对照组(P<0.01),牛膝醇提物低、中、高剂量改良Mankin’s评分低于模型对照组(P<0.05)。免疫组化和Western blotting检测显示,模型对照组兔膝关节软骨ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.05),AMPK蛋白表达与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);牛膝醇提物低、中、高剂量组兔膝关节软骨ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达明显低于模型对照组(P<0.05);牛膝醇提物高剂量组兔膝关节软骨AMPK蛋白表达明显高于模型对照组(P<0.05),牛膝醇提物低、中剂量组兔膝关节软骨AMPK蛋白表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。String蛋白互作预测图显示Akt家族蛋白节点最多,Mapk家族蛋白节点次之。结论:牛膝醇提物能改善兔膝骨关节炎模型病理评分,其中牛膝醇提物高剂量组能有效上调AMPK蛋白表达,下调ERK、JNK、p38、COX-2、β-Catenin蛋白表达;Akt家族蛋白、Mapk家族蛋白在牛膝醇提物对AMPK/Wnt/MAPK信号通路网络互作之间的联系起到了关键桥接蛋白作用,其作用机理有待进一步研究。

牛膝醇提物对肾脏转移生长因子蛋白表达的影响

目的:探讨牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏转移生长因子(TGF-β1)的影响。方法:将40只SHR随机分为5组:空白组、牛膝醇提物高、中、低剂量组、依那普力组,每组8只。8周后,摘取肾脏,检测大鼠肾脏转移生长因子的蛋白表达。结果:川牛膝醇提物随着剂量的升高,可明显降低肾组织细胞中TGF-β1蛋白的表达,并且川牛膝醇提物高剂量组的作用与依那普利组比较无显著差异。结论:川牛膝醇提物具有抑制转化生长因子生成的作用,通过减少肾组织的纤维化,可能降低TGF-β1对肾小球细胞的刺激,减少肾素的释放,减少血管紧张素Ⅱ的生成,从而使血管舒张,血压下降。

牛膝醇提物干预BMSC-Exos对OA模型兔局部骨组织超微结构及炎症小体的影响

目的:观察牛膝醇提物含药血清培养的骨髓间充质干细胞来源外泌体对实验兔骨关节炎模型关节局部骨组织超微结构及炎症小体的影响。方法:将20只健康实验兔按照随机数字表法分为空白组、模型组及牛膝醇提物低、中、高剂量组,每组4只,分别予等量蒸馏水及牛膝醇提物低、中、高剂量灌胃1周后采血制备含药血清,用牛膝醇提物不同浓度含药血清连续培养骨髓间充质干细胞7 d,在第7天时从骨髓间充质干细胞上清液中提取外泌体,再将外泌体通过关节穿刺的方法注射到不同组别兔膝骨关节炎模型内,1次/周,连用3周,注射第6周后进行膝关节软骨组织病理HE染色、关节活动度评分及关节粘连改善度评分,用microCT检测膝关节局部周围骨组织超微结构及骨量,采用qRT-PCR检测滑膜组织中炎症小体关键分子NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA表达水平。结果:实验兔膝关节腔注射外泌体后第6周,与模型组比较,低、中、高剂量组兔膝关节活动度和粘连改善度评分均明显升高(P<0.01),且与剂量呈正相关。模型组兔膝关节软骨基质染色变浅,软骨细胞数量明显减少,关节面凹凸不平,血管入侵潮线结构;低、中、高剂量组兔膝关节软骨基质染色逐渐恢复正常,软骨细胞数量较模型组增多,软骨细胞呈卵圆形,关节面恢复平整,潮线结构依次恢复正常。microCT检测提示,与模型组比较,低、中、高剂量组兔膝关节的Mean、BMD、Conn.Dn.、BV/TV均明显升高(P<0.05),BS均明显降低(P<0.05),而BS/BV、BS/TV、Tb.N、Tb.Sp、DA组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05),其中Mean、BMD、Conn.Dn.、BV/TV、BS与剂量呈相关性。qRT-PCR检测结果显示,模型组兔滑膜组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显高于空白组(P<0.01),低、中、高剂量组兔滑膜组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显低于模型组(P<0.05),且与剂量呈正相关。结论:牛膝醇提物能改善OA模型兔局部骨组织骨含量及骨微结构,能降低炎症小体通路关键分子NLRP3 mRNA、Caspase-1mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA表达。

川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠血压及血管紧张素转换酶表达的影响

目的:探讨川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用以及对SHR肾脏的血管紧张素转换酶(ACE)表达的影响。方法:将40只SHR随机分为5组采用尾动脉测压法测量给药前及给药后4、8周SHR收缩压,于给药8周后,检测肾脏的血管紧张素转换酶(ACE)的表达水平。结果:给药8周后,川牛膝醇提物明显降低了SHR的血压,其中高剂量组的降压幅度与依那普利组比较无显著性差异,但中、低剂量组与依那普利组仍有显著性差异,同时川牛膝各组均能降低大鼠肾脏血管紧张素转换酶(ACE)的表达。结论:川牛膝醇提物的降压作用与降低肾脏的血管紧张素转换酶(ACE)的表达水平有关。

基于多组学整合分析牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的生物网络机制研究

目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)软骨分化的多组学生物网络机制。方法:将12只实验兔随机分为空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,每组4只,制备含药血清。再用密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,取P3代细胞随机分成3组:空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,用不同组别含药血清连续诱导培养21 d后,用同位素标记相对和绝对定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification,iTRAQ)结合双向液相色谱-串联质谱技术测定不同组别差异表达蛋白质,用转录组测序筛选不同组别差异表达基因。采用生物信息学进行三组整合韦恩分析、基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及网络拓扑学分析,并构建生物网络蛋白质-蛋白质相互作用图。结果:韦恩分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共有14个蛋白/基因,阳性对照组vs.空白组共有48个蛋白/基因,阳性对照组vs.牛膝醇提物组共有25个蛋白/基因;富集分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共富集到7个GO功能或KEGG通路,阳性对照组vs.空白组共富集到21个GO功能或KEGG通路,阳性对照组vs.牛膝醇提物组共富集到10个GO功能或KEGG通路;网络拓扑学分析显示在网络中节点3种网络拓扑性质计算得分Top10的节点基因方面,牛膝醇提物组vs.空白组是ISG15、HSPA5、HYOU1、HSP90B1、ERO1A、MANF、SLC3A2、DDX58、PRKRA、RAB39B,阳性对照组vs.空白组是HSPA5、HSP90B1、PDIA4、CTSB、VCL、LDHA、HYOU1、PHGDH、LGALS3、TFRC,阳性对照组vs.牛膝醇提物组是LGALS3、CTSB、FABP4、ANPEP、HP、ACAN、CD9、TFRC、LCP1、NID2。结论:牛膝醇提物诱导兔BMSCs成软骨分化具有多靶点、多中心的网络调控作用,其具体的作用机制有待进一步验证研究。

牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨牛膝醇提物对软骨细胞的保护作用。方法取膝骨关节炎行膝关节置换患者及因严重创伤需截肢患者的膝关节软骨,进行膝关节软骨细胞原代培养,不同剂量的牛膝醇提物含药血清作用于软骨细胞,镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定细胞,运用CCK-8试剂盒测软骨细胞增殖活力,流式细胞术测定软骨细胞周期及凋亡率。结果镜下观察模型组细胞较正常组细胞生长缓慢;甲苯胺蓝染色显示,模型组异染颗粒较正常组少;与正常组比较,模型对照组细胞活力减弱、G0/G1期比例增加、S期细胞比例下降、G2/M期比例上升、细胞凋亡率增加(P<0.01);与模型对照组比较,牛膝醇提物不同剂量组细胞增殖活力增强、G 0/G 1期比例降低、S期细胞比例增加、细胞凋亡率降低(P<0.05),且高剂量组作用显著(P<0.01)。结论牛膝醇提物通过增加人膝骨关节炎软骨细胞的增殖活力、降低细胞生长阻滞、增加细胞DNA合成、减少细胞凋亡来促进软骨细胞的生长,对人膝骨关节炎软骨细胞具有保护作用。

川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠血压、心肌ACE活性及心肌细胞直径影响的研究

目的:探讨川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用以及对SHR心肌ACE活性、心肌细胞直径的影响。方法:将40只SHR大鼠随机分为5组:空白对照组,川牛膝醇提物高、中、低剂量组,依那普利组,每组8只。采用尾动脉测压法测量给药前及给药后2,4,6,8周SHR收缩压,在给药8周后,观测心肌ACE活性、心肌细胞直径的变化。结果:给药8周后,川牛膝醇提物明显降低了SHR血压,其中高剂量组的降压幅度与依那普利组比较无显著性差异,但中、低剂量组与依那普利组有显著性差异。同时川牛膝各组均能降低心肌ACE活性、影响心肌细胞直径。结论:川牛膝醇提物的降压作用与降低心肌ACE活性、影响心肌细胞直径有关。

川牛膝醇提物对SHR大鼠血浆PGI_2浓度影响

目的:探讨川牛膝醇提物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用以及对大鼠血浆前列环素(PGI2)的影响。方法:将40只SHR随机分为5组,采用尾动脉测压法测量给药前及给药后2、4、6、8周大鼠收缩压,采用放免法检测PGI2。结果:给药8周后,川牛膝醇提物明显降低了自发性高血压大鼠的血压,其中高剂量组的降压幅度与卡托普利组比较无显著性差异,并且与空白组比较,依那普利组和川牛膝醇提物高剂量组的PGI2浓度均与之有显著差别,P<0.05;与依那普利组比较,空白组和川牛膝醇提物中、低剂量组PGI2浓度均有明显差异,P(0.05,而高剂量组与之没有差异P>0.05。结论:牛膝醇提物具有较强的降压作用和明显促进血浆PGI2合成的作用。

牛膝醇提物离子导入治疗膝骨关节炎(肝肾亏虚)的临床观察

目的:观察牛膝醇提物离子导入治疗膝骨关节炎的临床疗效。方法:采用随机对照研究方式,将93例单膝骨性关节炎患者分为治疗组和对照组,其中治疗组以牛膝醇提物离子导入治疗,对照组以直流电常规治疗进行对比。结果:两组患者治疗后VAS评分、WOMAC评分与治疗前比较均有下降,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组能更有效的降低疼痛程度及改善关节活动功能。结论:牛膝醇提物离子导入治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎疗效显著,值得临床推广应用。

牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨定向分化的实验研究

目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨定分化的作用。方法:密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养新西兰大白兔BMSCs,取P3代细胞随机分成5组(空白组、完全诱导组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组),连续诱导培养21d,倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,qRT-PCR检测软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达情况,Western Blot检测Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白组相比Ⅱ型胶原蛋白荧光阳性表达明显;牛膝醇提物高、中剂量组与空白组相比软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原明显增加(P<0.05),Western Blot验证Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达明显(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P<0.01),与完全诱导组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:牛膝醇提物能够诱导兔BMSCs成软骨分化,其具体作用机制有待进一步研究。

牛膝醇提物透入疗法对膝骨性关节炎的疗效观察

目的:验证牛膝醇提物透入疗法对膝骨性关节炎的临床疗效。方法:采用随机对照研究方式,选择70例单膝骨性关节炎患者,治疗组40例采用牛膝醇提物透药入治疗,对照组30例采用正清风痛宁注射液透入治疗,连续治疗3周,观察、比较两组治疗前后波士顿利兹骨关节炎(BLOKS)评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎(WOMAC)评分及膝关节负重与非负重疼痛积分。结果:牛膝醇提物能有效降低患者BLOKS评分中滑膜炎、关节积液积分、WOMAC评分及膝关节负重、非负重痛积分,且与治疗前对比差异均有统计学意义(P<0.05);两组治疗后行组间对比,在关节积液、滑膜炎及膝关节非负重痛积分上两者差异无统计学意义(P>0.05),而在WOMAC评分、膝关节负重痛积分上治疗组优于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:牛膝醇提物透入疗法可有效减轻膝骨性关节炎患者负重痛,降低WOMAC评分、BLOKS滑膜炎及关节积液积分,其中对WOMAC评分及膝关节负重痛积分的降低作用优于正清风痛宁组。

牛膝醇提物透入治疗膝骨关节炎临床观察

膝骨关节炎是临床中的常见慢性病和多发病之一[1],其治疗手段不一,通常采取局部外治方法。为了摸索更为行之有效的治疗手段,使用中药透入仪将牛膝醇提物透入患者膝关节进行定向治疗,收到了良好的治疗效果,现报告如下。1临床资料1.1一般资料将我院骨伤科住院部患者90例,按照病案号,将尾数为奇数的患者选为治疗组,治疗组以参试对象予以牛膝醇提物透入膝关节治疗,

CCK-8法检测牛膝醇提物体外诱导兔BMSCs增殖活性的研究

目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种不同浓度的含药血清及胎牛血清分别干预第三代骨髓间充质干细胞。于干预后第3、6、9天分别3次采用CCK-8法测定细胞光密度值(OD),比较各组间的差异。结果:高剂量组牛膝醇提物含药血清刺激骨髓间充质干细胞增殖,并促进细胞分化,其OD均值与其他组相比较最高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:牛膝醇提物含药血清具有促进BMSCs增殖作用,其中高剂量作用最强。

CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞最佳检测条件的实验研究

目的：研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）最佳检测条件。方法：以兔BMSCs分离、培养及扩增，经多次传代扩增，并取第4代细胞用于实验。对比CCK－8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异，研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳检测时间及检测波长。结果：牛膝醇提物能明显诱导兔骨髓间充质干细胞增生，对诱导兔BMSCs软骨分化具有较强的可行性。 CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳测试时间为加入CCK－8试剂孵育后的2小时，最佳检测波长为450nm。适宜检测的细胞数量范围为2．5×103／ml～4×104／ml个。结论：CCK－8法在孵育2小时后及酶标仪450 nm波长下检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs灵敏度最高。