基于网络药理学和分子对接研究牛膝-杜仲药对治疗膝骨关节炎的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接研究牛膝-杜仲药对治疗膝骨关节炎的关键靶点蛋白的作用机制。方法 使用TCMSP平台查找牛膝-杜仲药对的活性成分并预测作用靶点,筛选GeneCards、OMIM数据库中有关膝骨关节炎的相关基因并进行合并。通过STRING在线数据库将疾病与药物交集靶点进行蛋白相互作用分析,Cytoscape 3.7.2软件中NetworkAnalyzer插件对蛋白互作网络进行拓扑学分析,根据度值选定关键靶点。利用DAVID数据库对潜在靶点进行GO分析,探寻药对治疗膝骨关节炎的生物功能,通过KEGG通路富集分析探究药对治疗膝骨关节炎的主要信号通路。在Cytoscape软件中构建“药物-活性成分-靶点-通路”调控网络,根据度值选定核心药物活性成分。使用AutoDockTools等软件,对药物关键分子与疾病关键蛋白进行分子对接验证。结果 牛膝-杜仲药对作用靶点共234个,膝骨关节炎相关蛋白靶点共3 090个,药物-疾病交集靶蛋白共132个。AKT1、IL6、TP53、VEGFA、TNF、JUN、MMP9、EGF、PTGS2、CASP3等蛋白为药对治疗膝骨关节炎的主要作用靶点,主要参与TNF、HIF-1、破骨细胞分化、TLR、细胞凋亡、NLR等信号通路,主要围绕RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、缺氧的反应、炎症反应、对细胞增殖凋亡调控等生物学进程发挥治疗作用。靶点基因主要在细胞外基质、线粒体、核浆、胞质等处发挥作用,参与的分子功能主要包括蛋白、蛋白激酶、以及转录因子的结合等。有5种主要活性成分与5种关键靶点蛋白对接,均具有较强的结合活性。结论 牛膝-杜仲药对可能通过多种活性成分同时调控靶点基因及相关信号通路,发挥调控细胞凋亡、软骨基质降解、炎症反应以及骨重塑的作用,从而延缓膝骨关节炎的进展。

牛膝-杜仲药对促进RIN细胞胰岛素分泌作用的研究

目的探索牛膝-杜仲药对促进RIN细胞胰岛素分泌的作用,并筛选出最佳炮制品组合。方法以RIN-m5F细胞作为体外研究模型,以胰岛素分泌量为指标,研究牛膝-杜仲药对的促泌活性,并确定牛膝-杜仲药对的最佳炮制品组合。结果与空白组相比,不同炮制品组合的牛膝-杜仲药对均具有促进RIN-m5F细胞胰岛素分泌的显著性作用(P<0.05),且酒牛膝-盐杜仲促进RIN-m5F细胞胰岛素分泌作用最强,其分泌量为40.27m U·L^(-1),与空白组比较增加率为27.28%,有极显著性差异(P<0.01)。结论不同炮制品组合的牛膝-杜仲药对均具有促进RINm5F细胞胰岛素分泌的显著性作用,其中酒牛膝-盐杜仲药对为最佳炮制品组合。

中药杜仲-牛膝配伍对去卵巢大鼠骨质疏松症的干预实验研究

目的探讨杜仲-牛膝配伍组对去卵巢骨质疏松大鼠模型的干预作用。方法将84只大鼠随机分为正常对照组12只,假手术组12只,剩余60只造模成功后随机分为:模型组、阳性对照组(阿法骨化醇组)、杜仲组、牛膝组、杜仲-牛膝组共5组各12只。给药3个月后,检测各组大鼠的血清E2、钙离子、磷离子、碱性磷酸酶和骨密度(the bone mineral density,BMD)。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清中雌二醇(estradiol,E2)、钙离子、磷离子及BMD值明显降低(P<0.01),血清中碱性磷酸酶含量明显增高(P<0.05)。与模型组相比,牛膝组、杜仲-牛膝组大鼠血清中E2的含量明显升高(P<0.05);杜仲组、牛膝组、杜仲-牛膝组、阳性对照组大鼠BMD值及血清中钙离子、磷离子均明显升高(P<0.01)。杜仲组、牛膝组、杜仲-牛膝组、阳性对照组大鼠血清中碱性磷酸酶含量均明显降低(P<0.05);杜仲-牛膝组血碱性磷酸酶明显低于杜仲组、牛膝组(P<0.05)。结论杜仲-牛膝药对抗骨质疏松作用有增强趋势,其作用可能与提高血清钙离子、磷离子浓度,提高BMD有关。