牛血清白蛋白-三聚氰胺偶联物修饰的表面等离子体激元共振芯片检测三聚氰胺含量

基于竞争反应模式,建立了表面等离子体激元共振（ Surface plasmon resonance, SPR）技术检测三聚氰胺的方法。首先在羧甲基葡聚糖修饰的芯片表面引入牛血清白蛋白-三聚氰胺偶联物（ BSA-melamine）,随后流动注射待测三聚氰胺与适量三聚氰胺单克隆抗体的混合溶液。基于溶液中三聚氰胺与芯片表面固定的BSA-melamine偶联物和溶液中固定浓度的三聚氰胺单克隆抗体之间的竞争反应,通过检测芯片表面结合的抗体所产生的SPR信号,对溶液中三聚氰胺进行定量分析。随着溶液中待测三聚氰胺浓度的增大,SPR信号随之降低。三聚氰胺检测的线性范围为0.25~13 nmol/L及13~250 nmol/L。通过流动注射NaOH溶液可实现芯片的再生,从而大大提高了样品分析通量。本方法解决了SPR技术不易直接检测低浓度小分子的缺陷,具有方便、快捷、成本低等优点。

三聚氰胺完全抗原的制备与表征

采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原MEL-BSA,并用紫外扫描、红外扫描及SDS-PAGE电泳试验进行了鉴定。结果表明,半抗原MEL和BSA偶联成功,紫外光谱分析法计算得其偶联比为7.9∶1。通过免疫动物获得效价为1∶25 600的抗体,间接竞争ELISA测定抗体IC50值为39 ng/mL,与三聚氰酸及其他几种常用抗菌素的交叉反应率均<0.2%,为下一步研制三聚氰氨单克隆抗体,建立三聚氰氨免疫速测技术奠定了基础。