用cDNA-AFLP技术筛选新生牛软骨无血管区的高表达基因

软骨一直被认为是内源性血管生成抑制物的重要来源.为更好理解软骨血管生成抑制的遗传学基础,对软骨中与血管生成抑制有关的基因进行了初步的探索.本研究应用cDNA-AFLP技术对新生牛关节骨骺软骨无血管区和有血管区的差异表达基因进行分析,筛选无血管区特异表达或高表达的基因,共得到43个无血管区高表达的片段.通过对片段进行亚克隆、测序及同源性分析,结果发现,16个片段与已知基因同源,25个片段只在牛的基因组数据库中找到同源序列,另有2个片段未找到同源序列.在同源基因中,肌钙蛋白Ⅰ亚型其血管生成抑制作用已有较详细报道;S100A7与血管生成和肿瘤发生的关系也已有阐述.另外14个同源基因按生物过程分析,发现参与了细胞周期调节、信号传递、细胞间相互作用及新陈代谢等多个生物过程.研究结果提示,牛软骨组织无血管区的无血管状态可能由多基因介导,其中一些可能是已知或未知的新基因.

以脱细胞牛软骨基质为支架体外构建组织工程软骨的实验研究

目的以脱细胞牛软骨基质(acellular cartilaginous matrix,ACM)作支架体外构建组织工程软骨,了解其作为软骨组织工程支架的可行性。方法 2003年1月-2005年12月联合应用冻干-反复冻融-酶消化法对牛软骨基质行脱细胞处理。将体外培养扩增的2～5代兔软骨细胞接种在材料上,体外培养3周,观察软骨细胞在支架材料上的生长分布情况。结果软骨细胞在制备的ACM上可较好地黏附生长,并且分泌大量Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖;但软骨细胞不能长入ACM内部,只能在表层生长,少量软骨细胞分布在ACM孔隙中。结论 ACM支架材料具有良好的细胞相容性和活性,并且能促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型。

牛关节软骨复合物对佐剂性关节炎的治疗作用

本文系统考察了牛关节软骨复合物对类风湿性关节炎的治疗作用。采用弗氏完全佐剂皮下注射左后足跖建立小鼠佐剂性关节炎模型,主要考察了牛关节软骨复合物、牛关节软骨多糖及牛喉管骨软骨多糖对模型小鼠关节指数、肝指数、脾指数和胸腺指数的影响,并检测了小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和白细胞介素(IL-1β)含量的变化。实验结果表明,牛关节软骨复合物可有效缓解小鼠关节肿胀现象,显著降低小鼠肝指数,胸腺指数,MDA,NO(P<0.05)及IL-1β(P<0.01)的含量,对佐剂性关节炎具有明显的治疗作用,且治疗效果优于软骨多糖组。关节软骨复合物为治疗类风湿性关节炎提供了一种新的药物选择。

牛软骨症防治措施

通过对牛软骨症发病的初期、中期、后期3个阶段的观察和治疗,提出以"预防为主"是杜绝本病的根本措施。同时证明,用"石粉苍术散"预防本病效果良好。

聚二甲基硅氧烷基材表面修饰及力学强度变化对关节软骨细胞的影响

背景:聚二甲基硅氧烷因具有良好的生物相容性,优异的微纳米尺度可加工性,被广泛应用于细胞生物学的基础研究。但聚二甲基硅氧烷材料疏水性强,并不适于细胞贴附,因此表面修饰非常重要。目的:考察不同表面修饰方法并结合聚二甲基硅氧烷材料力学强度变化对牛关节软骨细胞生物学行为的影响。方法:采用3种不同方法修饰聚二甲基硅氧烷薄膜材料,包括胎牛血清孵育、胶原沉积和等离子体处理,同时变化聚二甲基硅氧烷材料的硬度,然后接种牛关节软骨细胞,并通过细胞骨架染色以及CCK-8表征分析其黏附、增殖情况,通过天狼星红/番红O染色以及糖胺聚糖定量表征分析基质分泌情况。结果与结论:(1)细胞黏附和增殖:细胞骨架染色以及生长曲线可以看出血清孵育、胶原沉积和等离子体处理均能显著改善牛关节软骨细胞在聚二甲基硅氧烷表面的黏附和增殖,其中等离子体处理的效果最好;(2)糖胺聚糖的总量:只有等离子体处理的表面显著提高了细胞分泌的糖胺聚糖的总量,但是细胞分泌糖胺聚糖的能力在所有修饰的表面上有所降低;(3)材料硬度对细胞黏附、生长和糖胺聚糖分泌都有影响,而且与材料表面修饰有关。(4)结果证实:实验利用血清孵育、胶原沉积以及等离子体处理聚二甲基硅氧烷材料,均能有效促进牛关节软骨细胞的贴附和生长,而且其中等离子体处理效果最优,与此同时聚二甲基硅氧烷基材的硬度也对细胞行为有所影响,但程度上要次于化学修饰,而且越能促进细胞生长的材料越抑制了关节软骨细胞的基质分泌能力。

“肋软骨汤”治疗骨关节炎

我想介绍一个小方子，即用肋软骨汤治疗骨关节炎。羊或牛肋软骨500～1000克，用高压锅加水多量，煮沸后加阀用小火煮4～5小时，去油层，分10等分冰箱冷藏。每日进食1份，3个月为1疗程。

牛肋软骨Ⅱ型胶原的提取及性能表征

以牛肋软骨为原料,在酸性条件下用胃蛋白酶酶解,并经不同浓度的盐反复纯化得到Ⅱ型胶原。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳结果表明,提取的Ⅱ型胶原具有较高纯度;紫外光谱、红外光谱、圆二色谱都表明,所得到的Ⅱ型胶原很好地保持了其三股螺旋结构;氨基酸成分分析结果显示,其含有丰富的酸性氨基酸和亚氨基酸;Zeta电位测得等电点为4.70;微量差式扫描量热结果显示其变性温度为40.7℃;通过扫描电镜(SEM)观察,胶原海绵表面为疏松网状结构;原子力显微镜(AFM)观察结果显示,胶原溶液在云母片上呈纤维状均匀分布。由此可见,牛肋软骨可作为Ⅱ型胶原的提取原料。

眼眶部异种骨移植的实验研究

由于外伤、眶骨膜炎、肿瘤切除等原因,常造成眶骨缺损,轻者眶部皮肤与眶骨形成粘连,造成睑外翻、睑皮塌陷,重者可使眼球向内或下移位。对此常需做眶成形术——眶骨移植或植入充填物。充填材料最初多为自身肋骨、耳软骨、髂前棘、阔筋膜,其后则多用医用高分子化合物,如聚甲基丙烯酸羟乙酯。著者70年代曾多次使用婴儿胸骨及肋软骨,均获良效,但取材受限。