铁离子-单宁酸处理增强牛颈静脉综合性能

经传统戊二醛(GA)交联的牛颈静脉易发生钙化,限制了其在临床上的广泛应用。在GA交联基础上增加单宁酸(TA)处理,取得了良好的抗钙化效果,但也存在组织柔顺性较差的不足。根据单宁酸易与金属阳离子产生螯合作用的特性,本研究尝试应用三价铁离子(Fe^(3+))与反应体系中的单宁酸形成螯合物,防止单宁酸过度反应,从而提高其抗钙化的综合性能。探索Fe^(3+)添加方式和pH等反应条件,分别通过单轴拉伸实验测定力学性能、大鼠皮下植入实验测定钙化水平和两点弯曲法测定血管柔顺性,筛选出优化的TA-Fe^(3+)处理方法,并对此方法处理得到的牛颈静脉进行生物相容性评价。结果表明,碱性条件(pH=8)下,TA处理前增加Fe^(3+)处理步骤能改善TA固定牛颈静脉的组织柔顺性,柔顺度较TA组显著改善,同时保持了TA处理的力学强度;大鼠皮下植入21和60 d后钙含量显著低于GA组[21 d:(1.71±0.41)mg/g vs(38.12±7.40)mg/g;60 d:(2.73±1.13)mg/g vs(124.19±14.22)mg/g,P<0.05),植入60 d后钙含量与TA组钙化水平相当(P>0.05);生物相容性实验结果全部符合植入医疗器械的要求。该TA-Fe^(3+)处理方案可以增强牛颈静脉综合性能,有望成为抗钙化的新方法。

光氧化处理牛颈静脉带瓣管道重建肺动脉与右心室连接

目的 观察光氧化处理的牛颈静脉带瓣管道用于重建右心室—肺动脉连接后，在体内循环系统中与血流接触条件下的抗钙化性能及其血流动力学性能。方法 以经光氧化反应处理的牛颈静脉带辩管道为研究时象，以单纯戊二醛交联固定的牛颈静脉带瓣管道作为对照，建立犬重建右心室—肺动脉连接的动物模型；实验动物饲养观察10个月后，通过超声心动图和心导管检查等方法评价两种不同方法固定处理的牛颈静脉带瓣管道重建犬右心室—肺动脉连接后的血流动力学性能，并了解牛颈静脉管道内的瓣膜在犬的右心系统内的功能。屠宰实验动物后取出标本，通过原子吸收光谱法测定组织钙含量，von Kossa钙盐染色观察组织钙化情况。结果 心脏超声显示两组管道均通畅，瓣叶活动良好。光氧化处理组结扎肺动脉前、后直接测压及术后9-10个月通过心导管测压，所测得的跨瓣压差维持在较低水平，跨瓣压差无明显升高；戊二醛组结扎肺动脉前、后及术后9—10个月测得的跨瓣压差与光氧化组相似。光氧化组管道血管壁钙含量为7．60±8．02mg／g，戊二醛组管道血管壁钙含量为丝，05±10．78mg/g，两组有显著性差异（P〈0．05）；光氧化组和戊二醛组管道瓣膜钙含量分别为0．74±0．23mg/g和0．88±0．69mg／g，两组相比无统计学差异（P〉0．05）。结论 光氧化反应处理固定的牛颈静脉带瓣管道可用于重建右心室—肺动脉连接，血流动力性能良好，与自体肺动脉相当，远期血流动力学性能尚待进一步观察研究。光氧化反应处理固定的牛颈静脉带瓣管道在狗的动物模型中，抗钙化性能优于戊二醛固定的牛颈静脉管道。

光氧化反应处理牛颈静脉带瓣管道的形态学与理化性能研究

目的 :探讨光氧化反应处理后的牛颈静脉带瓣管道的外观形态、组织稳定性及流体物理性能的特征。方法 :取新鲜牛颈静脉带瓣管道 2 4根 ,分为光氧化处理组、戊二醛处理组及新鲜对照组。分别观察和测量各组处理前后的管壁的厚度、管腔外径及各组管道瓣膜的抗返流功能的变化 ,测定处理前后的组织含水量、热皱缩温度、最大应力 ,并作各组的组织蛋白提取分析以了解组织稳定性。结果 :光氧化组与对照组相比管壁厚度、管腔外径、瓣膜抗返流功能、组织含水量及热皱缩温度差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,与戊二醛组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。光氧化组最大应力大于对照组 ,低于戊二醛组。光氧化组和戊二醛组的组织蛋白提取量均少于对照组。结论 :光氧化方法处理后的牛颈静脉带瓣管道能较好地保持原有的管壁及瓣膜结构的完整性 ,并可提高组织的稳定性和组织的断裂强度。

牛颈静脉带瓣管道结构特性及流体动力学的实验研究

目的 :探讨牛颈静脉带瓣管道结构形态及其流体动力学特性。方法 :取新鲜牛颈静脉带瓣管道 ,应用自制的流量测定装置 ,在相同压力下测定其在一定时间内顺行和逆行灌注量 ,根据逆行与顺行流量的百分比将瓣膜功能分级。重复测量以 0 .6 2 5 %戊二醛液固定的牛颈静脉管道的顺逆行灌注流量 ,观察静脉瓣膜解剖结构。结果 :牛颈静脉管道常有 2～ 3组瓣膜 ,瓣叶菲薄、透明。每组瓣可为三叶或两叶 ,少数为四叶。各组瓣叶发育程度不一 ,发育良好的组瓣呈散在分布。瓣膜抗返流功能和瓣膜与瓣窦高度之比值呈正相关 (r =0 .70 9,P <0 .0 0 1 ) ;瓣膜抗返流功能与瓣叶数和管径之间不相关 (P >0 .0 5 )。固定前后其逆行与顺行灌注流量百分比差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :部分牛颈静脉具有发育良好的瓣膜 ,抗返流特性好。

TritonX-100法制备牛颈静脉脱细胞血管支架

【目的】研究经TritonX-100脱细胞处理的牛颈静脉的组织结构和生物力学特性以及作为组织工程血管支架的可能性。【方法】获取10条新鲜带瓣牛颈静脉,随机分为两组,新鲜对照组(n=5)和脱细胞实验组(n=5),脱细胞组血管使用2.5mL/LTritonX-100等进行脱细胞处理48h,病理切片染色和扫描电镜观察血管壁和瓣膜自身细胞的脱除情况和细胞外基质变化情况;生物力学性能检测血管组织强度变化;体外人内皮种子细胞种植以了解脱细胞支架的生物相容性。【结果】脱细胞处理后,管壁和瓣膜的自身细胞完全脱除而弹力纤维和胶原纤维无明显改变;与新鲜牛颈静脉相比,脱细胞血管的拉伸强度[(16.5±2.61)MPavs(15.5±3.1)MPa;P>0.05]和最大持线力[(7.9±0.9)Nvs(7.0±1.1)N;P>0.05]无明显改变,在100mmHg液压下脱细胞血管无异常扩张;内皮种子细胞在脱细胞血管支架上生长黏附良好。【结论】TritonX-100法对新鲜牛颈静脉进行脱细胞处理效果良好,脱细胞牛颈静脉可作为细胞种植的血管支架使用。

丹宁酸改性处理对戊二醛固定牛颈静脉管道理化特性的影响

目的评估丹宁酸改性处理对戊二醛固定牛颈静脉管道理化性质的影响。方法新鲜牛颈静脉分别经戊二醛固定(对照组)和戊二醛固定/丹宁酸改性处理后(研究组),采用热收缩温度、抗蛋白酶解性能、生物力学性能及傅立叶变换红外线光谱法进行理化性质评价。结果研究组牛颈静脉管壁的热收缩温度(P<0.01)、抗胶原纤维酶和抗弹性蛋白酶酶解性能(P<0.01)、管壁最大拉伸强度(P<0.01)及断裂伸长率(P<0.05)等指标均明显高于对照组,且管壁示红外线峰值偏移。结论丹宁酸改性处理可显著改善戊二醛固定牛颈静脉管道的理化性质。

Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理牛颈静脉带瓣管道的体内外生物相容性研究

目的评价Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道的体内外生物相容性。方法取新鲜牛颈静脉,热缺血时间在2 h以内,依次经戊二醛、Triton X-100、环氧氯丙烷交联处理,制备出新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道(EC+Tr组);以单纯戊二醛处理的牛颈静脉为对照(GA组),参照国家植入材料的检验标准,采用处理后牛颈静脉材料浸提液进行溶血试验、皮内注射刺激试验、急性全身毒性试验和细胞毒性试验。结果溶血试验中,EC+Tr组溶血率为2.6%,小于GA组3.7%的溶血率(P<0.05),符合国家标准(<5%);皮内刺激试验中,EC+Tr组PI(I原发性刺激指数)为0.5,小于GA组的0.87,提示对受试动物皮肤刺激轻微;急性全身毒性试验中,受试动物均未出现毒性症状;细胞毒性试验中,EC+Tr组培养的L-929小鼠成纤维细胞经100%浓度材料浸提液处理后形态良好,增殖率达87.55%,毒性评级为1级(合格),优于GA组结果(增值率为69.47%,毒性评级为2级,P<0.05)。结论 Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道符合国家标准,具有良好的生物相容性,为进一步临床应用提供了理论依据。

戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道钙化的实验研究

目的探讨戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道是否易于钙化。方法本研究以戊二醛鞣制的牛颈静脉作为研究对象,通过建立大鼠皮下包埋动物模型11例加速体内钙化的方法,应用原子吸收光谱法测定组织钙含量。结果血管壁和瓣膜钙含量分别为(211.00±25.83)μg/m g和(4.218±3.879)μg/m g,后者为前者的2%,统计学上差异有显著性(P<0.001)。结论戊二醛交联鞣制的牛颈静脉血管壁较易发生钙化,与之相比瓣膜较不易钙化。

光交联剂SANPAH在处理后的牛颈静脉血管表面接枝生物短肽RGD

目的:通过不同摩尔浓度、摩尔比的光交联剂SANPAH和RGD接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉(BJVC)表面的初步研究,以明确接枝RGD的效果和最佳浓度。方法:分别取4个不同浓度的SANPAH和RGD进行3个摩尔比的反应,经过紫外线照射光化学接枝后,各组血管片进行快速冰冻切片,荧光显微镜下观察,看不同浓度下和摩尔比反应、结合的荧光效果,从而初步推断出最佳的反应和结合浓度。结果:应用光交联剂后,血管内膜面有一层较强的荧光,随着RGD和SANPAH的浓度的升高,荧光整体上是越来越强,但是二者的浓度高于0．6mM时,荧光差别不是很明显;当二者的反应摩尔比为1:1时,荧光最强。结论:光交联剂SANPAH能够把RGD接枝到BJVC上,最佳的RGD和SANPAH反应及接枝的浓度是0．6mM,最佳的摩尔比是1:1。

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道生物相容性实验

目的:检测去细胞处理牛颈静脉的生物相容性。方法:去细胞处理牛颈静脉,与新鲜牛颈静脉分别于兔皮下包埋,术后2,4,12周取材,HE染色;进行血浆蛋白吸附和血小板粘附实验,检测血液相容性。结果:包埋早期有炎性细胞浸润,后期炎性细胞消失,以成纤维细胞为主。去细胞牛颈静脉与新鲜牛颈静脉血浆蛋白吸附和血小板粘附无显著差异。结论:去细胞牛颈静脉有良好的生物相容性。

用牛颈静脉制备婴儿右心流出道修复材料及活体研究的初步报告

目的证明牛颈静脉可作为制备婴儿右心流出道的修复材料。方法分别用4 %的EX -313与0.5 %的戊二醛处理牛颈静脉带瓣胶元管道 ,所获材料进行外观、瓣膜功能、扫描电镜与光镜检查 ,及生物力学的测试并进行犬肺动脉成型与重建的活体观察。所获的数据进行t检验。结果证明EX -313及内壁肝素化处理后的材料较单纯戊二醛处理者的质地更接近天然血管 ,结构间充满空隙 ,抗张强度与戊二醛处理者相当 ;抗钙化与抗栓方面明显优于戊二醛处理者。结论经亲水性交联剂EX_313处理的牛颈静脉有可能成为较理想的婴儿用右心流出道修复材料。

带瓣牛颈静脉补片在右室流出道重建中的临床应用

目的 总结带瓣牛颈静脉补片在右室流出道重建中的临床经验和术后早期效果.方法 2006年6月至2008年12月,16例患者应用带瓣牛颈静脉补片进行右室流出道重建.与同期手术行右室流出道重建使用自体心包组术后早期进行对比.结果 全组无死亡,术后3个月超声检查右室流出道通畅,4例有轻度反流.结论 带瓣牛颈静脉作为右室流出道重建的替代材料,具有易于获取、型号齐全、早期临床效果好的特点,但中远期效果仍待随访观察.

牛颈静脉经不同方法交联改性后的免疫原性

目的:研究牛颈静脉带瓣管道经不同方法交联后免疫原性的变化。方法:将牛颈静脉随机分为4组(n=10):多聚环氧化合物(PC)交联组、染料介导光氧化(DMP)交联组、戊二醛(GA)交联组及新鲜牛颈静脉对照组。制备牛颈静脉匀浆,与完全福氏佐剂混合制成复合乳剂抗原,免疫新西兰大白兔。采用双向免疫扩散法测定兔血清抗体滴度。取新鲜牛颈静脉免疫的兔血清,采用免疫印迹法(Westernblotting)体外检测交联后的牛颈静脉组织匀浆的抗原组分。结果:免疫印迹显示新鲜牛颈静脉组织有特异性重复出现的阳性条带,经PC,DMP交联处理的牛颈静脉均未出现明显阳性条带,经GA交联处理的牛颈静脉中1例出现阳性条带,但无特异性重复出现的条带,各交联处理组间免疫原性无明显差异。结论: PC,DMP及GA交联处理的牛颈静脉可有效地灭活其免疫原性,适合临床应用要求。

牛颈静脉带瓣管道重建犬右室-肺动脉连接后的钙化研究

目的研究牛颈静脉用于重建右室-肺动脉连接后的钙化情况。方法以戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道为研究对象,建立犬重建右心室-肺动脉连接动物模型,观察9￣10个月,通过原子光谱吸收法测定组织钙含量,以评价在体内循环系统中与血流接触的情况下,牛颈静脉带瓣管道的钙化情况。结果管壁钙含量为(22.05±10.78)μg/mg,瓣膜钙含量为(0.88±0.69)μg/mg,后者仅为前者的3.99%,经配对t检验分析,在统计学上差异均有显著性(P<0.001)。瓣下管壁钙含量为(16.04±4.25)μg/mg,瓣上管壁钙含量为(28.07±17.98)μg/mg,配对t检验显示二者在统计学上差异无显著性(P>0.05);瓣膜的基底部、交界部及游离缘3者之间的钙含量在统计学均无显著性差异,配对t检验显示P>0.05;结论牛颈静脉带瓣管道重建右室-肺动脉连接后,血管壁远较瓣膜容易钙化;瓣上管壁和瓣下管壁钙化程度无明显差异,瓣膜各部分钙化程度无明显差异。

染料介导光氧化固定牛颈静脉血管片体外内皮化

目的研究染料介导光氧化固定牛颈静脉的细胞毒性．初步探讨此种材料体外内皮化的可能性，方法实验组为染料介导光氧化固定组。对照组为戊二醛固定组。采用羊的颈内静脉内皮细胞作为细胞源，细胞种植于管腔一侧，时间为5d。动态观察细胞生长情况，扫描电子显微镜检查种植细胞前后的材料和免疫组织化学因子Ⅷ染色情况。结果光氧化固定组．采用扫描电子显微镜观察，在种植细胞前，在材料表面无细胞，而在种植细胞后，在材料表面密布一层细胞。戊二醛固定组．采用扫描电子显微镜观察，在种植细胞前后无差别，在材料表面见戊二醛固定时残留的少许细胞。光氧化同定组．材料表面种植的细胞因子Ⅷ染色为阳性。结论染料介导光氧化固定牛颈静脉血管片无明显细胞毒性．在体外可以很好地内皮化。

比较牛颈静脉去细胞处理实验方法

目的比较两种牛颈静脉脱细胞方法。方法改良组对牛颈静脉使用0.25%聚乙二醇辛基苯基醚、2.5g/L脱氧胆酸钠、0.2g/L乙二胺四乙酸、0.1g/LRNA酶和0.2g/LDNA酶作48h脱细胞处理;常规组使用0.5g/L胰蛋白酶和0.2g/L乙二胺四乙酸处理24h,再按以上处理组程序处理24h。血管壁和瓣膜自身细胞脱除和细胞外基质改变在染色后用扫描电镜观察;血管组织强度用生物力学检测。结果改良处理组管壁和瓣膜自身细胞完全脱除而细胞外基质无明显改变,常规组仍有大量固有细胞残留,弹力纤维出现断裂;两组脱细胞血管的生物力学性能无明显变化。结论改良脱细胞处理用聚乙二醇辛基苯基醚、脱氧胆酸钠、乙二胺四乙酸、RNA酶和DNA酶组合,是一种较理想的牛颈静脉脱细胞方法。

用牛颈静脉制备抗栓 抗钙化性右心流出道修复材料的实验研究

目的论证用牛颈静脉制备抗栓、抗钙化右心流出道修复材料的可行性。方法用EX-313交联牛颈静脉带瓣胶原管道并用肝素处理其内壁,裁成带单瓣的补片,用其扩大7条犬的肺动脉,同时建立用戊二醛制成的补片扩大肺动脉对照模型。在6个月内观察补片的抗栓、抗钙化、内皮化及组织重构的情况。结果在抗栓、抗钙化、内皮化及组织重构方面EX-313及肝素处理的牛颈静脉明显优于戊二醛处理者。结论经亲水性交联剂EX-313及肝素处理内壁的牛颈静脉有可能成为制作重建右心流出道的基本材料,在进一步研究的基础上它也可能成为组织工程带瓣管道的支架材料。

染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞毒性研究

目的：评价染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞毒性。方法：（1）间接接触毒性试验：制备染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道浸提液，培养I．929细胞，然后采用MTT比色法测定相对增殖率。（2）直接接触毒性试验：将L929细胞与染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道直接接触培养，在不同时间观察细胞的生长状态。将L929细胞种植于染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道表面，用扫描电镜观察其生长情况。结果：染料亚甲基蓝介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的性质稳定，细胞毒性程度为0～1级。L929细胞与瓣膜材料直接接触培养生长良好，形态学无明显改变。结论：染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞相容性良好。