低分子质量牛骨多肽制备及对大鼠破骨细胞的影响

从牛骨制备低分子质量骨多肽,并观察其对大鼠破骨细胞的影响。采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原,用超滤法得到分子质量10000u以下的牛骨多肽,并用Sephadex G-10层析脱盐。Tricine-SDS-PAGE对低分子质量牛骨多肽分子质量进行检测,采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色法研究牛骨多肽对体外培养大鼠破骨细胞的分化影响,甲苯胺蓝硼酸盐染色法观察对破骨细胞的骨吸收影响以及HE、TRAP、DAPI染色法分别观察凋亡征象。结果:建立和优化了牛骨多肽的制备方法;牛骨多肽对破骨细胞分化无影响,但能抑制其骨吸收功能,促进其凋亡。

低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响

目的从牛骨制备低分子多肽，并观察其对体外培养新生大鼠的戍骨细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原，超滤法得到相对分子质量（Mr）10000以下的牛骨多肽，经Sephadex G-10脱盐，浓缩后用Trieine—SDS-PAGE电泳对Mr进行检测。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定牛骨多肽对戍骨细胞增殖的影响，ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性，RT—PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达。结果建立了牛骨多肽的制备方法。低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著（P〉0．05），高浓度具有显著的增殖作用（P〈0．05），并呈现出剂量依赖性；中、高浓度（50～400μg／mL）牛骨多肽组可提高戍骨细胞ALP的活性（P〈0.05），低浓度组（10μg／mL）提高ALP的活性不显著（P〉0．05）；牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达。结论牛骨多肽的制备工艺简单，适合规模化生产；牛骨多肽能促进戍骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达。

喷雾干燥对骨多肽粉理化性质及微观结构影响

试验以牛骨为主要原料,研制牛骨蛋白多肽粉。通过对喷雾干燥前牛骨酶解液的抗氧化活性测定,喷雾干燥时进料速度、进风温度测定,喷雾干燥后牛骨多肽粉水分含量测定、水分活度测定、溶解度的测定和颗粒分布测定,以及牛骨多肽粉微观结构观察,确定喷雾干燥对牛骨蛋白多肽粉理化性质及微观结构的影响。结果表明,喷雾干燥前牛骨酶解液多肽液的总抗氧化能力为谷胱甘肽总抗氧化能力的89.36%,喷雾干燥进风温度为150℃,进料速度为50 r/min,牛骨多肽粉成品中总粗蛋白为39.50%,小分子蛋白为14.22%,氨基酸为4.42%,肽化率为≤68.92%,水分含量为2.72%±0.13%,水分活度为0.315±0.19,溶解度为76.25%±0.15%,最终得到牛骨蛋白多肽粉黄白色粉末产品。