传染性牛鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及其应用

采用改进的融合技术得到318个杂交瘤细胞系。经ELISA筛选,这些细胞系所分泌的抗体均和病毒抗原发生反应。亚克隆出26个杂交瘤细胞系,制出特异的单克隆抗体,并采用ELISA、放射免疫沉淀试验(RIPA)、SDS-PAGE、免疫印迹及病毒中和试验等对单克隆抗体的特性作了鉴定。应用单克隆抗体对牛疮瘆病毒Ⅰ型Bovine HerpesVirus I(BHV—Ⅰ)主要结构蛋白作了分析。

狂犬病毒、伪狂犬病毒、马瘟病毒、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒和传染性牛鼻气管炎病毒的保存期试验

进行了狂犬病毒 (巴黎株固定毒 )、伪狂犬病毒 (闽 A株 ,苏联株 )、马瘟病毒 (I,II,III,IV,V,VII型 )、牛病毒性腹泻 /粘膜病病毒 (Oregon C2 4 V株 ,NADL株 )和传染性牛鼻气管炎病毒(NU/6 7株 )的保存期试验。试验结果证明 ,在 - 70℃以下温度保存 ,狂犬病毒巴黎株固定毒保存 1 0年以上 ,伪狂犬病毒闽 A株保存 1 1年以上 ,伪狂犬病毒苏联株保存保存 1 7年 ,马瘟病毒 I、II、III、IV、V和 VII型病毒保存 1 2年以上 ,牛病毒性腹泻 /粘膜病病毒 NADL株和 Oregon C2 4 V株保存1 6年以上 ,传染性牛鼻气管炎病毒 NU/6 7株保存 1

间接血凝试验检测抗传染性牛鼻气管炎病毒的单克隆抗体

运用间接血凝试验对４株杂交瘤细胞株所分泌抗传染性牛鼻气管炎病毒单克隆抗体进行测定的结果表明，此方法可用于该抗体的某些特性鉴定和筛选。

从进口种用奶牛中分离传染性牛鼻气管炎病毒

在对2865头进口种用奶牛隔离检疫期间,从1头IBR中和抗体阳性奶牛中分离1株病毒。该分离株表现类似于IBR病毒特征的细胞病变(CPE),细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,有时会发现有几个细胞核的巨大细胞。用特异性抗IBRV阳性血清与之进行中和试验,发现IBRV标准阳性血清对分离株的中和抗体滴度为26.5,与对IBR标准株的中和抗体滴度相差不到一个滴度。调取IBRVLA株gB基因序列,设计出1对IBR特异性的引物进行PCR,能扩增出与目的基因片段大小一致的特异性条带。结果表明:分离到的病毒为IBRV。

传染性牛鼻气管炎病毒分离鉴定及特性分析

传染性牛鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是牛的重要传染病病原,除能引起呼吸道疾病外,还可引起结膜炎、流产、脑炎和全身性感染。本试验从广东某牛场疑似IBRV感染牛中采取鼻拭子样品,用PCR和荧光PCR方法,初步诊断病牛感染IBRV。用MDBK细胞对初诊阳性病料进行病毒分离和鉴定,分离出1株传染性牛鼻气管炎病毒,命名为GD0109。细胞感染试验表明,该株病毒可以使MDBK细胞产生典型的圆缩、呈葡萄样聚集以及空洞等细胞病变。将GD0109与强毒的ATCCVR-2112TM株感染细胞裂解液分别接种MDBK细胞并盲传5代,对5代、10代、15代的病毒分别进行TCID50测定及中和试验,结果表明分离株和参考株VR-2112TM相似,提示该分离株为强毒株,并且具有良好的传代稳定性,为进一步疫苗生产打下良好的基础。

传染性牛鼻气管炎亚单位疫苗免疫原性的研究

用犊牛睾丸细胞培养传染性牛鼻气管炎病毒 (IBRV) ,反复冻融 ,差速离心提取病毒 ,用TritonX_10 0溶解 ,超声波处理 ,制成IBRVTritonX_10 0亚单位抗原 ,经SDS_PAGE电泳 ,其分子量在 176kD～ 5 3kD之间 ,其中有 6条清晰的蛋白带。该抗原与一定比例的白油_司盘佐剂乳化 ,接种育成牛 ,经间接ELISA检测 ,可使接种的育成牛产生高效价的血清抗体 (OD4 92nm =1.5 7)。2种不同剂量 (80mg/头 ,40mg/头 )的IBRV亚单位疫苗接种育成牛 ,体内抗体效价相差不显著 ,抗体可在体内持续 12周 ,用IBRVTritonX_10 0亚单位疫苗 2次接种育成牛 ,其体内抗体效价显著高于用灭活疫苗 2次接种育成牛体内的效价。试验结果表明 :提取的IBRV多肽制作的亚单位疫苗具有良好的免疫原性 ,且抗体持续时间较长。

可视化牛传染性鼻气管炎病毒快速检测

【背景】牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是牛常见的易感病原体,给畜牧业带来了重大经济损失,亟须建立一种快速检测IBRV的方法。【目的】建立一种重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和微流控芯片技术相结合的IBRV可视化快速检测方法。【方法】实验选择IBRV的ul52基因作为分子检测的目标片段。选择伪狂犬病毒、火鸡疱疹病毒、鸭瘟疱疹病毒作为对照组。通过不同稀释倍数IBRV的DNA提取液确定灵敏度。通过对34份疑似感染IBRV急性期病牛的血清和鼻拭子样本病原分离株的检测来分析本方法的适用性。【结果】ul52基因扩增子大小为403 bp,扩增子测序结果显示,得到的目标片段核酸序列与IBRV的ul52基因(NC_063268.1)相似性达100%,对照组未见扩增子,检测限为6.9×10^(3)copies/μL。对34份疑似感染IBRV急性期病牛血清和鼻拭子样本病原分离株的检测结果分析发现,编号分别为SD0213、SD0518和SD0701的牛感染了IBRV,血清和鼻拭子样本病原分离株检测结果一致。另外,从样本DNA提取到获得检测结果的全流程时长为110 min。【结论】本研究将RPA、磁性探针捕获和微流控技术相结合,建立了一种IBRV病毒的快速可视化分子检测方法,该方法具有良好的特异性和灵敏度。

2022年宁夏固原市肉用流产母牛病原血清学调查分析

[目的]为了明确宁夏固原地区肉用流产母牛4种流产相关病原的流行情况。[方法]试验选择宁夏固原市5个地区不同规模化肉牛养殖场,采集131份有流产史的母牛血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对流产相关病原抗体/抗原进行检测和分析。[结果]采集的131份血清样品中共检出109份阳性血清,阳性率为83.2%。其中BVDV抗体阳性率为62.6%(82/131)、流产衣原体抗体阳性率为59.5%(78/131)、IBRV抗体阳性率为13.7%(18/131),布鲁氏菌抗体阳性率为0%(0/131)。结果表明,采集的131份血清样品中共检出109份阳性血清,阳性率为83.2%。其中BVDV抗体阳性率为62.6%(82/131)、流产衣原体抗体阳性率为59.5%(78/131)、IBRV抗体阳性率为13.7%(18/131),布鲁氏菌抗体阳性率为0%(0/131)。109份阳性样品中,最多出现3种病原混合感染。其中单一病原感染阳性样品占42.2%(46/109),以BVDV感染比例最大,与流产衣原体阳性率相比差异显著(P<0.05);2种病原混合感染样品占56.9%(62/109),以BVDV和流产衣原体混合感染比例最大,与流产衣原体和IBRV混合感染阳性率、BVDV和IBRV混合感染阳性率差异极显著(P<0.01);3种病原混合感染样本占4.6%(4/109),主要以BVDV、流产衣原体和IBRV混合感染为主。[结论]宁夏固原地区流产母牛均存在以上3种疫病感染,其中主要以BVDV和流产衣原体单独或混合感染为主。

赤羽病病毒套式RT-PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了3条特异性引物,建立了检测AKAV的套式RT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增出AKAV的S基因片段,但从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种对照病毒中均不能扩增出目的条带。敏感性试验表明,套式RT-PCR能够扩增10-5稀释度的病毒RNA(核酸含量约1.18 ng/μL),比普通RT-PCR高出1 000倍。用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本,但AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。研究结果表明,该方法灵敏、特异,为AKAV的检测提供了一个快速、有效的手段。

低温常压等离子体提高MDBK细胞中IBRV病毒滴度的作用与机制研究

加强病毒的繁殖可以帮助MDBK细胞生产更多的IBRV病毒用于生产灭活病毒疫苗。已证明低温常压等离子体(Cold atmospheric plasma,CAP)是一种依靠活性氧来实现MDBK细胞中病毒显著增殖的物理方法,可有效增强病毒的传播,其中牛鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachieitis virus,IBRV)和牛肾细胞(Madin-Darby Bovine Kidney,MDBK)分别被用作模型所需病毒和细胞系。CAP被证明与病毒感染具有协同作用,可以在G2/M期阻止宿主细胞分裂增殖,降低细胞膜电位,增加细胞内钙离子水平并诱导细胞选择性自噬。通过检测免疫相关蛋白表达,CAP被证明可以抑制病毒触发的免疫原性信号传导。综上所述,我们证明了CAP触发了宿主资源对病毒繁殖的最大化,这有利于病毒疫苗的生产,并为在医疗和卫生领域应用CAP开辟了新的可能。