牛FcγRⅠ(CD64)GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX - 6P- 1,转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导,SDS -PAGE分析表达了N端带有GST的融合蛋白,Western -blotting试验表明融合蛋白在变性条件下能和牛IgG结合。GST -FcγRⅠ融合蛋白的成功表达为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。

参芪蛭龙汤对膜性肾病模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响

目的 探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病(MN)模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响。方法 60只SPF级ICR小鼠,6周龄,体重(23±4)g,雌雄各半,按照随机数字表法分为空白组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠注射阳离子化牛血清白蛋白,复制MN小鼠模型。取其中造模成功的40只小鼠按照随机数字表法分为模型组,参芪蛭龙汤高、低剂量组(24、12 g/kg)和雷公藤多苷片组(14 mg/kg),每组10只。给药4周后,处死小鼠。HE、Masson染色观察肾脏组织病理变化;免疫荧光法观察肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白荧光强度;Western blot检测肾脏组织内FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白表达;RT-PCR检测肾脏组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA mRNA表达。结果 HE染色显示空白组小鼠上皮细胞、基底膜、肾小管及肾间质形态结构均未见明显异常。模型组小鼠肾小球体积增大,肾小球毛细血管袢扩张,血细胞溢出,肾小球系膜增厚,肾小囊腔增大,局部肾小囊腔壁上皮严重破损。与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠可见肾小球体积减小,基底膜增厚减轻,肾小囊壁上皮未破损或局部破损。Masson染色显示空白组小鼠肾小球基底膜正常。模型组小鼠上皮下大量嗜复红蛋白沉积,可见基底膜基质反应,肾小管空泡样脂肪变性,肾间质淋巴大量增生。与模型组比较,各给药组小鼠病变减轻,以参芪蛭龙汤高剂量组改善更加明显。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光增强,FcγRⅡB蛋白荧光减弱(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱(P<0.05),参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱,FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达升高,FcγRⅡB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达降低,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高,FcγRⅢA蛋白表达降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达升高,FcγRⅡB mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢAmRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05)。结论 参芪蛭龙汤对MN小鼠的治疗作用与改善肾组织病理改变,减少FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白的表达,增加FcγRⅡB蛋白表达有关,其中高浓度的参芪蛭龙汤效果更好。

慢性粒细胞白血病患者FcεRⅠγ链基因表达上调

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20例的外周血单个核细胞(PBMCs)的FcεRⅠγ基因表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-ΔCt×100%,计算FcεRⅠγ链的相对mRNA表达量。结果:CML患者PBMCs中FcεRⅠγ基因表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。FcεRⅠγ表达水平变化与病人外周血CD3+T细胞比例无相关性。结论:CML病人中FcεRⅠγ表达上升,提示FcεRⅠγ可能在一定程度调节CD3ζ链缺陷所带来的T细胞免疫异常。

CD64对新生儿败血症早期诊断的评估

目的观察新生儿败血症时中性粒细胞表面CD64(Fcγ-RⅠ)表达水平,探讨CD64对新生儿败血症早期诊断的意义。方法将48例住院新生儿患儿分为败血症组,局部感染组和非感染组进行血CD64的检测,并与C反应蛋白(CRP)进行比较。结果发现败血症组CD64的水平较局部感染组和非感染组均有显著升高(P<0.001),而当CD64取临界值为4 504分子数/细胞,其诊断新生儿败血症的敏感度为90.1%,特异度为100%。结论新生儿败血症时血中性粒细胞表面CD64表达水平明显增加,可考虑作为新生儿败血症早期诊断指标。

背根神经节神经元FcγRI介导急性和慢性关节痛

类风湿关节炎(RA)的关节痛常被认为由炎症引起。但有,很多抗炎药物的镇痛效果有限,提示存在炎症以外的其他致痛的机制。IgG的免疫复合物(IgG-IC)大量存在于RA病人的血清和受影响关节中,主要通过Fcγ受体(FcγRs)发挥作用。FcγRs包括4种亚型,FcγRI(即CD64)是唯一能结合单体和聚合型IgG的高亲和力受体。以往研究表明,IgG-IC/FcγRI信号介导关节炎的发病机制。本文探讨IgG-IC/FcγRI信号是否参与RA关节痛。结果:(1)ISH表明FcγRI在支配小鼠关节的背根神经节(DRG)神经元中表达。

慢性荨麻疹患者外周血中CD8^+CD28^-T细胞检测结果分析

目的:探讨CD8^+CD28^-T细胞在慢性荨麻疹患者致病机制中的作用。方法:收集临床慢性荨麻疹(CU)病例83例,同时设立对照组64例进行比较。应用ELISA法检测研究对象血清中抗Ig E抗体、抗FcεRⅠ抗体浓度,流式细胞仪检测外周血中CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD8^+CD28^-、CD4^+CD25^+T细胞比例,分析检测结果。结果:83名CU中,23例抗Ig E抗体为阳性,占27.7%(27/83);31例抗FcεRⅠ抗体为阳性,占37.3%(31/83)。CU患者外周血CD8^+T细胞比例、CD8^+CD28^-T细胞比例低于正常对照组(P<0.05),CD4^+/CD8^+比值、CD4^+CD25^+T细胞比例均高于对照组(P<0.05)。结论:CU患者机体外周血CD8^+CD28^-T细胞、CD4^+CD25^+T细胞比例与对照组相比存在差异,CD8^+CD28^-T细胞比例降低也可能是CU致病机制之一。

IgE在湿疹发病中的作用机制

免疫球蛋白E(IgE)在湿疹等许多自身过敏性疾病的发病机制中扮演重要角色。研究发现,IgE主要通过其在肥大细胞、嗜碱性细胞等细胞上的高亲和力受体FcεRⅠ及低亲和力受体FcεRⅡ(CD23)发挥作用,此外还能通过半乳糖凝集素-3信号通路活化肥大细胞和嗜碱性细胞,最终导致自身免疫性疾病的发生。本文对近期相关文献进行综述,对IgE在湿疹等自身免疫相关性疾病中发挥的作用和可能发病机制进行分析,以期为日后药物研发和临床工作提供指导。

炎性指标对儿童发热性疾病诊断临床意义分析

目的观察发热患儿血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)及CD64的水平,探讨其在儿童发热性疾病中的临床意义。方法以福建省立医院2010年9月至2011年9月住院的164例发热患儿为研究对象,采用回顾性分析方法,根据出院时的诊断分为细菌感染组、非细菌感染组(包括病毒及支原体)和风湿性疾病组。检测其血清CD64、PCT及CRP,并与对照组35例健康儿童比较。结果细菌感染组、非细菌感染组、风湿性疾病组及对照组患儿CD64值(分子数/细胞)分别为(4322.15±1107.44)、(1138±423.24)、(1252±517.84)、(1042.88±398.76);PCT值(μg/L)分别为(3.87±0.89)、(0.06±0.01)、(0.81±0.12)、(0.09±0.02);CRP值(mg/L)分别为(26.28±4.33)、(1.42±0.04)、(94.94±13.11)、(1.38±0.04)。细菌感染组CD64、PCT及CRP均明显升高;非细菌感染组CD64、PCT及CRP均无明显升高;风湿性疾病组CRP升高极为显著,而PCT仅轻度升高,CD64无明显升高。结论炎性指标CD64、PCT及CRP的检测在儿童发热性疾病的鉴别诊断中有重要意义。