牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达

利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。

核转录因子E2F-1和p27在大肠癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1和p27在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例大肠癌、20例正常大肠黏膜和30例大肠腺瘤E2F-1和p27的表达情况。结果 E2F-1在大肠癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。p27在正常大肠黏膜的阳性率明显高于大肠腺瘤和大肠癌。p27表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和p27的表达与大肠癌发生关系密切,可以作为肠癌发生、发展的生物学标志物。

维甲酸诱导基因G抑制肿瘤细胞增殖的分子机制研究

目的探讨维甲酸诱导基因G（RIG—G）抑制肿瘤细胞增殖的分子机制。方法应用转染实验、Western印迹法、免疫共沉淀和免疫荧光共定位等技术验证RIG—G蛋白与JAB1蛋白之间的相互作用，并研究RIG—G蛋白对JAB1蛋白功能的影响。结果RIG—G蛋白可以与JAB1蛋白发生相互作用，并影响JAB1蛋白在细胞内的定位和分布。实验发现，在NIH3T3细胞中单独转染JAB1时，JAB1蛋白在细胞核和细胞质内呈弥散分布，而当与RIG—G共同转染后，JAB1蛋白在细胞核内的含量明显减少，而改变为主要在胞质内分布，并与RIG—G蛋白发生部分共定位。此外，RIG—G蛋白还具有抑制JAB1对细胞周期抑制因子p27的辅助降解功能。结论RIG—G可以通过和JAB1的相互作用，使后者部分滞留在细胞质内，从而影响JAB1发挥正常功能，干扰其对p27的辅助降解，维持细胞内p27的稳定性，促进细胞退出增殖周期，抑制细胞增殖。