湖南牡丹根腐病病原菌的分离鉴定及其拮抗菌的筛选

【目的】引发牡丹根腐病的镰刀菌属真菌种类繁多,且病害症状类似,难以判断。为了探明引发湖南地区牡丹根腐病主要病原菌的种类,并为牡丹根腐病的诊断与生物防治提供理论依据。【方法】从湖南农业大学园林花卉基地采集患病牡丹植株,采用组织分离法分离纯化病原菌,采用柯赫氏法则检验病菌分离物的致病性;分别以形态学、分子生物学方法对致病菌进行鉴定;采用平板对峙法对14株前期从健康牡丹根茎部分离获得的内生细菌菌株进行抑菌性筛选。【结果】在对分离所获12株病原真菌分离物的致病性的检测中发现,其中的5株在PDA平板上的侧根变黑腐烂且其周围菌丝生长旺盛,其致病性均强;将此5株致病菌置于PDA平板上培养7 d后观察发现,其菌落呈圆形,颜色呈灰白色,气生菌丝较密集且呈革质胶状;致病菌菌丝中含有大量的大、小型分生孢子,大型分生孢子呈镰刀形,具有3~5个隔膜,小型分生孢子呈卵形或肾形,具有0~1个隔膜;厚垣孢子呈球形且多为间生状。结合运用分子生物学方法,基于ITS序列分析,构建了5株致病菌的系统发育树,5株分离物全部被鉴定为茄病镰刀菌Fusarium solani。平板对峙培养结果表明,14株内生细菌菌株中有9株能拮抗茄病镰刀菌,其中编号为MRX2-1的细菌菌株其拮抗效果最佳,达到了52.78%;基于16S rRNA基因序列对此株菌株的进一步分析结果表明,编号为MRX2-1的拮抗菌与Bacillus amyloliquefaciens(HM107808.1)聚于同一分支中,其相似度高达99%以上。【结论】初步鉴定结果表明,湖南地区牡丹根腐病的主要病原菌为茄病镰刀菌,最佳拮抗菌为解淀粉芽孢杆菌。

防治牡丹根腐病的有效药剂筛选

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,分别测定了咪鲜胺、醚菌酯、苯醚甲环唑、百菌清、多菌灵、代森锰锌等6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力。结果表明,6种药剂对病菌菌丝生长的EC50大小顺序为:咪鲜胺<多菌灵<代森锰锌<苯醚甲环唑<百菌清<醚菌酯,其中以咪鲜胺对牡丹根腐病病菌的菌丝生长抑制作用最强,EC50为0.200 mg/L;多菌灵、代森锰锌、苯醚甲环唑、百菌清依次减弱,醚菌酯的抑制菌丝生长的作用最小,EC50为33.98 mg/L。6种药剂对病菌孢子萌发的EC50大小顺序为:百菌清<咪鲜胺<苯醚甲环唑<多菌灵<代森锰锌<醚菌酯;其中以百菌清对牡丹根腐病菌的孢子萌发抑制作用最强,EC50为0.343 mg/L;咪鲜胺、苯醚甲环唑、多菌灵、代森锰锌依次减弱,醚菌酯抑制孢子萌发的作用最小,EC50为38.4 mg/L。

6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力测定

[目的]筛选出牡丹根腐病的有效防治药剂。[方法]在实验室条件下,采用菌丝生长速率法比较分析了6种药剂在10 mg/L质量浓度下对牡丹根腐病的相对抑制率,测定了6种杀菌剂对牡丹根腐病的室内毒力。[结果]在10 mg/L质量浓度下,99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的相对抑制率最高,为93.50%;其次是50%多菌灵可湿性粉剂的相对抑制率为89.63%;50%甲锌福美双对牡丹根腐病病原菌的相对抑制率最小,为20.00%。99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的毒力最强,EC50为0.002 7mg/L;其次是50%多菌灵可湿性粉剂,EC50为0.019 5 mg/L;复生甲·锌·福美双可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的毒力最弱,EC50为19.134 6 mg/L。[结论]为牡丹根腐病大田防治的药剂筛选提供了理论依据。

牡丹根腐病拮抗菌的分离与鉴定

以实验室保藏的茄病镰孢菌(Fusarium solani)为靶标菌进行平板对歭实验,在多年生牡丹根腐病害发病植株根际土壤中,筛选3株具有明显根腐病拮抗性能菌株,分别命名为菌株R1、R9、R15.根据其形态特征,初步将菌株R1鉴定为木霉属(Trichoderma sp.)真菌;结合菌落形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析,将菌株R9和菌株R15鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis).本研究丰富了牡丹根腐病害生物防治资源,为植物病害的生物防治提供了有力的理论支持.

牡丹根腐病拮抗菌MRX2-1的鉴定及发酵条件优化

[目的]牡丹根腐病是主要由茄病镰刀菌(Fusarium.solani)引起的土传真菌病害,该病严重危害牡丹产业的发展。本文旨在获得对牡丹根腐病致病菌具有较强拮抗作用的内生细菌菌株,并进一步优化内生菌发酵条件,提高菌株的活菌量。[方法]采用平板对峙的方法验证菌株MRX2⁃1的抑菌效果;通过形态特征观察、生理生化试验测定及16S rDNA序列对其进行鉴定;采用单因素试验并结合Box⁃Behnken试验的原理设计正交试验,以OD_(600)值为响应值,对菌株MRX2⁃1的发酵条件进行优化。[结果]试验发现菌株MRX2⁃1对茄病镰刀菌的抑制率达到52.78%±0.43%;初步将菌株MRX2⁃1鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);菌株的最佳发酵条件:接种量2%、pH 7.0、温度34℃。[结论]菌株MRX2⁃1对茄病镰刀菌具有良好的拮抗作用;建立了更加优化的牡丹根腐病拮抗菌发酵体系,优化后的OD_(600)值达到1.879,与预测值的相对误差仅为2.59%。

一种番茄根结线虫人工培养和保存的优化方法

根结线虫病在世界范围内对粮食蔬菜水果产量影响严重,其人工培养具有依赖寄主植物的局限性。从山东省泰安市房村镇的日光温室中采集被根结线虫侵染严重的番茄根系,用机械捣碎-过筛喷淋法从根系样品中分离根结线虫和卵,以牡丹根腐病镰刀菌(Fusarium solani)制作二重培养基,分别接种根结线虫悬液与卵悬液培养。结果显示,接种线虫悬液与卵悬液的平板分别在第三周与第四周线虫密度达到最高峰,培养基中虫口密度分别为2 300头/ml与2 000头/ml。置培养平板于15℃条件下存放,5个月后培养基内仍有可供继代繁殖的活虫体。该优化后的方法脱离了寄主植物束缚,简化了培养过程,具有高效繁殖和长期保存根结线虫的优点。