响应面法优化乙醇提取牡丹花总黄酮工艺

【目的】采用响应面分析法对牡丹花总黄酮提取工艺进行优化,为其开发利用提供技术参考。【方法】以牡丹花为原料,在单因素试验基础上,选择乙醇体积分数(A)、液料比(B)、提取时间(C)为影响因素,牡丹花总黄酮提取率(Y)为响应值,采用Box-Behnken试验设计方法,研究各自变量及其交互作用对牡丹花总黄酮提取率的影响。【结果】牡丹花总黄酮提取率对乙醇体积分数、液料比、提取时间的二次多元回归方程为:Y=5.81+0.29A+0.13B+0.30C+0.24AB+0.45AC+0.24BC-0.50A2-1.42B2-0.61C2(R2=0.9846),该模型拟合程度较好。其中,乙醇体积分数、提取时间及其二者的交互作用对牡丹花总黄酮提取率有极显著影响(P<0.01),乙醇体积分数与液料比、液料比与提取时间的交互作用对提取率有显著影响(P<0.05)。乙醇提取牡丹花总黄酮的最佳工艺条件为:乙醇体积分数55%、液料比41∶1(m L/g)、提取时间45 min,此条件下牡丹花总黄酮提取率为6.08%,与理论预测值(5.96%)的相对误差为2.01%。【结论】通过响应面建立的牡丹花总黄酮提取工艺模型拟合效果较好,可用于实际预测。优化后的提取工艺具有所需试剂少、提取时间短、易操作等优点。

牡丹花总黄酮对痛风性肾病大鼠NLRP3炎症小体及炎症因子表达的影响

目的:探究牡丹花总黄酮对大鼠痛风性肾病模型保护作用的可能机制。为治疗痛风性肾病的药物研究提供科研数据支撑。方法:使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠痛风性肾病模型,大鼠随机每12只分为空白组、模型组、别嘌醇组(42 mg·kg^(-1))、阳性药痛风舒片组(600 mg·kg^(-1))、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组(TFPF,260、130、65 mg·kg^(-1));酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肾脏组织匀浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-1β含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织细胞形态变化;原位末端标记法(TUNEL)观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法观察肾脏NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织中NLRP3、Caspase-1、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-18含量均显著增加(P<0.01),模型组大鼠肾脏NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IL-1β表达量均显著升高(P<0.01),肾组织细胞呈现胞质肿胀、细胞膜破裂,细胞核固缩断裂数量增加,模型组大鼠肾组织细胞TUNEL染色阳性率显著升高(P<0.01),大鼠肾组织匀浆中IL-1β、TGF-β1的含量均显著上升(P<0.01);与模型组比较,牡丹花总黄酮高、中剂量组可不同程度的降低大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18含量(P<0.05,P<0.01),牡丹花总黄酮高剂量组MCP-1含量明显降低(P<0.01),牡丹花总黄酮高、中剂量组明显降低肾组织匀浆中TGF-β1含量(P<0.05,P<0.01),牡丹花总黄酮中剂量组肾组织匀浆中IL-1β含量显著降低(P<0.01);HE染色显示牡丹花总黄酮各剂量组可不同程度的改善肾小管上皮细胞状态,减轻胞质肿胀,细胞核固缩的数量;降低肾组织细胞TUNEL染色阳性率(P<0.01),肾脏细胞DNA损伤减少;抑制肾脏组织细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:牡丹花总黄酮对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用与抑制炎症因子分泌相关,其抗炎作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路与NLRP3/Caspase-1通路的活化,从而下调IL-1β、IL-18等炎性因子表达、成熟及释放,遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生,从而逆转痛风性肾病肾脏的炎症损伤。

牡丹花总黄酮对痛风性肾病小鼠模型的肾脏保护作用

目的:探究牡丹花总黄酮对痛风性肾病小鼠模型肾功能的保护作用。方法:84只KM小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、别嘌醇62.5 mg/kg组、痛风舒片900 mg/kg组、牡丹花总黄酮130、260、520 mg/kg组;除正常对照组外,其余各组均灌胃给予100 mg/kg腺嘌呤和200 mg/kg氧嗪酸钾的混悬液复制痛风性肾病小鼠模型(1次/d,给药体积15 mL/kg,连续21 d),正常对照组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液;造模第7 d开始各组灌胃给予相应药物或纯水,连续给药14 d。试验开始每5 d记录一次小鼠体质量。末次给药2 h后处死小鼠,计算小鼠肾脏、胸腺的脏器指数,ELISA法检测小鼠血清UA、Cr含量;检测肝脏组织匀浆中黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)活性;HE染色法观察小鼠肾脏的病理变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠体质量减轻,肾脏指数及血清中UA和Cr含量,肝脏组织匀浆中XOD和ADA活性均显著升高(P<0.01),肾组织显著损伤(P<0.01);与模型对照组相比,牡丹花总黄酮各剂量组小鼠精神状态明显改善,小鼠肾脏指数显著降低(P<0.01),小鼠体质量及胸腺指数明显升高(P<0.05),血清UA、Cr含量及肝匀浆XOD、ADA活性明显降低(P<0.05),肾脏组织状态明显改善(P<0.05)。结论:牡丹花总黄酮可有效降低小鼠痛风性肾病模型的尿酸水平,减轻肾脏组织损伤,具有肾脏保护作用。