HPLC法同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的建立能同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的HPLC分析方法。方法Capcell Pak UG C_(18)色谱柱分离;蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷检测波长分别设定为334、281、320 nm;柱温为室温;进样体积为10μL;以乙腈为流动相A,1 mL·L^(−1)磷酸溶液(三乙胺调节pH至6.0)为流动相B,梯度洗脱。结果蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度分别在0.0245~2.4500、0.0457~4.5700、0.0474~4.7400μg·mL^(−1)范围内线性良好;平均回收率分别为100.8%、99.9%、101.4%;精密度和重复性RSD值(n=6)均在5.0%以内;供试品溶液在24 h内稳定。结论此方法具有前处理简单、分析时间短和检测结果准确等优点,适用于冠心安口服液制剂的质量控制。

超声改性对蓝莓果胶与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷相互作用的影响

本文以不同超声处理(688、1376、2063 W/cm^(2),10、20、30 min)对蓝莓中水溶性果胶、螯合性果胶、碳酸钠可溶性果胶进行超声改性,并探讨改性果胶结构与果胶-矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)相互作用的关系。实验结果表明,超声改性使果胶与C3G之间的相互作用增强。超声功率2063 W/cm^(2)处理10 min后,与未经超声改性相比,三种果胶均表现出与C3G的最大结合量(提高到约2~6倍),但长时间超声(20~30 min)不利于改性果胶与C3G的相互作用。经超声改性后,果胶-C3G复合物的粒径变小,Zeta电位增加,物理稳定性提高。在三种不同的果胶样品中,超声处理引起了果胶分子量的降低和甲基酯化,促进了支链结构的降解,提高了游离羧基的数量,并增加了结构网络空隙,超声处理对果胶结构特性的改变促进了果胶与C3G之间的相互作用。

2种黑豆球蛋白与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的相互作用研究

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)在不同pH值环境中的主要存在形式不同,其抗氧化能力也有所差异。黑豆蛋白是一种常见的膳食蛋白,具有作为不稳定生物活性化合物载体的潜力,了解黑豆球蛋白与C3G的相互作用机制有利于它们在食品体系中的应用。通过多种光谱学分析和分子对接实验研究了pH值为2.0、5.0和7.0时黑豆β-伴大豆球蛋白(7S)和大豆球蛋白(11S)与C3G的相互作用及其对C3G氧化稳定性和抗氧化能力的影响。研究结果表明,pH值为2.0和5.0时,C3G与7S和11S结合不仅导致Tyr残基周围的疏水环境减少,极性增加,而且使7S和11S中α-螺旋增加,β-折叠比例下降。pH值为7.0时,C3G的存在使7S和11S中α-螺旋和β-折叠的占比呈增加趋势,但β-转角比例降低。此外,C3G与7S和11S结合是一个放热过程,在不同pH值条件下,C3G与7S和11S主要通过氢键和范德华力相互作用使7S和11S静态荧光猝灭。7S和11S均在pH值为7.0时对C3G亲和力最强。分子对接结果表明,7S上的GLU229、ARG356和PRO101残基,11S上的ARG161、VAL162、ILE171和THR176残基在与C3G结合中起关键作用。在不同pH值条件下,7S、11S与C3G结合后均显著增强了C3G的氧化稳定性和抗氧化能力。

黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside,Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%,Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3G的安全性实验表明小鼠给药后14 d精神状态良好,对小鼠的死亡率、体重、脏器系数、血常规和病理均无显著影响。结论通过组合柱层析法对BHSA进行分离纯化,成功获得了高纯度的Ma-3G单体。这种方法为工业应用中高效、低成本地分离黑果小檗果实中的花色苷提供了一种实用的解决方案。安全性实验表明黑果小檗果实中Ma-3G可引起急性毒性的毒性剂量范围>2000 mg/kg,为后期体内药理实验奠定研究基础。

高效液相色谱法测定黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷方法的建立

本试验建立一种高效液相色谱法测定黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法。结果表明:本方法可有效分离目标色谱峰。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在0.20~50.0μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(R^(2)为0.999894),精密度RSD为0.1%,重复性RSD为0.2%~1.3%,检出限和定量限分别为0.1 mg/kg、0.3 mg/kg。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷低、中、高浓度回收率分别为96.5%、98.4%、100.7%。该方法线性良好,准确度和精密度高,重复性和回收率较好,适用于黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的测定。

高糖高脂环境下抑制自噬对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护胰岛β细胞损伤的影响

目的:探究高糖高脂(HGHF)环境下矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对胰岛β细胞损伤的影响及作用机制。方法:采用含10、20、30、40、50μmoL/L C3G的培养液处理胰岛β细胞24h,以未经处理的胰岛β细胞作为对照组,CCK-8法检测各处理组细胞活力;使用含25mmoL/L葡萄糖与0.5mmoL/L棕榈酸的培养液建立HGHF环境,并添加含10、20、30、40、50μmoL/L C3G处理胰岛β细胞24h,以未经处理的胰岛β细胞作为对照组,25mmoL/L葡萄糖与0.5mmoL/L棕榈酸诱导的胰岛β细胞作为HGHF组,CCK-8法检测各处理组细胞活力。实验分为对照组、HGHF组、HGHF+C3G组、HGHF+C3G+3-MA组,进行相应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测各组细胞活性氧(ROS)水平,比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平,ELISA法测定各组细胞胰岛素分泌情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞中自噬相关基因5(Atg5)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1的mRNA表达水平,蛋白质免疫印记(Western blot)测定各组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化型半胱天冬酶-3(Cleaved Caspase-3)的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,不同浓度(10、20、30、40、50μmoL/L)C3G组胰岛β细胞活力升高(P<0.05),HGHF组胰岛β细胞活力下降(P<0.05);与HGHF组比较,在HGHF环境下加入20、30、40、50μmoL/L C3G能够显著提高胰岛β细胞活力(P<0.05)。与HGHF组比较,HGHF+C3G组细胞活力升高(P<0.05),ROS含量和MDA含量下降(P<0.05),SOD活性和GSH-Px含量上升(P<0.05),胰岛素分泌水平增加(P<0.05),Atg5、LC3、Beclin-1的mRNA相对表达量上调(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白相对表达量上调(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3的蛋白相对表达量下调且Bcl-2蛋白相对表达量上调(P<0.05)。而在HGHF环境下添加C3G处理的同时使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用,C3G对HGHF环境下胰岛β细胞的保护作用消失。结论:C3G对HGHF环境下的胰岛β细胞起到保护作用,其能够提高细胞活力,抑制氧化应激损伤,该作用可能与促进自噬相关。

牡荆素-4'-O-葡萄糖苷在大鼠体内的首关效应研究

目的:研究牡荆素-4′-O-葡萄糖苷(VG)在大鼠体内的首关效应及其机制,为其新药剂型研究提供依据。方法:10只SD大鼠分为肝门静脉给药组和股静脉给药组,分别于肠系膜上静脉iv VG、股静脉灌注VG,通过测定VG在肝脏的AUC计算代谢率;15只SD大鼠分为胃灌注组、肠灌注组和肝门静脉给药组,分别于胃底、十二指肠灌注VG及肠系膜上静脉iv VG,通过测定VG在胃、肠的AUC计算代谢率;15只SD大鼠分为肠灌注组、股静脉给药组和生理盐水组,在给药前10 min,前2组大鼠灌注细胞色素P_(450)(CYP)3A与P糖蛋白(P-gp)的底物维拉帕米注射液(60 ml/kg),生理盐水组大鼠灌注等体积生理盐水,之后按照上述方法给药,考察维拉帕米对VG肠吸收的影响。结果:VG在肝脏、胃、肠道的代谢率分别为54.9%、1.7%、91.9%;灌注维拉帕米后,肠灌注组大鼠VG的AUC表现出轻微的增加趋势。结论:肝、肠首关作用是导致VG生物利用度低的主要因素,初步判断VG是肠道CYP 3A和/或P-gp的底物。

牡荆素-4″-O-葡萄糖苷大鼠体内药动学研究

目的:阐明山楂叶活性成分牡荆素-4″-O-葡萄糖苷在大鼠体内药物特征。方法:采用反相高效液相色谱法进行测定,牡荆素-4″-O-葡萄糖苷多剂量及多途径给药后大鼠血浆中含量。结果:静脉给药牡荆素-4″-O-葡萄糖苷与口服相比,静脉给药牡荆素-4″-O-葡萄糖苷在大鼠血浆中药-时曲线的符合三室模型,口服给药牡荆素-4″-O-葡萄糖苷在大鼠血浆中药-时曲线的符合二室模型。在大鼠体内360 min内基本消除,符合非线性动力学过程行为。结论:实验首次建立了HPLC法研究山楂叶单体成分牡荆素-4″-O-葡萄糖苷在大鼠体内药代动力学。

HPLC法测定不同采收期承德产山里红叶牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量

目的:采用高效液相色谱(HPLC)法测定承德地区不同采收期山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量。方法:色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:0.1%甲酸水溶液-乙腈-四氢呋喃溶液,梯度洗脱;检测波长:340nm;流速1.0ml/min;柱温30℃。结果:牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的线性范围是0.001-0.16mg/ml;平均加样回收率为100.2%(RSD=2.8%);5-10月承德不同产地山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量均值分别为滦平县3.00mg/g,双桥区4.00mg/g,承德县2.84mg/g。结论:承德地区山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量在8月份达到最高,为最佳采收期,以承德市双桥区产的山里红叶含量最高,为最佳产地。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制动力学

通过超滤-高效液相色谱、酶动力学以及分子对接等方法研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制的机制。结果表明,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷以可逆非竞争性的方式抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性。此外,荧光猝灭分析结果表明,在疏水作用力驱动下,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷可与两种酶结合生成复合物。分子对接结果显示,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷通过氢键与疏水作用力与α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的关键氨基酸残基相互作用,其结合能分别为-7.8 kcal/mol和-9.8 kcal/mol。本研究为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为功能性膳食食品中α-淀粉酶/α-葡萄糖苷酶的潜在抑制剂的开发提供了新思路。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对水中丙溴磷的光降解抑制效应

为明确丙溴磷在水中的光降解行为和黄酮类化合物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对丙溴磷光降解作用效应和机制,研究了高压汞灯光照下矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对不同初始浓度丙溴磷光降解的影响,分别通过PNDA捕获羟基自由基和离子色谱法研究了丙溴磷光降解过程中羟基自由基和溴离子含量变化情况,并利用LC-MS-MS确定了丙溴磷光降解的初级产物。结果表明:高压汞灯光照下,3种浓度丙溴磷(5、25和50μmol·L^(-1))的光降解半衰期分别为8.97、12.36和13.15 min;加入摩尔浓度比1∶5的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后,丙溴磷的光降解半衰期分别延长了1.65倍、3.93倍和5.71倍。丙溴磷光降解过程中产生了羟基自由基,加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后羟基自由基含量骤减;丙溴磷光降解反应体系中丙溴磷的降解摩尔量与溴离子产生摩尔量呈1∶1关系,而加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后,溴离子产生摩尔量显著减少。丙溴磷初级光降解产物是O-(2-氯苯基)-O-乙基-S-丙基-硫代磷酸酯,添加矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后不改变丙溴磷的光降解路径。研究结果将有助于明确丙溴磷在环境中的行为,尤其是环境中的黄酮类化合物对于丙溴磷光降解的影响效应,从而为评估丙溴磷使用后的潜在环境安全风险提供依据。

HPLC测定山楂叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁、金丝桃苷的含量

目的:用高效液相法同时测定山楂叶中牡荆素-4〃-O-葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁、金丝桃苷的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱:Sepax HP C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相:A为乙腈-四氢呋喃(20:1),B为0.5%甲酸溶液,采用梯度洗脱;0～10min,A为14%～17%;10～26min,A为17%～18%;26～28min,A为18%～14%;检测波长:360nm,流速:1.0mL/min;柱温:32℃。结果:该方法加样回收率牡荆素-4″-O-葡萄糖苷:99.59%(RSD=0.50%),牡荆素鼠李糖苷:99.57%(RSD=0.96%),牡荆素:98.70%(RSD=1.10%),芦丁:99.35%(RSD=1.16%),金丝桃苷:99.28%(RSD=0.88%)。结论:该方法准确可靠,重现性好,可用于山楂叶的质量控制。

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g)是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单核白血病细胞(Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1)炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g(纯度>96.5%)。用不同质量浓度(0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL)Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS(质量浓度50 ng/mL)与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,用定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、Toll-样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的mRNA表达水平,用Western blot蛋白免疫印迹法检测TLR4、NF-κB p65、核因子κB抑制因子(inhibitor of NF-κB,IκBα)蛋白表达水平。结果表明,与溶剂对照组相比,LPS诱导的THP-1细胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA相对表达量和释放水平可被不同质量浓度Cy-3-g显著抑制(P<0.05、P<0.01、P<0.001),在LPS作用下,质量浓度0.25、0.50μg/mL Cy-3-g能够显著促进IL-10 mRNA表达(P<0.01、P<0.001),质量浓度0.10、0.25、0.50μg/mL Cy-3-g能够显著促进IL-10释放(P<0.05、P<0.01、P<0.001),但是不同质量浓度Cy-3-g对LPS诱导的细胞IL-8 m RNA表达水平和释放水平的促进作用无显著差异(P>0.05)。质量浓度0.25、0.50μg/m L Cy-3-g能够显著抑制TLR4和NF-κB p65的m RNA和蛋白表达(P<0.05、P<0.001、P<0.01),同时能够抑制IκBα和NF-κB p65的磷酸化,并抑制LPS对IκBα的降解作用。与溶剂对照组相比,NF-κB的特异性抑制剂Bay11-7082可高度显著下调LPS诱导的THP-1细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放水平(P<0.001),但是与质量浓度0.50μg/mL Cy-3-g联合使用时无协同抑制效果(P>0.05)。综上,黑米花色苷Cy-3-g能够对LPS诱导的THP-1单核细胞炎症损伤起到保护作用,其机制可能是下调TLR4/NF-κB介导的信号通路。

HPLC法测定板蓝根中落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷

目的建立板蓝根药材抗病毒活性成分落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷(直铁线莲宁B,clemas-tanin B)的定量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher-C18柱,流动相:甲醇-乙腈-水(24∶1∶75),体积流量:1.0 mL/min;紫外检测波长:280 nm。结果测定了板蓝根主要产地药材中落叶松脂素-4,4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷的量,平均质量分数为0.041%,加样回收率为98.8%,RSD为0.60%。结论本方法简便、灵敏、结果可靠,可作为板蓝根药材质量控制的定量方法。

花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用

目的探讨从红蓼成熟果实中分离出来的花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人体肿瘤细胞的增殖抑制作用。方法用结晶紫染色法检测花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人胃癌MGC细胞、人肝癌HepG-2细胞和人盲肠癌Hce-8693细胞的增殖抑制作用。结果花旗松素和3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在1～500μg/mL质量浓度范围内对MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞均有一定的生长抑制作用,随着剂量的增大和作用时间的延长,呈较好的剂量-时间-效应关系;同等条件下,花旗松素比3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的抑制作用强。结论花旗松素与3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均有体外抗肿瘤活性,能抑制MGC细胞、HepG-2细胞和Hce-8693细胞的增殖。

构树叶中牡荆素、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量测定

[目的]测定构树叶中牡荆素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量。[方法]采用HPLC色谱法,以无水甲醇-浓度1%乙酸(30∶70,V/V)为流动相3,59 nm为检测波长,测定构树叶中牡荆素的含量;以无水甲醇-浓度0.05%磷酸(40∶60,V/V)为流动相,324 nm为检测波长,测定芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量。[结果]牡荆素在0.056～0.488μg/ml范围内线性关系较好,相关系数R=0.999 2:平均回收率为99.2%,RSD为1.42%;芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷在1.808～4.068μg/ml范围内线性关系良好,相关系数R=0.999 8。平均回收率为100.9%,RSD为1.58%。[结论]该方法简便、分离效果好,可用于构树叶质量标准的制订。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力以及一氧化氮(nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G(6.25~25.00μmol/L)能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低(P<0.05)。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放(P<0.05),显著增加SOD和GSH-Px活力(P<0.05)。此外,与空白对照相比,400μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调(P<0.05),而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调(P<0.05);而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论:C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。

基于活性成分和α-葡萄糖苷酶抑制作用的组织培养牡荆遗传稳定性评价

目的评价组织培养牡荆的遗传稳定性。方法考察4种溶剂对牡荆叶总黄酮的提取效果;采用高效液相色谱(HPLC)法测定牡荆素含量,并测试牡荆叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及动力学曲线。结果不同溶剂对牡荆叶活性成分提取得率从高到低依次为酸性乙醇(pH 1.33)、70%乙醇溶液、丙酮、乙酸乙酯。以酸性乙醇(pH 1.33)为溶剂的组织培养和野生牡荆叶中总黄酮含量以鲜重计分别为62.79 mg/g和60.35 mg/g,牡荆素含量以鲜重计分别为132.20μg/g和126.12μg/g,提取物对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)分别为1.41 mg/mL和1.37 mg/mL。动力学曲线分析表明,组织培养和野生牡荆叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制类型均为可逆性抑制。结论牡荆叶提取物对α-葡萄糖苷酶有较强抑制作用,且组织培养和野生牡荆叶活性成分相当,组织培养牡荆遗传稳定性较好。

HPLC法测定不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的:建立黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定方法,测定5个不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。方法:采用HPLC法测定黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,色谱柱采用Phenomenex LunaSu C18柱(250mm×4.60mm,5μm);流动相A相为0.5%磷酸溶液,B相为水-乙腈(50:50),进行梯度洗脱;流速0.8mL/min;检测波长520nm;柱温30℃;进样量10μL。结果:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准曲线回归方程为:Y=2×107X-33120(r=0.9998),在0.1041～1.041μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为92.4%、92.5%和95.5%,不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量范围为5.263～12.829mg/g。结论:所用方法简便、准确,可用于不同产地黑豆皮的质量控制。