复合酶解提取牡蛎糖胺聚糖及其降血糖活性

以福建牡蛎为原料,采用单因素试验和响应面法优化试验确定牡蛎糖胺聚糖复合酶解提取的工艺条件,并对其α-葡萄糖苷酶抑制活性进行研究。结果显示,当料液比为1∶15(g/mL)、起始pH8.0、复合酶添加量2.20%、复合酶质量比(中性蛋白酶∶胰蛋白酶)1∶1.20、酶解温度50℃、酶解时间4 h时,可以达到对牡蛎糖胺聚糖最佳的提取效果,提取率为(0.71±0.02)%。体外α-葡萄糖苷酶的抑制结果显示,牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用在0.2~1.0 mg/mL时呈正相关,当牡蛎糖胺聚糖样品浓度为1.0 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率可达到42.65%,表明其具有一定的降血糖功效。

牡蛎糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)对Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。方法:采用巨噬细胞体外培养的方法,观察每组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、胸腺指数和脾指数。结果:随O-GAG浓度的增加,腹腔巨噬细胞吞噬能力显著增强,与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。胸腺指数ACV和O-GAG低、中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。脾脏指数O-GAG中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论:牡蛎糖胺聚糖能显著提高Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠胸腺指数和脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力,具有免疫增强作用。

近江牡蛎糖胺聚糖的酶解提取及其抗肿瘤活性研究

探讨酶解法提取近江牡蛎糖胺聚糖(SG1)的条件,结果表明:先用枯草杆菌中性蛋白酶1.0%(质量分数),pH7.0,50℃酶解5h,再加胰蛋白酶1.0%(质量分数),pH7.8,50℃酶解5h效果最佳。粗提物SG1的得率为2.40%,总糖胺聚糖含量为13.6%,总糖含量为61.3%。采用四氮唑蓝还原法(MTT法)研究粗提物SG1对人宫颈癌细胞(Hela细胞)的体外抗肿瘤活性,结果显示:500μg/mL剂量组与600μg/mL剂量组48h时的抑制率分别为43.1%(P<0.05),55.8%(P<0.05),近江牡蛎糖胺聚糖粗提物SG1具有较明显的抗肿瘤活性,存在一定的量效关系。

牡蛎糖胺聚糖小鼠体内抗病毒作用的实验研究

目的研究牡蛎糖胺聚糖（O-GAG）对Ⅰ-型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染小鼠的治疗作用以及对免疫功能的影响。方法采用HSV-1感染小鼠模型和细胞培养的方法，通过观察小鼠的生存时间、死亡率、胸腺和脾指数以及巨噬细胞的吞噬功能，分析O-GAG的抗病毒作用。结果O—GAG10～40mg·kg^-1能显著降低HSV-1感染小鼠的死亡率，延长其存活时间，并明显提高病毒感染小鼠的胸腺指数和脾指数；增强巨噬细胞吞噬能力。结论牡蛎糖胺聚糖对Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠有一定的治疗作用并能提高小鼠的免疫功能。

牡蛎糖胺聚糖对损伤的血管内皮细胞功能的影响

采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,复制过氧化氢(H2O2终浓度为50μg/ml)诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型,应用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,采用化学比色法分别检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果显示,与正常对照组相比,过氧化氢损伤的血管内皮细胞其GSH-PX活性、T-AOC、NO含量及T-NOS活性均明显降低(P<0.01),iNOS活性明显增加(P<0.01)。与损伤模型组相比,O-GAG各浓度保护组(50、100和200μg/ml)细胞的GSH-PX活性、T-AOC、NO含量及T-NOS活性均明显升高(P<0.01),而iNOS活性则显著降低(P<0.01)。表明牡蛎糖胺聚糖可以提高受损血管内皮细胞的抗氧化能力以及合成释放NO的功能,对H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤有保护作用。

牡蛎糖胺聚糖对血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的：探讨牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)对血管内皮细胞损伤的保护作用,观察它对损伤的血管内皮细胞内一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。方法：采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,建立过氧化氢(H_2O_2)诱导的内皮细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)比色法观察牡蛎糖胺聚糖对血管内皮细胞增殖活性的影响,硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法和硝基苯肼法分别检测细胞内NO的含量、细胞培养液内MDA的含量和LDH的活性。结果：模型组较正常对照组细胞增殖活性明显降低(P＜0．01)。与模型组相比,经牡蛎糖胺聚糖预处理的各保护组(除10μg/ml)细胞增殖活性明显增加(P＜0．05,P＜0．01),NO的含量增加,MDA的含量和LDH的活性降低(P＜0．01)。牡蛎糖胺聚糖(100、200μg/ml)对于正常的内皮细胞有促增殖作用(P＜0．05)。结论：牡蛎糖胺聚糖对氧化损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能与增加细胞NO含量、减少MDA生成和LDH释放有关。牡蛎糖胺聚糖对正常血管内皮细胞在一定剂量范围内有促增殖作用。

近江牡蛎糖胺聚糖毒理学的初步评价

目的:研究近江牡蛎糖胺聚糖作为保健食品使用的安全性。方法:采用急性毒性实验、遗传毒性实验(Ames实验、小鼠骨髓细胞微核实验、小鼠精子畸形实验)进行毒理学研究与评价。结果:小鼠经口最大耐受剂量(MTD)均大于20.0g/kg;3项遗传毒性实验的结果皆为阴性,未显示出致突变性。结论:近江牡蛎糖胺聚糖急性毒性分级属无毒级,无遗传毒性。

牡蛎糖胺聚糖对H_2O_2所致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的了解牡蛎糖胺聚糖（O-GAG）对过氧化氢所致血管内皮细胞（VECs）氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,建立H2O2诱导的血管内皮细胞损伤模型,实验分为正常对照组、损伤模型组（过氧化氢50 mg/L）、肝素组（肝素200 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG保护组（O-GAG 10、50、100、200、400、800 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG对照组（O-GAG 100、200、400 mg/L）。采用噻唑蓝（MTT）比色法观察O-GAG对血管内皮细胞增殖活性的影响,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与正常对照组相比,损伤模型组细胞的增殖活性和SOD的活活性均明显降低（F=137.23、135.40,q=5.26、5.34,P〈0.01）,而O-GAG对照组（100、200 mg/L）的细胞增殖活性明显增高（q=3.40、3.81,P〈0.05）。与损伤模型组相比,O-GAG各保护组（50-800 mg/L）细胞增殖活性明显增加（q=3.40-5.23,P〈0.05、0.01）,SOD活性明显升高（q=4.46-5.07,P〈0.01）。结论O-GAG对过氧化氢所致血管内皮细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与增加细胞内SOD活性有关。

壳聚糖复合物对近江牡蛎糖胺聚糖中镉的脱除

利用凹土-壳聚糖复合物对近江牡蛎糖胺聚糖中的镉进行脱除。考察酶解液的pH值、振荡时间、复合物添加量和振荡速率对脱镉率和牡蛎糖胺聚糖回收率的影响,并以脱镉率和牡蛎糖胺聚糖回收率为指标,通过响应面法优化脱镉条件。结果表明:壳聚糖复合物脱除牡蛎中镉的最优条件是:pH 7.2、振荡时间30 min、添加量6.4 mg/mL、振荡速率170 r/min,此时镉脱除率为73.7%,糖胺聚糖回收率为44.1%。表明凹土-壳聚糖复合物能有效地脱除近江牡蛎糖胺聚糖中的镉,并且对糖胺聚糖的回收率影响不大。

近江牡蛎糖胺聚糖的抗氧化活性及其稳定性

以近江牡蛎全脏器为原料,通过酶解法得到近江牡蛎糖胺聚糖,通过测定羟自由基(·OH)和1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)清除率探讨其抗氧化能力,并分析不同温度、pH、紫外照射、NaCl浓度以及模拟胃肠道消化对近江牡蛎糖胺聚糖抗氧化稳定性的影响。结果表明,近江牡蛎糖胺聚糖具有较好的体外抗氧化活性,DPPH·的清除率达到79.15%,·OH清除率达到了100.00%。近江牡蛎糖胺聚糖在温度为40~80℃、偏酸环境、紫外线照射下、或Na^+存在的条件下仍保持较好的抗氧化活性。经模拟胃肠消化后,糖胺聚糖但仍具有一定的清除能力,DPPH·清除率为26.43%,·OH清除率为10.07%。因此,近江牡蛎糖胺聚糖具有较好的抗氧化能力,是一种相对稳定的天然抗氧化剂。

近江牡蛎多糖口服液的研制

研究用近江牡蛎多糖制作营养口服液的工艺。通过对近江牡蛎酶解、牡蛎多糖精制、酵母发酵脱腥与正交试验优化,确定最佳口感配方为酵母粉2%(处理30 min),牡蛎多糖添加量5 mg/mL,蜂蜜7%,柠檬酸0.15%,制成具有一定保健功能、口感风味良好的牡蛎多糖口服液。

近江牡蛎糖胺聚糖体内外抗肿瘤作用研究

研究近江牡蛎糖胺聚糖体内外抗肿瘤活性。采用MTT法测定近江牡蛎糖胺聚糖(CG)对K562、CNE-2Z、Hela细胞增殖的影响;采用动物体内移植性肿瘤模型,观察CG对S180实体瘤和艾氏癌腹水型(EAC)、白血病L1210腹水瘤的影响。实验显示近江牡蛎糖胺聚糖级分CG、CGIa和CGIIa均可以抑制K562、CNE-2Z、Hela细胞的生长(p<0.05),其中CGIa对肿瘤细胞增殖的抑制作用最强,72 h时对K562、CNE-2Z细胞增殖抑制作用的IC50分别为1.95、7.36 mg/L;且对抗肿瘤药物5-Fu具有增敏作用。CG对移植性S180肉瘤抑瘤率可达到44.66%,与CTX合用后可提高至67.96%,且对CTX损伤的小鼠免疫功能有一定的修复作用;CG与CTX合用后能延长L1210腹水瘤小鼠和荷EAC小鼠的生命,其生命延长率分别高达50.27%和55.27%。表明近江牡蛎糖胺聚糖具有体内外抗肿瘤活性,其作用可能与直接细胞毒作用及增强机体免疫功能有关。

近江牡蛎糖胺聚糖的免疫调节活性研究

以近江牡蛎全脏器为原料提取近江牡蛎糖胺聚糖,对其理化性质和免疫调节活性进行研究。采用柱层析法分离纯化近江牡蛎糖胺聚糖得到纯化级分;用高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)分析其理化性质;采用小鼠体内注射环磷酰胺(CTX)法建立免疫抑制动物模型,测试其对小鼠的非特异性免疫、体液免疫的影响;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞免疫和自然杀伤细胞(NK细胞)活性;采用ELISA法检测肿瘤坏死因子TNF-α、干扰素IFN-γ、小鼠白细胞介素IL-2的含量;Griess法测定NO含量。结果表明近江牡蛎糖胺聚糖纯化级分CGIa、CGIIa是由糖醛酸、氨基葡萄糖按一定比例构成,含有硫酸基,相对分子量分别为5.17×105 Da、2.64×105 Da,IR分析显示,CGIa和CGIIa都具有糖胺聚糖的特征吸收。牡蛎糖胺聚糖对正常小鼠免疫器官指数、抗体生成数和血清溶血素、细胞免疫、单核巨噬细胞、NK细胞杀伤活性的影响均为阳性,表明其具有免疫增强功能。CGIa和CGIIa能促进正常小鼠免疫细胞分泌TNF-α、IFN-γ、IL-2和NO细胞因子。免疫功能的增强可能是通过促进细胞因子的分泌实现的。

近江牡蛎糖胺聚糖降血糖及抗凝血活性研究

以近江牡蛎糖为原料,经酶解制得牡蛎糖胺聚糖粗制品,进行体外降血糖及抗凝血活性研究。根据不同浓度牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用效果,选出抑制作用效果最佳的浓度,测定在不同反应时间的抑制作用效果以及对酶的动力学测定;采用鲫鱼血作为血浆,以体外抗凝血原时间和抗凝血复钙时间来进行牡蛎糖胺聚糖的体外抗凝血评价。结果表明:牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶活性具有一定抑制作用,最佳浓度为0.4 mg/mL,抑制率最高达到43.68%;作用时间10min抑制率达到最大,抑制率为66.7%;由动力学试验判断出牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶的抑制类型为反竞争性抑制;牡蛎糖胺聚糖浓度为1 mg/mL时,抗凝血原时间与阳性对照肝素钠(0.1 mg/mL)的抗凝血原时间等效,同时使凝血的复钙时间的增加,呈现出非常好的抗凝血效果及性能。